Fig 4. Targeting of HCMV by single

Fig 4. Targeting of HCMV by single gRNAs directed against essential genes selects for viral escape mutants after prolonged culture.
a) Sequence analysis of HCMV-eGFP variants present after 21 days of culturing in anti-UL57 and UL70 gRNA-expressing cells. The sequences of mutant variants were assessed and the percentage of these that contain in frame-shift mutations at the target site are presented. Genomic DNA was amplified by PCR and subjected to 454 sequencing. Sequences of HCMV variants upon CRISPR/Cas9 targeting of the nonessential HCMV genes US7 and US11 were derived at two days post infection. Number of sequences analyzed: 333 for US7, 331 for US11, 319 for UL57, and 541 for UL7. Bar diagrams are derived from a single 454 sequencing experiment. b and c)Commonly sequenced variants are depicted for UL57 #1 and UL70 #4. The gRNA-target site is displayed in bold, the PAM sequence as red underlined text, and the cleavage site as a triangle. The number of reads per variant is indicated.

Kết quả (Việt) 1:

Hình 4. Mục tiêu của HCMV bởi gRNAs đơn nhằm chống lại các gen cần thiết chọn cho virus thoát đột sau văn hóa kéo dài.a) trình tự các phân tích của các biến thể HCMV-eGFP mặt sau 21 ngày nuôi anti-UL57 và UL70 các tế bào gRNA thể hiện. Trình tự của các đột biến phiên bản đã được đánh giá và tỷ lệ phần trăm này mà chứa trong khung thay đổi đột biến tại các trang web mục tiêu được trình bày. Gen DNA được khuyếch đại bởi PCR và phải chịu sự sắp 454. Trình tự của các biến thể HCMV khi CRISPR/Cas9 nhắm mục tiêu của các gen không thiết yếu HCMV US7 và US11 đã xuất phát tại hai ngày đăng nhiễm trùng. Số trình tự phân tích: 333 cho US7, 331 cho US11, 319 cho UL57 và 541 cho UL7. Bar sơ đồ có nguồn gốc từ một thử nghiệm đơn 454 trình tự. b và c) thường nói các phiên bản được mô tả cho UL57 #1 và UL70 #4. Các trang web mục tiêu gRNA sẽ được hiển thị ở dạng chữ đậm, PAM tự như văn bản gạch chân màu đỏ, và cleavage trang web như là một hình tam giác. Số lần đọc mỗi phiên bản được chỉ định.

Kết quả (Việt) 2:

Hình 4. Nhắm mục tiêu của HCMV bởi gRNAs đơn chống lại gen thiết yếu chọn cho đột biến thoát virus sau khi kéo dài văn hóa.
A) phân tích trình tự của HCMV-EGFP biến thể hiện sau 21 ngày nuôi cấy trong chống UL57 và UL70 tế bào gRNA diễn đạt. Các trình tự của các biến thể đột biến được đánh giá và tỷ lệ phần trăm của những đột biến có chứa trong frame-ca tại trang web mục tiêu được trình bày. ADN hệ gen được khuếch đại bằng PCR và chịu 454 trình tự. Trình tự của các biến thể HCMV khi CRISPR / Cas9 nhắm mục tiêu của các gen không cần thiết HCMV US7 và US11 được lấy tại hai ngày sau nhiễm trùng. Số trình tự phân tích: 333 cho US7, 331 cho US11, 319 cho UL57, và 541 cho UL7. Sơ đồ thanh có nguồn gốc từ một thử nghiệm 454 trình tự duy nhất. b và c) biến thể thường trình tự được mô tả cho UL57 # 1 và # 4 UL70. Các trang web gRNA mục tiêu được hiển thị in đậm, dãy PAM là màu đỏ gạch dưới văn bản, và vị trí phân cắt như một hình tam giác. Số lượt đọc mỗi biến thể được chỉ định.