artificially-contaminated honeys) w

artificially-contaminated honeys) were centrifuged
at 3500 × g for 45 min and the pellet re-suspended
with 200 µL of Lysozyme solution followed by proteinase
K treatment as previously reported (Bakonyi
et al., 2003). DNA was purified by NucleoSpin
tissue minikit (Macherey – Nagel) and eluted in
100 µL of elution buffer. PCR was performed in a
reaction volume of 25 µL (with 5 µL of template
DNA), according to Fast Start Taq kit (Roche), with
0.5 µM of primers PLL-16S F6 and PLL-16S B11
(Kilwinski et al., 2004).
The amplification protocol comprised 5 min at
95 ◦C, followed by 40 cycles at 94 ◦C for 30 s, 56 ◦C
for 30 s, 72 ◦C for 45 s, and a final extension at
72 ◦C for 7 min.
Ten microliters of amplification product were
electrophoresed on 1.8% agarose gel followed by
staining in ethidium bromide (1 µg/mL) and visualization
by UV transillumination.
Analytical sensitivity was determined in two
separate experiments carried out in triplicate. Results
are summarised in Table I.
In artificially-contaminated honeys the limit
level of 100 spores/g was detected by culture and
PCR. At this level of contamination, culture revealed
8 CFU/g. Lauro et al. (2003) reported a
similar sensitivity (9 CFU/mL) with a nested PCR
preceded by an incubation step in MYPGP broth.
Conversely, our protocol is based on a direct PCR
with a reduced probability of false-positives and
without pre-incubation, to increase simplicity.

Kết quả (Việt) 1:

ô nhiễm giả tạo honeys) đã ly3500 × g cho 45 phút và miếng lại bị đình chỉvới 200 ml Lysozyme giải pháp theo proteinaseĐiều trị K như trước đây báo cáo (Bakonyiet al., 2003). DNA được tinh chế bằng NucleoSpinMô minikit (Macherey-Nagel) và eluted trong100 ml elution đệm. Đảng Cộng sản Romania được thực hiện trong mộtphản ứng khối lượng 25 ml (với 5 ml của mẫuDNA), theo nhanh chóng bắt đầu Taq kit (Roche), vớiCách 0.5 μm của chất nền, mồi PLL-16 F6 và PLL-16 B11(Kilwinski et al, 2004).Giao thức khuếch đại bao gồm 5 phút tại95 ◦C, theo sau là 40 chu kỳ tại 94 ◦C cho 30 s, 56 ◦C30 s, 72 ◦C 45 s, và một phần mở rộng cuối cùng lúc◦C 72 trong 7 phút.Mười microliters sản phẩm khuếch đạielectrophoresed trên 1,8% agarose gel theo saunhuộm trong ethidium bromua (1 μg/mL) và kiểu trực quanbởi UV transillumination.Phân tích độ nhạy cảm đã được xác định trong hairiêng thí nghiệm thực hiện trong triplicate. Kết quảđược tóm tắt trong bảng tôi.Tại ô nhiễm giả tạo honeys giới hạnmức độ của bào tử 100gr được phát hiện bởi văn hóa vàĐẢNG CỘNG SẢN ROMANIA. Ở cấp độ này của ô nhiễm, văn hóa tiết lộ8 CFU/g. Lauro et al. (2003) báo cáo mộttương tự như nhạy cảm (9 CFU/mL) với một đảng Cộng sản Romania lồng nhaudẫn trước bởi một bước ủ bệnh trong MYPGP canh.Ngược lại, giao thức của chúng tôi dựa trên một đảng Cộng sản Romania trực tiếpvới một xác suất giảm của quả dương sai vàNếu không có pre-ủ, tăng đơn giản.

Kết quả (Việt) 2:

mật ong nhân tạo bị ô nhiễm) được ly tâm
ở 3500 × g trong 45 phút và pellet lại bị đình chỉ
với 200 ml Lysozym giải pháp tiếp theo là proteinase
K điều trị như báo cáo trước (Bakonyi
et al., 2003). DNA đã được tinh chế bằng NucleoSpin
minikit mô (Macherey - Nagel) và tách rửa trong
100 ml rửa giải đệm. PCR được thực hiện trong một
thể tích phản ứng của 25 ml (với 5 ml mẫu
DNA), theo nhanh chóng bắt đầu Taq kit (Roche), với
0,5 mM của mồi PLL-16S F6 và PLL-16S B11
(Kilwinski et al., 2004 ).
Các giao thức khuếch đại bao gồm 5 phút ở
95 ◦C, tiếp theo là 40 chu kỳ với 94 ◦C trong 30 s, 56 ◦C
trong 30 s, 72 ◦C cho 45 s, và một phần mở rộng cuối cùng tại
72 ◦C cho 7 min .
Mười microliters của sản phẩm khuếch đại được
electrophoresed trên 1,8% gel agarose sau
nhuộm trong ethidium bromide (1 mg / mL) và trực quan
bằng transillumination UV.
độ nhạy phân tích được xác định trong hai
thí nghiệm riêng biệt được thực hiện trong ba lần. Kết quả
được tóm tắt trong Bảng I.
Trong mật ong nhân tạo bị nhiễm các hạn
mức 100 bào tử / g đã được phát hiện bởi văn hóa và
PCR. Ở cấp độ này của ô nhiễm, văn hóa tiết lộ
8 CFU / g. Lauro et al. (2003) cho biết
độ nhạy tương tự (9 CFU / mL) với một PCR lồng nhau
trước bởi một bước ủ trong MYPGP nước dùng.
Ngược lại, giao thức của chúng tôi được dựa trên PCR trực tiếp
với một xác suất giảm giả tích cực và
không có sơ ủ bệnh, để tăng tính đơn giản.