Each isolated single colonies were

Each isolated single colonies were streaked on to
tryptone yeast extract dexterous agar plate (tryptone 1%,
dextrose 0.1%, yeast extract 0.5%, agar 2%) and
incubated at 37 0
c for 48 hrs for determination of
proteolytic activity. After 48 hrs, the formation of clear
zone around the colonies resulting from casein
hydrolysis was taken as evidence of proteolytic activity
(Vidya Pallavi et al., 2012).
Optimization and characterization of selected
isolates
To optimize the activity of protease producing bacteria,
selected isolates were streaked in to tryptone yeast
extract dextrose plate and incubated at different pH and
temperature. To determine the effect of temperature and
alkalinity on proteolysis activity, isolates were
subcultured on tryptone yeast extract dextrose plate
adjusted at pH values 8, 9, 10, and 11 and incubated at
370C, 500C, and 600C for 48 hrs (Ghasemi Asl et al.,
2011; Narasimha et al., 2011; Vidya Pallavi et al.,2012).
After incubation the result was recorded.
Selected isolates were gram stained and characterized
using different biochemical tests (catalase, coagulase,
TSI test, indole, and urease test). The catalase test was
performed on the Gram positive cocci. This was done by
mixing a dense culture with two drops of H2O2 and
looking for bubbles. Organisms positive (produced
bubbles) in the test were considered to be
Staphylococci. The Staphylococci were further tested
with the coagulase test. The coagulase test was
performed by mixing a dense suspension of the culture
with plasma contained in a small test tube. The set up
was incubated overnight, and then observed for fibrin
clot. Those positive in the coagulase test were identified
to be Staphylococcus aureus, and those negative were
coagulase negative staphylococci (Srinivas Naik etal.,
2013).
Triple sugar iron (TSI) agar was used for the
differentiation of the Enterobacteriaceae. Using a sterile
straight wire the TSI was stabbed deep to the bottom
and the surface of the agar slant was streaked with the
test organism. By the different three sugar fermentation,
gas accumulation and hydrogen sulfide production
abilities the Enterobacteriaceae were identified. The
indole test was performed by inoculating peptone water,
and incubating it overnight. The detection of indole was
by the addition of Kovac‘s reagent Srinivas Naik etal.,
2013).
RESULTS
Isolation and screening of protease producing
bacteria
From a total of 15 collected samples, 32 colonies were
isolated. All of isolate colonies were streaked on tryptone
yeast extract dextrose plate media. Among 32 isolates, 3
(9.5%) were shown clear zone around streaked isolates
(Figure 1). Those of the 3 isolates were obtained from
Atse Tewodros Café soil sample, Dashin soil Sample
and Dashin water samples. Then, these 3 isolates were
selected for further analysis and characterization. Prote-
23. Abebe et al.,
Table 1. Proteolytic activity and growth rate of isolates at different pH and temperature
Parameters Proteolytic/ Growth activities of isolates
`pH Temperature ATCSsi DSsi DWsi
8 370
c +++/+++ +++/+++ +++/+++
450
c ++/++ ++/+++ ++/++
600
c -/- -/- -/-
9 370
c ++/+++ ++/+++ +++/+++
450
c +++/++ +/++ ++/+++
600
c -/- -/- -/-
10 370
c ++/+++ +/++ +/++
450
c +/+ ++/+ ++/+
600
c -/- -/- -/-
11 370
c +/++ -/+ +/++
450
c -/++ -/+ -/+
600
c -/- -/- -/-
Key: +++/+++ (More protolytic activity/ growth rate), ++/++ (Moderate proteolytic activity/ growth rate), +/+ (good
proteolytic activity/ growth rate), (No proteolytic activity/ growth rate)
Table 2. Morphological and biochemical characterization of selected isolates
Characteristics Isolates
ATCSsi DSsi DWsi
Colony shape/ color Circular/whitish Irregular/yellow Irregular/whitish
Gram reaction + + -
Cell shape Cocci Rod Rod
Catalase + -
Coagulase + +
TSI K/AH2S
+
MR/VP -/+
Indole -
Key: + (positive), - (negative), ATCSsi (Atse Tewodrose café soil sample isolate), DSsi (Dashen soil sample isolate), DWsi
(Dashen water sample isolate), K/A (red slant/yellow but), H2S
+ (Hydrogen peroxide production)
olytic activity of DSSi
Optimization and characterization of selected
isolates
As the result indicate that the three isolates were shown
good proteolytic activities and grown well at 370C and 45
0C both in 8 and 10 pH. There was no growth and
proteolytic activity of all the three isolates at 600C in all
adjusted different pH (Table1).
According to the gram staining result two (ATCSs and
DSs) isolates were gram positive. ATCSs isolate was
shown cocci cell morphology, catalase and coagulase
positive result. The two (DSs and DWs) isolates were
shown rod cell morphology. But DSs isolate was shown
a negative result for catalase test and positive for
coagulase test. One (DWs) isolate was gram negative,
produce H2S and ferment glucose (Table 2).
Based on the above morphological and biochemical
characterization, ATCSs isolate was grouped under
genus Staphylococcus. Other two (DSs and DWs)
isolates need more characterization for identification at
genus level.
DISCUSSIO

