We have isolated and purified Soap

We have isolated and purified Soap Nut Trypsin Inhibitor (SNTI) by acetone fractionation, ammonium sulphate precipitation, ion exchange and gel permeation chromatography. The purified inhibitor was homogeneous by both gel filtration and polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). SNTI exhibited a molecular weight of 29 kDa on SDS-PAGE, gel filtration and was negative to Periodic Acid Schiff’s stain. SNTI inhibited trypsin and pronase of serine class. SNTI demonstrated non-competitive inhibition with a Ki value of 0.75 ± 0.05×10-10 M. The monoheaded inhibitor formed a stable complex in 1:1 molar ratio. Action of SNTI was computationally evaluated on larval gut proteases from Helicoverpa armigera and Spodoptera frugiperda. SNTI and larval gut proteases were modeled and docked using Schrodinger software. Docking studies revealed strong hydrogen bond interactions between Lys10 and Pro71, Lys299 and Met80 and Van Der Waals interactions between Leu11 and Cys76amino acid residues of SNTI and protease from H. Armigera. Strong hydrogen bonds were observed between SNTI and protease of S. frugiperda at positions Thr79 and Arg80, Asp90 and Gly73, Asp2 and Gly160 respectively.

Kết quả (Việt) 2:

Chúng tôi đã phân lập và tinh khiết Soap Nut Trypsin chất ức chế (SNTI) bằng acetone phân đoạn, amoni sunfat kết tủa, trao đổi ion và sắc ký gel thấm. Các chất ức chế tinh chế đồng nhất của hai quá trình lọc gel và gel polyacrylamide điện (TRANG). SNTI trưng bày một trọng lượng phân tử 29 kDa trên SDS-PAGE, lọc gel và là tiêu cực để vết kỳ Acid Schiff. SNTI ức chế trypsin và pronase của lớp serine. SNTI chứng minh ức chế không cạnh tranh với một giá trị Ki là 0,75 ± 0,05 × 10-10 M. monoheaded chất ức chế hình thành một phức hợp ổn định ở tỷ lệ 1: 1 mol. Hành động của SNTI đã được tính toán đánh giá trên các protease ruột ấu trùng từ Helicoverpa armigera và Spodoptera frugiperda. SNTI và protease ruột ấu trùng đã được mô hình hóa và cập cảng sử dụng phần mềm Schrodinger. Nghiên cứu Docking tiết lộ tương tác liên kết hydro mạnh mẽ giữa Lys10 và Pro71, Lys299 và Met80 và Van Der Waals tương tác giữa Leu11 và Cys76amino dư lượng axit của SNTI và protease từ H. armigera. Liên kết hydro mạnh mẽ đã được quan sát giữa SNTI và protease của S. frugiperda tại các vị trí Thr79 và Arg80, Asp90 và Gly73, Asp2 và Gly160 tương ứng.