What we now know as the comet assay

What we now know as the comet assay has its roots in work
done in the 1970s by Peter Cook and colleagues. They described
‘structures resembling nuclei but depleted of protein. . .released by
gently lysing cells in solutions containing non-ionic detergents and
high concentrations of salt’ [12]. These nucleoids, they found,
became surrounded by a halo of DNA when either irradiated with
X-rays or incubated with the intercalating dye ethidium bromide.
A model was developed in which the DNA is constrained as, in
effect, supercoiled loops attached to a nuclear skeleton or matrix or
cage, with functions such as replication proposed to occur at the
sites of attachment [13]. Relaxation of supercoiling by a SB allows a
DNA loop to expand into the halo.
Ostling and Johanson [6] were aware of this work when they
published their report of the electrophoresis of lysed cells
embedded in agarose – the first comet assay paper (though they
did not use the term, which was introduced by Olive et al. a few
years later [14]). The pH of lysis and electrophoresis buffer was
9.5, and relative tail fluorescence was measured with acridine
orange as stain. The effect of a g ray dose of about 0.2 Gy was
detectable and saturation of effect was reached at about 3 Gy.
They describe the relaxation of supercoils resulting in ‘more
pronounced migration of DNA towards the anode’. Singh et al. [7]
independently developed a similar method, but with an alkaline
unwinding step, and electrophoresis at high pH. They detected the
effect of an X-ray dose of 0.25 Gy, with saturation becoming
apparent around 2 Gy.
The comet assay in the alkaline form was quickly adopted for
use in genotoxicity testing, both in vivo and in vitro. For in vivo
work, it has the advantage that it can be applied to virtually any
tissue that can be disaggregated into single cells

Kết quả (Việt) 1:

Những gì chúng tôi bây giờ biết như khảo nghiệm sao chổi có nguồn gốc từ trong công việcthực hiện trong thập niên 1970 bởi Peter Cook và đồng nghiệp. Họ miêu tả' cấu trúc tương tự như hạt nhân nhưng cạn kiệt của protein... eleased bởinhẹ nhàng lysing các tế bào trong các giải pháp có chứa chất tẩy rửa không ion vànồng độ cao của muối ' [12]. Các nucleoids, họ tìm thấy,đã trở thành được bao quanh bởi một vầng hào quang của ADN khi một trong hai chiếu xạ vớiX-quang hoặc ủ với bromua ethidium thuốc nhuộm intercalating.Một mô hình đã được phát triển trong đó DNA đã được cố định là, trongcó hiệu lực, supercoiled vòng gắn liền với một hạt nhân xương hoặc ma trận hoặclồng, với chức năng chẳng hạn như nhân bản đề xuất để xảy ra tại cácCác trang web của tập tin đính kèm [13]. Thư giãn của supercoiling bởi một SB cho phép mộtDNA các vòng lặp để mở rộng vào halo.Ostling và Johanson [6] đã nhận thức được điều này làm việc khi họxuất bản báo cáo của họ của điện phân các tế bàonhúng trong agarose-sao chổi đầu tiên khảo nghiệm giấy (mặc dù họkhông sử dụng thuật ngữ, đã được giới thiệu bởi Olive et al. một vàinăm sau đó [14]). Độ pH của bộ đệm lysis và điện9,5, và tương đối huỳnh quang đuôi được đo với acridinecam như vết. Hiệu quả của một liều ray g của về cách 0.2 Gy làphát hiện và bão hòa của hiệu ứng đã đạt đến lúc khoảng 3 Gy.Họ mô tả sự thư giãn của supercoils dẫn đến ' thêmphát âm di cư của DNA hướng tới anode'. Singh et al. [7]độc lập phát triển một phương pháp tương tự, nhưng với một kiềmquấn cuộn bước, và điện ở pH cao. Họ phát hiện cáctác dụng của một x-quang liều 0,25 Gy, với ngày càng trở nên bão hòarõ ràng khoảng 2 Gy.Các khảo nghiệm sao chổi trong các hình thức kiềm nhanh chóng được chấp nhận chosử dụng trong genotoxicity thử nghiệm, cả hai tại vivo và trong ống nghiệm. Cho tại vivocông việc, nó có lợi thế mà nó có thể áp dụng cho hầu như bất kỳmô mà có thể được phân tách theo giới vào các tế bào duy nhất

Kết quả (Việt) 2:

Những gì chúng ta biết là khảo nghiệm sao chổi có gốc rễ của nó trong công việc
thực hiện trong những năm 1970 bởi Peter Cook và các đồng nghiệp. Họ đã mô tả
"các cấu trúc giống như hạt nhân, nhưng suy giảm của protein. . .released bởi
nhẹ nhàng lysing tế bào trong dung dịch có chứa chất tẩy rửa không ion và
nồng độ muối cao "[12]. Những nucleoids, họ tìm thấy,
trở thành bao quanh bởi một quầng sáng của DNA khi hoặc chiếu xạ với
X-quang hoặc ủ với intercalating nhuộm ethidium bromide.
Một mô hình đã được phát triển trong đó DNA là hạn như, trong
thực tế, supercoiled vòng gắn liền với một hạt nhân xương hay ma trận hay
lồng, với các chức năng như sao chép đề xuất để xuất hiện tại các
trang web của các tập tin đính kèm [13]. Nới lỏng xoắn bởi một SB cho phép một
vòng lặp DNA để mở rộng vào các quầng.
Ostling và Johanson [6] biết công việc này khi họ
công bố bản báo cáo của họ về điện của các tế bào ly giải
nhúng trong agarose - giấy sao chổi đầu tiên khảo nghiệm (mặc dù họ
không sử dụng các thuật ngữ, được giới thiệu bởi Olive et al. một vài
năm sau đó [14]). Độ pH của dung giải và điện đệm là
9,5 và đuôi tương đối huỳnh quang được đo với acridine
cam như vết. Ảnh hưởng của liều ray ag khoảng 0,2 Gy đã
phát hiện và độ bão hòa của hiệu ứng đạt được vào khoảng 3 Gy.
Họ mô tả sự thư giãn của supercoils dẫn 'hơn
rõ rệt của DNA di cư về phía anode. Singh et al. [7]
độc lập phát triển một phương pháp tương tự, nhưng với một kiềm
tháo bước, và điện di ở pH cao. Họ đã phát hiện ra
tác dụng của một liều X-ray là 0,25 Gy, với độ bão hòa trở nên
rõ ràng xung quanh 2 Gy.
Xét nghiệm sao chổi trong các hình thức kiềm đã nhanh chóng được chấp nhận cho
sử dụng trong thử nghiệm genotoxicity, cả in vivo và in vitro. Đối với trong cơ thể
làm việc, nó có lợi thế mà nó có thể được áp dụng cho hầu như bất kỳ
mô có thể được phân chia thành các tế bào đơn