Soybean transformationTransformatio

Soybean transformation
Transformation of soybean cultivar W82 was carried out as
described (Olhoft et al., 2007) with some modifications. Briefly,
disarmed Agrobacterium rhizogenes SHA17 harbouring the
appropriate pDEST binary vector was grown in YEP growth
medium containing 100 mg/L spectinomycin. To prepare the
inoculum, agrobacteria were grown at 28 °C in 400 mL YEP
medium containing 100 mg/L spectinomycin to an OD660 of 1.0-
1.5. Agrobacteria were collected by centrifugation (5000 g,
8 min) and resuspended in co-cultivation medium [0.19 Gam-
borg’s B5 salts, 30 g/L sucrose, 20 mM MES hydrated, 19
Gamborg’s vitamins, 5 lM kinetin, 0.5 mg/L gibberellic acid,
0.2 mM acetosyringone (pH 5.4)] to an OD660 of 1.5. The suspension of resuspended agrobacteria was kept at room temperature for at least 30 min before use.
Soybean explants were prepared by removing most of the
hypocotyl, one cotyledon and all preformed leaves (including the
apical meristem) from 7- to 8-day-old soybean (W82) seedlings.
After co-cultivation with the resuspended agrobacteria for
30 min, explants were transferred to petri dishes containing
co-cultivation medium (see above, but containing 4.4 mM L-
cysteine, 0.5 mM sodium thiosulfate, 0.5 mM DTT). After 5 days
at 25 °C in the dark, explants were transferred to Oasis wedges
(Oasis Grower Solutions, Kent, Ohio, U.S.A.). Explants were
placed vertically in the wedges with their residual hypocotyl part
inserted into the wedges. Wedges were watered with a solution
of 1 lM Arsenal (imazapyr). When shoots became elongated
from the infected primary leaf node region, they were separated
from the seedling and rooted individually in Oasis wedges.
Detached shoots were watered with a solution containing
Arsenal once or twice a week. When the shoots became
rooted, they were transferred to soil and grown to maturity in
the greenhouse.

Kết quả (Việt) 1:

Đậu tương biến đổiChuyển đổi của giống cây trồng đậu tương W82 được thực hiện như Mô tả (Olhoft và ctv., 2007) với một số sửa đổi. Một thời gian ngắn, giải giáp Agrobacterium rhizogenes SHA17 harbouring các thích hợp pDEST nhị phân vector đã được trồng trong sự phát triển YEP Trung bình, có chứa 100 mg/L spectinomycin. Để chuẩn bị các inoculum, agrobacteria đã được trồng ở 28 ° C ở 400 mL YEP Trung bình, có chứa 100 mg/L spectinomycin đến một OD660 của 1.0-1.5. Agrobacteria được thu thập bởi số (5000 g,8 phút) và resuspended trong môi trường đồng canh tác [0.19 trò chơi-Các muối của Borg B5, 30 g/L Sucroza, 20 mM MES ngậm nước, 19 Gamborg của vitamin, 5 lM kinetin, Axít gibberellic 0.5 mg/Lcách 0.2 mM acetosyringone (pH 5.4)] để một OD660 1.5. Đình chỉ resuspended agrobacteria đã được giữ ở nhiệt độ phòng trong ít nhất 30 phút trước khi sử dụng.Đậu tương explants đã được chuẩn bị bằng cách loại bỏ hầu hết các hypocotyl, một cotyledon và tất cả preformed lá (bao gồm cả các Mô phân sinh đỉnh) từ cây giống đậu tương 7 đến 8-ngày tuổi (W82). Sau khi đồng canh tác với agrobacteria resuspended cho30 phút, explants đã được chuyển giao cho món ăn petri có chứa đồng canh tác Trung bình (nhìn thấy ở trên, nhưng có 4.4 mM L-cysteine, 0,5 mM natri thiosunfat, 0,5 mM DTT). Sau 5 ngày ở 25 ° C trong bóng tối, explants đã được chuyển giao cho Oasis wedges (Ốc đảo nông dân trồng giải pháp, Kent, Ohio, Mỹ). Explants đã Đặt theo chiều dọc trong wedges với một phần còn lại hypocotyl của họ chèn vào wedges. Wedges được tưới nước với một giải pháp 1 lM Arsenal (imazapyr). Khi bắn trở thành thuôn dài từ vùng nút lá chính bị nhiễm bệnh, họ đã được tách ra từ cây giống và bắt nguồn từ cá nhân trong Oasis wedges. Tách ra bắn đã được tưới nước với một giải pháp có chứa Kho vũ khí một lần hoặc hai lần một tuần. Khi những cành trở thành bắt nguồn từ, họ đã được chuyển giao cho đất và phát triển để trưởng thành trong hiệu ứng nhà kính.

Kết quả (Việt) 2:

Đậu tương biến đổi
chuyển đổi các giống xoài đậu tương W82 đã được thực hiện như
mô tả (Olhoft et al., 2007) với một số sửa đổi. Tóm lại,
tước vũ khí của Agrobacterium rhizogenes SHA17 chứa chấp các
vector nhị phân pDEST thích hợp đã được trồng ở độ tăng trưởng YEP
môi trường có chứa 100 mg / L spectinomycin. Để chuẩn bị
cấy, agrobacteria được trồng ở 28 ° C trong 400 mL YEP
môi trường có chứa 100 mg / L spectinomycin một OD660 của 1.0-
1.5. Agrobacteria được thu thập bằng cách ly tâm (5000 g,
8 phút) và lơ lửng trong môi trường đồng canh tác [0.19 Gam-
Borg của muối B5, 30 g / L sucrose, 20 mM MES ngậm nước, 19
loại vitamin Gamborg, 5 LM kinetin 0,5 mg / L axit gibberellic,
0,2 mM acetosyringone (pH 5.4)] để một OD660 1,5. Việc đình chỉ agrobacteria resuspended đã được giữ ở nhiệt độ phòng trong ít nhất 30 phút trước khi sử dụng.
Cấy đậu tương đã được chuẩn bị bằng cách loại bỏ hầu hết các
hypocotyl, một lá mầm và tất cả các lá được hình thành trước (bao gồm cả các
mô phân sinh đỉnh) từ 7 đến 8 ngày tuổi đậu tương (W82) cây con.
Sau khi đồng canh tác với agrobacteria resuspended cho
30 phút, cấy được chuyển giao cho đĩa Petri chứa
môi trường đồng canh tác (xem ở trên, nhưng có chứa 4,4 mM L-
cystein, 0,5 mM sodium thiosulfate, 0,5 mM DTT) . Sau 5 ngày
ở 25 ° C trong bóng tối, cấy được chuyển giao cho Oasis nêm
(Oasis choai Solutions, Kent, Ohio, USA). Cấy được
đặt theo chiều dọc trong các nêm với phần còn lại của họ hypocotyl
chèn vào các nêm. Wedges được tưới với một giải pháp
của 1 LM Arsenal (imazapyr). Khi chồi trở nên kéo dài
từ lá chính khu vực nút bị nhiễm bệnh, họ đã được tách ra
từ các cây con và bắt nguồn từ cá nhân trong Oasis nêm.
Chồi tách rời được tưới với một dung dịch chứa
Arsenal một lần hoặc hai lần một tuần. Khi măng đã trở thành
bắt nguồn từ, chúng được chuyển vào đất và phát triển đến trưởng thành trong
các nhà kính.