Các dòng chảy chung của nhận dạng protein là: 1) protein quan tâm, đó là, trong nhiều trường hợp tách bằng điện 2D, là một trong hai enzyme hoặc hóa học
bị phân cắt, 2) hỗn hợp peptide thu được được phân tích bằng kỹ thuật đo phổ khối lượng, và 3) thu được dấu vân tay peptide khối lượng sau đó được so sánh với dấu vân tay "ảo" thu được tách từ lý thuyết của các chuỗi protein được lưu trữ trong cơ sở dữ liệu và những người thân với
số lượng nhiều hơn các peptide tương tự được lấy như protein ứng cử viên có thể (Gevaert và
Vandekerckhove, 2000). Trước khi các cụ MS đã được áp dụng trong nghiên cứu protein, trình tự protein đã được thực hiện với kỹ thuật Edman (Smith, 2001; Steen và Mann, 2004). Tuy nhiên, ngày nay, phương pháp này là rất thường xuyên được sử dụng trong nghiên cứu protein (Jorrin-Novo, 2014). Edman trình tự dựa trên bóc từng bước (phân mảnh) của peptide từ các amino sử dụng hóa chất trong một quá trình có thể mất hàng giờ hoặc vài ngày. Phương pháp này cần làm sạch mẫu, đòi hỏi nhiều
chuyên môn, thất bại hoàn toàn nếu các peptide được acetyl hóa tại ga cuối amin của nó hoặc đã bị chặn lại để phản ứng Edman, đòi hỏi một amin ga cuối miễn phí, và thường không có chuỗi peptide đủ dài và rõ ràng có thể được xác định bằng cách này phương pháp (Steen và Mann, 2004). Tuy nhiên MS không yêu cầu peptide được tinh chế để đồng nhất, nó không có một vấn đề
để phân bị chặn hoặc biến đổi protein, đó là nhạy cảm hơn, và có thể phân mảnh các peptide trong vài giây (Steen và Mann, 2004). Theo De-Hoffmann và Stroobant (2007), sự nhạy cảm vô song, giới hạn phát hiện, tốc độ và sự đa dạng của các ứng dụng của nó đã tăng Mass Spectrometry đến một vị trí nổi bật trong số các kỹ thuật phân tích khác. Do đó, kể từ khi bắt đầu ứng dụng của Mass Spectrometry trong hóa học protein, peptide fingerprinting đại chúng (PMF) phân tích đã trở thành phương pháp được lựa chọn trong nhận dạng protein thông lượng cao (Gevaert và Vandekerckhove, 2000).
đang được dịch, vui lòng đợi..