Application Note 112 1Determination

Application Note 112 1
Determination of Nitrate and Nitrite in Meat
Using High-Performance Anion-Exchange
Chromatography
Application Note 112
EQUIPMENT
Dionex DX-500 chromatography system consisting of:
GP50 Gradient Pump
AD25 UV/Visible Absorbance Detector
LC20 Enclosure
AS40 Autosampler
PeakNet Chromatography Workstation
Scovill Hamilton Beach Blender
Beckman Spinchron R Centrifuge
MATERIALS
Sodium hydroxide, 50% w/w (Fisher Scientific)
Sodium nitrate (Fisher Scientific)
Sodium nitrite (Fisher Scientific)
Whatman Filters (Whatman)
Sterile Acrodisc Syringe Filters, 1.2 and 0.2 mm
(Gelman Sciences)
CONDITIONS
Column: IonPac® AS11 (4 x 250 mm) and
AG11 guard (4 x 50 mm)
Injection Volume: 25 µL
Flow Rate: 1 mL/min
Detection: UV, 225 nm
Eluent A: 50 mM Sodium hydroxide
Eluent B: Deionized water
Eluent C: 100 mM Sodium hydroxide
INTRODUCTION
Nitrate and nitrite are usually added to processed
meat products to protect against microorganisms that
can cause food poisoning, such as Clostridium botulinum.
1-3 However, nitrite can react with secondary
amines to form nitrosoamines, a class of carcinogenic
compounds, in food products or in the digestive system.
Nitrate, although more stable than nitrite, can act as a
reservoir for nitrite. Also, nitrate can readily be converted
into nitrite by microbial reduction.4,5 Thus, both
nitrate and nitrite must be monitored to ensure the
quality and safety of meat products. This Application
Note describes an accurate and sensitive method in
which nitrate and nitrite are extracted from meat
products and then determined directly using anion
exchange chromatography with UV detection. Commercially
available ham and salami were used as model
samples.
Several HPLC methods have been developed to
analyze for nitrate and nitrite in meat. However, these
methods require lengthy sample processing or pretreatment
steps, such as adding protein precipitation procedures
after extraction or using reversed-phase cartridges to
remove sample matrix interferences. 6-9 Unlike most other
HPLC techniques, the method described in this note does
not require the use of protein precipitating reagents. In
addition, a reversed-phase or ion-exchange pretreatment
cartridge is not needed because a 5-min, 100 mM sodium
hydroxide wash step in the chromatographic procedure is
sufficient to remove bound proteins and other sample
matrix interferences.
Determination of Nitrate and Nitrite in Meat Using
High-Performance Anion-Exchange Chromatography
Method
Time (min) Eluent A (%) Eluent B (%) Eluent C (%)
0.0 10 90 0
10.0 10 90 0
10.1 0 0 100
15.0 0 0 100
15.1 10 90 0
25.0 10 90 0
Calibration Curves
Calibration curves for nitrate and nitrite were
generated by plotting the peak areas against the concentrations
of the standards injected. For nitrate, nine
different con-centrations between 50 µg/L (500 µg/kg)
and 375 mg/L (3.75 g/kg) were used. For nitrite, nine
different concen-trations between 30 µg/L (300 µg/kg)
and 300 mg/L (3.00 g/kg) were used. At least two peak
area data points were collected per order of magnitude.
Each data point was an average of duplicate injections.
PREPARATION OF SAMPLES AND SOLUTIONS
Eluent A: 50 mM Sodium hydroxide
Filter 1.0 L of deionized water through a 0.2 µm
filter. Then vacuum degas the deionized water for
5 min. Add 2.5 mL of 50% w/w sodium hydroxide to the
1.0 L of degassed water.
Eluent B: Deionized water
Filter 1.0 L of deionized water through a 0.2 µm
filter.
Eluent C: 100 mM Sodium hydroxide
Filter 1.0 L of deionized water through a 0.2 µm
filter. Then vacuum degas the deionized water for 5 min.
Add 5.0 mL of 50% w/w sodium hydroxide to the 1.0 L
of degassed water.
Nitrate Stock Solution
Dissolve 137 mg of sodium nitrate in 100 mL of
deionized water to make up a 1-g/L stock solution.
