(Eppendrof Mastercycler) with the f

(Eppendrof Mastercycler) with the following conditions:
initial denaturation of 2 min at 95◦C followed by 35 cycles of
denaturation at 94◦C, annealing at 55◦C for primers 1 and
2, 54◦C for primers 3 and 4 for 30 sec, extension at 72◦C
each of 1 min 30 sec and lastly the final extension of 7 min
at 72◦C. After PCR amplification, 5 µL the PCR product was
checked on a 1.5% agarose gel to verify the amplification of
target region.
The amplified PCR fragments, namely, exon 1,
exon 2, exon 3.2, and exon 3.2 of TLR 4 gene were
digested with Dra I (5 ···TTT/AAA··· 3
), Hae III
(5 ··· GG/CC··· 3
), Hind III (5 ···A/AGCTT··· 3
),
and Hinf I (5 ··· G/ANTC··· 3
) restriction enzymes,
respectively. The reaction mixture (20 µL) for each enzyme
was kept for incubated at 37◦C for 4 hours. Restriction
fragments were resolved on 2-3% agarose gel horizontal
electrophoresis and visualized by ethidium bromide staining.
The ethidium bromide was added to the agarose gel
of 1 µL/100 mL of gel. The agarose gel electrophoresis was
performed in 1X TBE buffer at 100 volts for 30, 60, and
90 minutes till complete separation and visualization of all
fragme with that of Bubalus bubalis (EU386358) sequence to
annotate different exonic regions putatively to identify SNPs
in respective region. The partial coding DNA sequence of
bubaline TLR-4 gene (exons 1, 2, and 3) was conceptually
translated and compared with that of the Bubalus bubalis to
detect amino acid changes in buffalo TLR-4 regions included
in present study. The contiguous TLR-4 nucleotide sequence
was subjected to Basic Local Alignment Search (BLAST) at
NCBI database to determine the sequence h

Kết quả (Việt) 1:

(Eppendrof Mastercycler) với các điều kiện sau đây:Ban đầu denaturation 2 phút tại 95◦C theo chu kỳ 35denaturation tại 94◦C, ủ tại 55◦C cho chất nền, mồi 1 và2, 54◦C cho chất nền, mồi 3 và 4 cho 30 giây, phần mở rộng tại 72◦Cmỗi 1 phút 30 giây và cuối cùng là phần mở rộng cuối cùng của 7 phúttại 72◦C. Sau khi Đảng Cộng sản Romania khuếch đại, 5 ml sản phẩm PCR làkiểm tra trên một gel 1,5% agarose để xác minh khuếch đại củakhu vực mục tiêu.Các mảnh vỡ PCR khuếch đại, cụ thể là, exon 1,exon 2, exon 3.2 và exon 3.2 TLR 4 gen đãtiêu hóa với Dra tôi (5 ··· TTT/AAA··· 3), Hae III(5 ··· GG/CC··· 3), Hai III (5 ··· A/AGCTT··· 3),và Hinf tôi (5 ··· G/ANTC··· 3) enzyme giới hạn,tương ứng. Phản ứng hỗn hợp (20 ml) cho mỗi enzymđã được giữ cho ủ tại 37◦C cho 4 giờ. Hạn chếmảnh vỡ đã được giải quyết trên 2-3% agarose gel ngangđiện và hình dung bởi ethidium bromua nhuộm.Bromua ethidium đã được thêm vào agarose gel1 ml/100 ml gel. Agarose gel điệnthực hiện trong 1 X TBE đệm tại volt 100 cho 30, 60, và90 phút cho đến khi hoàn toàn tách biệt và hình dung của tất cảfragme với điều đó của trâu chi (EU386358) thứ tự đểchú thích khác nhau exonic khu vực putatively để xác định SNPsvùng tương ứng. Trình tự ADN mã hóa một phần củabubaline TLR-4 gen (exon 1, 2 và 3) là khái niệmdịch và so sánh với chi trâu đểphát hiện những thay đổi axit amin ở buffalo TLR-4 khu vực bao gồmtrong nghiên cứu hiện nay. Dãy nucleotide tiếp giáp TLR-4đã phải chịu để cơ bản địa phương liên kết tìm (BLAST) tạiCơ sở dữ liệu NCBI để xác định trình tự h

Kết quả (Việt) 2:

(Eppendrof Mastercycler) với các điều kiện sau đây:
sự biến tính ban đầu của 2 phút ở 95◦C tiếp theo là 35 chu kỳ của
sự biến tính tại 94◦C, ủ ở 55◦C cho mồi 1 và
2, 54◦C cho mồi 3 và 4 trong 30 sec, khuyến nông ở 72◦C
mỗi 1 phút 30 giây và cuối cùng là mở rộng cuối cùng của 7 min
tại 72◦C. Sau khi khuếch đại PCR, ml sản phẩm PCR 5 đã được
kiểm tra trên agarose gel 1,5% để xác minh sự khuếch đại của
khu vực mục tiêu.
Những đoạn PCR khuếch đại, cụ thể là, exon 1,
exon 2, exon 3.2, và exon 3.2 của TLR 4 gen đã được
tiêu hóa với Dra I (5 ··· TTT / AAA ···
3), Hae III
(5 ··· GG / CC ···
3), Hind III (5 ··· A / AGCTT ···
3),
và Hinf I (5 ··· G / ANTC ···
3) enzim giới hạn,
tương ứng. Hỗn hợp phản ứng (20 ml) cho mỗi enzyme
đã được giữ cho ủ ở 37◦C trong 4 giờ. Hạn chế
mảnh vỡ đã được giải quyết trên 2-3% agarose gel ngang
điện và hình dung bằng thuốc nhuộm ethidium bromide.
Các bromide ethidium đã được thêm vào gel agarose
1 ml / 100 ml gel. Các gel điện di agarose được
thực hiện trong 1X TBE đệm tại 100 volts cho 30, 60, và
90 phút cho đến khi hoàn toàn tách và trực quan của tất cả các
fragme với các Bubalus bubalis (EU386358) trình tự để
chú thích vùng exonic khác nhau putatively để xác định SNPs
trong khu vực tương ứng . Các mã trình tự DNA một phần của
bubaline TLR-4 gen (exon 1, 2, và 3) được khái niệm
dịch và so sánh với các Bubalus bubalis để
phát hiện những thay đổi axit amin ở trâu TLR-4 khu vực bao gồm
trong nghiên cứu này. Các TLR-4 chuỗi nucleotide tiếp giáp
đã phải chịu Basic Local Alignment Search (BLAST) tại
cơ sở dữ liệu NCBI để xác định trình tự h