DNA was isolated from GUS positive

DNA was isolated from GUS positive plants using CTAB
method [15]. PCR screening of putative transformants was performed using specific primers for Cry 2Ab gene. The plasmid
was used as a positive control. The sequences of forward and
reverse primers were 5 0CATTCAGCTTCCAGCACAAGA
GCC3 0; and 5 0TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3 0,
respectively. The PCR mixture were performed in a total volume of 25 ll (1.0 ll of 10 mM dNTPs, 5.0 ll 10 · buffer, containing MgCl2, 2.0 ll of 50-ng/ ll template DNA, 0.4 ll of
Taq polymerase, 1.0 ll of 70 pmol from each primer and
14.6 ll sterile distilled water). Amplification is accomplished
through a Thermal Cycler (Biometra, Germany), using first
one incubation at 94 C for 5 min and the step cycle program
set to denaturant at 94 C for 30 s, to anneal at 56 C for 50 s
and then extended at 72 C for 75 s for a total of 30 cycles; after
that, an extra step of extension at 72 C for 10 min was
performed

Kết quả (Việt) 1:

DNA là bị cô lập từ GUS tích cực thực vật bằng cách sử dụng CTABphương pháp [15]. Đảng Cộng sản Romania kiểm tra của transformants giả định được thực hiện bằng cách sử dụng cụ thể chất nền, mồi cho khóc 2Ab gen. Plasmidđược sử dụng như là một điều khiển tích cực. Trình tự của các chuyển tiếp vàchất nền, mồi đảo ngược là 5 0CATTCAGCTTCCAGCACAAGAGCC3 0; và 5 0TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3 0,tương ứng. Hỗn hợp của Đảng Cộng sản Romania đã được thực hiện ở tất cả diện tích 25 ll (1.0 ll 10 mM dNTPs, 5.0 ll 10 · đệm, có chứa MgCl2, 2.0 ll 50-ng / ll mẫu DNA, 0.4 ll củaTaq polymerase, 1.0 ll 70 pmol từ mỗi mồi và14,6 ll vô trùng nước cất). Khuếch đại được thực hiệnthông qua một người đạp xe máy nhiệt (Biometra, Đức), sử dụng đầu tiênchu kỳ một ấp trứng tại 94 C cho 5 phút và bước đầu chương trìnhthiết lập để denaturant tại 94 C cho 30 s, để trui thép tại 56 C cho 50 svà sau đó mở rộng ở 72 C cho 75 s tổng cộng 30 chu kỳ; sau khirằng, một bước phụ của tiện ích mở rộng ở 72 C cho 10 phútthực hiện

Kết quả (Việt) 2:

DNA được phân lập từ cây GUS tích cực sử dụng CTAB
phương pháp [15]. Sàng lọc PCR của biến nạp được giả định đã được thực hiện bằng cách sử dụng cặp mồi đặc hiệu cho gen Cry 2Ab. Các plasmid
đã được sử dụng như một điều khiển tích cực. Các đoạn chuyển tiếp và
đảo ngược mồi là 5 0CATTCAGCTTCCAGCACAAGA
GCC3 0; và 5 0TGGGTGCCAGAGTTCAGGGTCACG3 0,
tương ứng. Hỗn hợp PCR được thực hiện trong tổng khối lượng 25 ll (1.0 ll 10 mM dNTP, 5.0 ll 10 · đệm, chứa MgCl2, 2.0 ll của 50 ng / ll mẫu DNA, 0,4 ll của
Taq polymerase, 1.0 ll của 70 pmol từ mỗi lớp sơn lót và
14,6 ll nước cất vô trùng). Khuếch đại được thực hiện
thông qua một chu trình nhiệt (Biometra, Đức), sử dụng đầu tiên
một ủ ở 94? C trong 5 phút và chương trình chu kỳ bước
thiết lập để biến tính ở 94? C trong 30 s, để bám vào 56? C cho 50 s
và sau đó mở rộng ở 72 C trong 75 s cho tổng số là 30 chu kỳ; sau
đó, thêm một bước mở rộng ở 72 C trong 10 phút được?
thực hiện