Nitrite Stock Solution
Dissolve 150 mg of sodium nitrite in 100 mL of
deionized water to make up a 1-g/L stock solution.
Column: IonPac AS11
Eluent: 5 mM Sodium hydroxide
Flow Rate: 1 mL/min
Inj. Volume: 25 µL
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrite 10 mg/L
2. Nitrate 12
Figure 1 Separation of nitrate and nitrite standards. Amount
injected: 12 mg/L nitrate and 10 mg/L nitrite; injection volume:
25 µL.
Column: IonPac AS11
Eluent: 5 mM Sodium hydroxide
Flow Rate: 1 mL/min
Inj. Volume: 25 µL
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrite 1.16 mg/L
2. Nitrate 0.54
Figure 2 Separation of nitrate and nitrite from ham. Injection
volume: 25 µL.
Column: IonPac AS11
Eluent: 5 mM Sodium hydroxide
Flow Rate: 1 mL/min
Inj. Volume: 25 µL
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrite 9.85 mg/L
2. Nitrate 10.8
Figure 3 Separation of nitrate and nitrite from salami. The
extract was diluted fourfold before injection; injection volume:
25 µL.
0 5
-0
0.2
AU
Minutes
1
2
10
0
-.01
.02
AU
5 10
Minutes
1
2
0
0 5
.025
AU
Minutes
10
-.000
1
2
12621
12622
12623
Application Note 112 3
Extraction Procedure
Weigh 10.0 g of ham or salami and transfer to a
blender. Add 100 mL of deionized water to the meat
sample. Liquify the meat sample in t

Kết quả (Việt) 1:

Ứng dụng ghi chú 112 1Xác định nitrat và nitrit trong thịtBằng cách sử dụng hiệu suất cao Anion-trao đổiSắc kýLưu ý ứng dụng 112THIẾT BỊHệ thống sắc ký Dionex DX-500 bao gồm:GP50 Máy bơm GradientAD25 Máy dò hấp thu tia UV/có thể nhìn thấyLC20 bao vâyAS40 AutosamplerSắc kí PeakNet WorkstationMáy xay sinh tố Scovill Hamilton BeachMáy ly tâm Beckman Spinchron RVẬT LIỆUNatri hydroxit, 50% w/w (Fisher khoa học)Natri nitrat (Fisher khoa học)Natri nitrit (Fisher khoa học)Bộ lọc tráng nhựa Whatman (tráng nhựa Whatman)Bộ lọc ống tiêm vô trùng của Acrodisc, 1.2 và cách 0.2 mm(Gelman khoa học)ĐIỀU KIỆNCột: IonPac® AS11 (4 x 250 mm) vàAG11 bảo vệ (4 x 50 mm)Khối lượng tiêm: 25 MLTốc độ dòng chảy: 1 mL/minPhát hiện: Tia cực tím, 225 nmEluent A: 50 mM hydroxit natriEluent B: Deionized nướcEluent C: 100 mM hydroxit natriGIỚI THIỆUNitrat và nitrit được thường được thêm vào để chế biếnCác sản phẩm thịt để bảo vệ chống lại các vi sinh vật màcó thể gây ra ngộ độc thực phẩm, chẳng hạn như Clostridium botulinum.1-3 Tuy nhiên, nitrit có thể phản ứng với Trungamin để hình thức nitrosoamines, một lớp các chất gây ung thưhợp chất trong thực phẩm hoặc trong hệ thống tiêu hóa.Nitrat, mặc dù nhiều ổn định hơn nitrit, có thể hoạt động như mộtHồ chứa cho nitrit. Ngoài ra, nitrat có thể dễ dàng được chuyển đổithành nitrit bởi vi khuẩn reduction.4,5 vì vậy, cả hainitrat và nitrit phải được giám sát để đảm bảo cácchất lượng và an toàn của các sản phẩm thịt. Ứng dụng nàyLưu ý mô tả một phương pháp chính xác và nhạy cảm trongCác nitrat và nitrit được chiết