Scratch or wound assay5| The scratc

Scratch or wound assay
5| The scratch assay can be performed on either native cells (A) or transfected cells (B) to study the effect of specific proteins overexpression (or knockdown) on cell migration.
(A) Scratch assay on non-transfected cells
(i) Scrape the cell monolayer in a straight line to create a ‘‘scratch’’ with a p200 pipet tip. Remove the debris and smooth the edge of the scratch by washing the cells once with 1 ml of the growth medium and then replace with 5 ml of medium specific for thein vitro scratch assay.
mCRITICAL STEPIt is important to create scratches of approximately similar size in the assessed cells and control cells to minimize any possible variation caused by the difference in the width of the scratches.
(ii) To obtain the same field during the image acquisition, create markings to be used as reference points close to the scratch. The reference points can be made by etching the dish lightly with a razor blade on the outer bottom of the dish or with an ultrafine tip marker. After the reference points are made, place the dish under a phase-contrast microscope, and
leave the reference mark outside the capture image field but within the eye-piece field of view. Acquire the first image of the scratch.

Kết quả (Việt) 1:

Trầy xước hoặc vết thương khảo nghiệm5| Các khảo nghiệm đầu có thể được thực hiện trên một trong hai tế bào gốc (A) hoặc transfected các tế bào (B) để nghiên cứu tác dụng của protein cụ thể tế (hoặc knockdown) trên di động di chuyển.(A) đầu khảo nghiệm về phòng không transfected tế bào (i) scrape monolayer di động trong một đường thẳng để tạo ra một vết xước '''' với một tip pipet p200. Loại bỏ các mảnh vỡ và mịn các cạnh của đầu bằng cách rửa các tế bào một lần với 1 ml của các phương tiện phát triển và sau đó thay thế với 5 ml của phương tiện cụ thể cho khảo nghiệm đầu thein ống nghiệm.mCRITICAL STEPIt là quan trọng để tạo ra các vết trầy xước kích thước xấp xỉ tương tự trong các tế bào đánh giá và kiểm soát các tế bào để giảm thiểu bất kỳ biến thể có thể gây ra bởi sự khác biệt trong chiều rộng của các vết trầy xước.(ii) để có được cùng một lĩnh vực trong việc mua lại hình ảnh, tạo ra ký hiệu được sử dụng như là điểm tham chiếu gần đầu. Các điểm tham chiếu có thể được thực hiện bởi khắc các món ăn nhẹ với một lưỡi dao cạo trên dưới cùng bên ngoài của món ăn hoặc với một điểm đánh dấu ultrafine Mẹo. Sau khi điểm tham chiếu được thực hiện, đặt món ăn dưới một kính hiển vi giai đoạn-tương phản, vàđể lại nhãn hiệu tham khảo bên ngoài trường chụp hình ảnh nhưng trong lĩnh vực xem mắt-mảnh. Có được hình ảnh đầu tiên của đầu.

Kết quả (Việt) 2:

Scratch hay vết thương khảo nghiệm
5 | Thử nghiệm đầu có thể được thực hiện ở hai tế bào gốc (A) hoặc các tế bào transfected (B) để nghiên cứu tác động của các protein cụ thể biểu hiện quá mức (hay knockdown) về di cư tế bào.
(A) Scratch khảo nghiệm trên phi transfected tế bào
(i) Cạo lớp tế bào tế bào trong một đường thẳng để tạo ra một '' đầu '' với một tip P200 Pipet. Hủy bỏ các mảnh vỡ và mịn các cạnh của đầu bằng cách rửa sạch các tế bào một lần với 1 ml môi trường tăng trưởng và sau đó thay thế bằng 5 ml cụ thể vừa cho Thein vitro đầu khảo nghiệm.
mCRITICAL STEPIt là quan trọng để tạo ra các vết trầy xước có kích thước xấp xỉ tương tự như trong tế bào đánh giá và kiểm soát các tế bào để giảm thiểu bất kỳ sự thay đổi có thể gây ra bởi sự khác biệt trong chiều rộng của các vết trầy xước.
(ii) Để có được cùng một lĩnh vực trong thời gian thu nhận hình ảnh, tạo ra những mảng được sử dụng như là điểm tham chiếu gần với đầu. Các điểm tham chiếu có thể được thực hiện bằng cách ăn mòn các món ăn nhẹ với một lưỡi dao cạo trên dưới cùng bên ngoài của các món ăn hoặc với một điểm đánh dấu tip siêu mịn. Sau khi các điểm tham chiếu được thực hiện, đặt các món ăn dưới kính hiển vi tương phản pha, và
rời khỏi mốc tham chiếu bên ngoài lĩnh vực chụp ảnh, nhưng trong các lĩnh vực mắt mảnh của xem. Có được những hình ảnh đầu tiên của mẻ.