Treatment of cDNA endsBlunt end lig

Treatment of cDNA ends
Blunt end ligation of large fragment is not efficient, so we have to use special acid linkers to create sticky ends for cloning.
The process
Move protruding 3’-ends(strand-special nuclease)
Fill in missing 3’ nucleotide (klenow fragment of
DNA polyI and 4 dNTPs)
Ligate the blunt-end and linkers(T4 DNA ligase)
Restriction enzyme digestion (E.coRI )
Tailing with terminal transferase or using adaptor molecules

Kết quả (Việt) 1:

Điều trị kết thúc cDNACuối cùn ligation của mảnh lớn là không hiệu quả, vì vậy chúng tôi có thể sử dụng đặc biệt axit linkers để tạo ra các kết thúc dính cho nhân bản.Quá trìnhDi chuyển nhô ra 3'-ends(strand-special nuclease)Điền vào thiếu 3' nucleotide (klenow mảnhDNA polyI và 4 dNTPs)Ligate kết thúc cùn và linkers (T4 DNA ligase)Hạn chế enzyme tiêu hóa (E.coRI)Tailing với thiết bị đầu cuối transferase hoặc bằng cách sử dụng phân tử adaptor

Kết quả (Việt) 2:

Điều trị cDNA kết thúc
Blunt cuối thắt của mảnh lớn là không hiệu quả, vì vậy chúng ta phải sử dụng các trình liên kết axit đặc biệt để tạo ra đầu dính cho nhân bản.
Quá trình
Move nhô 3'-kết thúc (sợi-đặc biệt nuclease)
Điền thiếu 3 'nucleotide ( klenow mảnh
DNA polyI và 4 dNTP)
Ligate sự cùn cấp và các mối liên kết (T4 DNA ligase)
enzyme hạn chế tiêu hóa (E.coRI)
Tailing với transferase thiết bị đầu cuối hoặc sử dụng các phân tử chuyển đổi