xuất từ thịtsản phẩm và sau đó xác định trực tiếp sử dụng aniontrao đổi các sắc ký với UV phát hiện. Thương mạisẵn có ham và xúc xích được sử dụng như là mô hìnhmẫu.Một số phương pháp HPLC đã được phát triển đểphân tích cho nitrat và nitrit trong thịt. Tuy nhiên, nhữngphương pháp yêu cầu xử lý dài mẫu hoặc pretreatmentbước, như thêm protein mưa thủ tụcsau khi khai thác hoặc sử dụng pha đảo ngược hộp mực đểloại bỏ mẫu ma trận nhiễu. 6-9 không giống như hầu hết các khácHệ HPLC kỹ thuật, phương pháp được diễn tả trong lưu ý này nàokhông đòi hỏi việc sử dụng các chất phản ứng kết tủa protein. ỞNgoài ra, giai đoạn đảo ngược hoặc trao đổi ion pretreatmentmực không cần vì một 5-phút, 100 mM natrihydroxit rửa bước trong quy trình chromatographic làđủ để loại bỏ các protein ràng buộc và mẫu khácma trận nhiễu.Xác định nitrat và nitrit trong thịt bằng cách sử dụngSắc kí hiệu suất cao Anion-trao đổiPhương phápThời gian (phút) Eluent (%) Eluent B (%) Eluent C (%)0.0 10 90 010,0 10 90 010,1 0 0 10015.0 0 0 10015.1 10 90 025.0 10 90 0Đường cong hiệu chuẩnĐường cong hiệu chuẩn cho nitrat và nitritđược tạo ra bằng cách vẽ các lĩnh vực đỉnh cao so với nồng độtiêu chuẩn tiêm. Cho nitrat, chíncôn-centrations khác nhau giữa 50 μg/L (500 μg/kg)và 375 mg/L (3.75 g/kg) được sử dụng. Cho nitrit, chínconcen-trations khác nhau giữa 30 µg L (300 µg/kg)và 300 mg/L (3,00 g/kg) được sử dụng. Ít nhất hai đỉnh caotích điểm dữ liệu được thu thập cho mỗi đơn đặt hàng của cường độ.Mỗi điểm dữ liệu là mức trung bình của tiêm trùng lặp.CHUẨN BỊ MẪU VÀ CÁC GIẢI PHÁPEluent A: 50 mM hydroxit natriBộ lọc nước deionized thông qua một cách 0.2 μm 1.0 Lbộ lọc. Sau đó máy hút degas nước deionized chotối thiểu 5 thêm 2,5 mL 50% w/w natri hydroxit để các1.0 L degassed nước.Eluent B: Deionized nướcBộ lọc nước deionized thông qua một cách 0.2 μm 1.0 Lbộ lọc.Eluent C: 100 mM hydroxit natriBộ lọc nước deionized thông qua một cách 0.2 μm 1.0 Lbộ lọc. Sau đó máy hút degas nước deionized trong 5 phút.Thêm 5.0 mL 50% w/w natri hydroxit 1.0 Ldegassed nước.Giải pháp cổ nitratHòa tan 137 mg natri nitrat trong 100 mLdeionized nước để tạo thành một giải pháp cổ phần 1-g/L.Giải pháp cổ nitritHòa tan 150 mg natri nitrit trong 100 mLdeionized nước để tạo thành một giải pháp cổ phần 1-g/L.Cột: IonPac AS11Eluent: 5 mM hydroxit natriTốc độ dòng chảy: 1 mL/minInj. dung tích: 25 MLPhát hiện: Tia cực tím, 225 nmĐỉnh núi: 1. nitrit 10 mg/L2. nitrat 12Hình 1 tách nitrat và nitrit tiêu chuẩn. Số lượngtiêm: 12 mg/L nitrat và nitrit 10 mg/L; khối lượng tiêm:25 ML.Cột: IonPac AS11Eluent: 5 mM hydroxit natriTốc độ dòng chảy: 1 mL/minInj. dung tích: 25 MLPhát hiện: Tia cực tím, 225 nmĐỉnh núi: 1. nitrit 1,16 mg/L2. nitrat 0,54Hình 2 tách nitrat và nitrit từ ham. Tiêmthể tích: 25 ml.Cột: IonPac AS11Eluent: 5 mM hydroxit natriTốc độ dòng chảy: 1 mL/minInj. dung tích: 25 MLPhát hiện: Tia cực tím, 225 nmĐỉnh núi: 1. nitrit 9.85 mg/L2. nitrat 10.8Hình 3 tách nitrat và nitrit từ xúc xích. Cácchiết xuất được pha loãng số trước khi tiêm; khối lượng tiêm:25 ML.0 5-00,2AUPhút12100-.01.02AU5 10Phút1200 5.025AUPhút10-.00012126211262212623Lưu ý ứng dụng 112 3Thủ tục khai thácNặng 10,0 g ham hoặc salami và chuyển đến mộtMáy xay sinh tố. Thêm 100 mL nước deionized thịtmẫu. Liquify mẫu thịt trong t

Kết quả (Việt) 2:

Application Note 112 1
Xác định nitrat và nitrit trong thịt
Sử dụng hiệu suất cao Anion-Exchange
Sắc ký
Application Note 112
THIẾT BỊ
Dionex hệ thống sắc ký DX-500 bao gồm:
GP50 Gradient bơm
AD25 UV / Visible hấp thụ Detector
LC20 Enclosure
AS40 mẫu tự động
PeakNet Sắc ký Workstation
Scovill Hamilton bãi biển Blender
Beckman Spinchron R ly tâm
LIỆU
Sodium hydroxide, 50% w / w (Fisher Scientific)
Natri nitrat (Fisher Scientific)
Sodium nitrite (Fisher Scientific)
Bộ lọc Whatman (Whatman)
vô trùng Acrodisc Syringe lọc, 1.2 và 0.2 mm
(Gelman Sciences)
ĐIỀU KIỆN
cột: IonPac® AS11 (4 x 250 mm) và
AG11 bảo vệ (4 x 50 mm)
ép Khối lượng: 25 ml
Tốc độ dòng: 1 ml / phút
Detection: UV, 225 nm
rửa giải A: 50 mM sodium hydroxide
dung dịch rửa giải B: nước khử Ion hóa
rửa giải C: 100 mM sodium hydroxide
GIỚI THIỆU
Nitrat và nitrit thường được thêm vào để chế biến
các sản phẩm thịt để bảo vệ chống lại các vi sinh vật
. có thể gây ra ngộ độc thực phẩm, chẳng hạn như vi khuẩn Clostridium botulinum
1-3 Tuy nhiên, nitrit có thể phản ứng với thứ
amin để tạo thành nitrosoamines, một lớp học các chất gây ung thư
các hợp chất, trong các sản phẩm thực phẩm hoặc trong hệ thống tiêu hóa.
Nitrate, mặc dù ổn định hơn nitrite, có thể hoạt động như một
hồ chứa cho nitrit. Ngoài ra, nitrat có thể dễ dàng được chuyển đổi
thành nitrit bởi reduction.4,5 vi khuẩn Như vậy, cả hai
nitrat và nitrit phải được giám sát để đảm bảo
chất lượng và an toàn của các sản phẩm thịt. Ứng dụng này
Lưu ý mô tả một phương pháp chính xác và nhạy cảm trong
đó nitrate và nitrite được chiết xuất từ thịt
sản phẩm và sau đó xác định trực tiếp sử dụng anion
sắc ký trao đổi với UV phát hiện. Thương mại
ham sẵn và xúc xích được sử dụng như là mô hình
mẫu.
Một số phương pháp HPLC đã được phát triển để
phân tích cho nitrat và nitrit trong thịt. Tuy nhiên, những
phương pháp yêu cầu xử lý mẫu hoặc tiền xử lý dài
bước, chẳng hạn như thêm thủ tục kết tủa protein
sau khi khai thác hoặc sử dụng hộp mực giai đoạn đảo ngược để
loại bỏ nhiễu ma trận mẫu. 6-9 Không giống như hầu hết các
kỹ thuật HPLC, các phương pháp mô tả trong báo cáo này
không đòi hỏi việc sử dụng các thuốc thử protein kết tủa. Trong
Ngoài ra, một giai đoạn đảo ngược hoặc trao đổi ion tiền xử lý
cartridge là không cần thiết vì một 5-min, 100 mM sodium
hydroxide rửa bước trong thủ tục sắc ký là
đủ để loại bỏ protein ràng buộc và mẫu khác
nhiễu ma trận.
Xác định nitrat và nitrit trong thịt Sử dụng
hiệu suất cao Anion-Exchange Sắc
Phương pháp
Thời gian (phút) rửa giải A (%) chất rửa giải B (%) chất rửa giải C (%)
0.0 10 90 0
10,0 10 90 0
10,1 0 0 100
15,0 0 0 100
15,1 10 90 0
25.0 10 90 0
Calibration Curves
đường cong hiệu chuẩn cho nitrate và nitrite được
tạo ra bằng cách vẽ các khu vực đỉnh so với nồng độ
của các tiêu chuẩn tiêm. Đối với nitrat, chín
con-centrations khác nhau giữa 50 mg / L (500 mg / kg)
và 375 mg / L (3,75 g / kg) đã được sử dụng. Đối với nitrit, chín
concen-trations khác nhau giữa 30 mg / L (300 mg / kg)
và 300 mg / L (3,00 g / kg) đã được sử dụng. Ít nhất hai đỉnh
khu vực các điểm dữ liệu được thu thập mỗi thứ tự cường độ.
Mỗi điểm dữ liệu là một trung bình của tiêm trùng lặp.
CHUẨN BỊ MẪU VÀ GIẢI PHÁP
rửa giải A: 50 mM sodium hydroxide
Lọc 1,0 L nước cất qua 0,2 micron
lọc. Sau đó, chân không Degas nước khử ion cho
5 phút. Thêm 2,5 ml dung dịch 50% w / w sodium hydroxide với
1,0 lít nước loại khí.
Rửa giải B: Deionized nước
lọc 1.0 L nước cất qua 0,2 micron
lọc.
Rửa giải C: 100 mM sodium hydroxide
Lọc 1,0 L nước cất qua 0,2 micron
lọc. Sau đó, chân không Degas nước khử ion trong 5 phút.
Thêm 5,0 ml dung dịch 50% w / w sodium hydroxide với 1,0 L
nước loại khí.
Giải pháp Cổ Nitrate
Hòa tan 137 mg natri nitrat trong 100 ml
nước khử ion, tạo nên một 1- g / giải pháp chứng khoán L.
giải pháp cổ nitrit
Hòa tan 150 mg natri nitrit trong 100 ml
nước khử ion, tạo nên một 1 g / L dung dịch.
Cột: IonPac AS11
ngâm rửa: 5 mM sodium hydroxide
Lưu lượng: 1 ml / phút
inj. Khối lượng: 25 ml
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrit 10 mg / L
2. Nitrate 12
Hình 1 Tách tiêu chuẩn nitrat và nitrit. Số tiền
tiêm: 12 mg / L nitrat và 10 mg / L nitrit; : khối lượng tiêm
25 ml.
Cột: IonPac AS11
ngâm rửa: 5 mM sodium hydroxide
Lưu lượng: 1 ml / phút
Inj. Khối lượng: 25 ml
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrit 1,16 mg / L
2. Nitrate 0,54
Hình 2 Tách nitrat và nitrit từ ham. Tiêm
25 ml: khối lượng.
Cột: IonPac AS11
ngâm rửa: 5 mM sodium hydroxide
Lưu lượng: 1 ml / phút
Inj. Khối lượng: 25 ml
Detection: UV, 225 nm
Peaks: 1. Nitrit 9,85 mg / L
2. Nitrate 10,8
Hình 3 Tách nitrat và nitrit từ xúc xích. Các
chiết xuất được pha loãng gấp bốn lần trước khi tiêm; Thể tích tiêm:
. 25 ml
0 5
-0
0,2
AU
Phút
1
2
10
0
-.01
.02
AU
5 10
Phút
1
2
0
0 5
0,025
AU
Phút
10
-.000
1
2
12.621
12.622
12.623
ứng dụng Lưu ý 112 3
Extraction Procedure
Cân 10,0 g ham hoặc xúc xích và chuyển giao cho một
máy xay sinh tố. Thêm 100 ml nước cất để thịt
mẫu. Hóa lỏng các mẫu thịt trong t