Kết quả (Việt) 1:

Mỗi thuộc địa duy nhất cô lập được streaked đểchiết xuất nấm men tryptone thổi agar tấm (tryptone 1%,dextrose 0,1%, men trích 0,5%, agar 2%) vàủ tại 37 0c cho 48 giờ xác địnhproteolytic hoạt động. Sau 48 giờ, hình thành rõ ràngcác khu vực xung quanh các thuộc địa dẫn đến từ caseinthủy phân được thực hiện như là bằng chứng của proteolytic hoạt động(Vidya Pallavi et al., năm 2012).Tối ưu hóa và các đặc tính của lựa chọncô lậpĐể tối ưu hóa hoạt động sản xuất vi khuẩn, proteasechọn chủng đã streaked trong để tryptone mengiải nén dextrose tấm và ủ ở pH khác nhau vànhiệt độ. Để xác định tác động của nhiệt độ vàkiềm proteolysis hoạt động, chủng đãsubcultured trên tryptone men trích dextrose tấmđiều chỉnh tại VN giá trị 8, 9, 10, và 11 và ủ tại370C, 500C và 600C trong 48 giờ (Ghasemi Asl et al.,năm 2011; Narasimha et al., năm 2011; Vidya Pallavi et al., năm 2012).Sau khi ủ kết quả đã được ghi lại.Chọn chủng có gam màu và đặc trưngsử dụng các xét nghiệm sinh hóa khác nhau (catalase, coagulase,Kiểm tra, indole và urease TSI kiểm tra). Catalase thử nghiệm đãthực hiện trên Gram dương cocci. Điều này được thực hiệnpha trộn văn hóa dày đặc với hai giọt của H2O2 vàTìm kiếm các bong bóng. Sinh vật tích cực (sản xuấtbong bóng) trong các thử nghiệm được coi làStaphylococci. Staphylococci các thêm đã được thử nghiệmvới các bài kiểm tra coagulase. Kiểm tra coagulase làthực hiện bằng cách trộn một đình chỉ dày đặc của các nền văn hóavới plasma chứa trong một ống nghiệm nhỏ. Thiết lậpđã được ủ qua đêm, và sau đó quan sát cho fibrincục máu đông. Tất cả những người tích cực trong các bài kiểm tra coagulase đã được xác địnhStaphylococcus aureus, và tất cả những người tiêu cực đãcoagulase tiêu cực staphylococci (thanh mai nguyễn thị etal.,năm 2013).Ba đường sắt (TSI) agar đã được sử dụng cho cácsự khác biệt của Enterobacteriaceae. Bằng cách sử dụng một vô trùngdây dẫn thẳng TSI đã đâm sâu xuống đáyvà bề mặt nghiêng agar streaked với cácsinh vật thử nghiệm. Bằng sự lên men ba đường khác nhau,sản xuất khí tích tụ và hydro sulfuakhả năng Enterobacteriaceae đã được xác định. Cácindole thử nghiệm được thực hiện bởi cối chế phẩm peptone nước,và ấp nó qua đêm. Những phát hiện của indole làbằng cách bổ sung tinh khiết Kovac của thanh mai nguyễn thị etal.,năm 2013).KẾT QUẢCách ly và kiểm tra protease sản xuấtvi khuẩnTừ tổng cộng 15 mẫu thu thập, 32 thuộc địabị cô lập. Tất cả các thuộc địa của isolate được streaked trên tryptonenấm men giải nén dextrose mảng truyền thông. Trong số 32 chủng, 3(9.5%) đã được thể hiện rõ ràng các khu vực xung quanh thành phố streaked chủng(Hình 1). Những người trong 3 chủng đã thu được từQuán cà phê Tewodros Atse mẫu đất, Dashin đất mẫuvà Dashin nước mẫu. Sau đó, đã các chủng 3lựa chọn để tiếp tục phân tích và đặc tính. Thuộc-23. Abebe et al.,Bảng 1. Proteolytic hoạt động và tăng trưởng lệ chủng khác nhau độ pH và nhiệt độTham số Proteolytic / tăng trưởng các hoạt động của chủng' pH nhiệt độ ATCSsi DSsi DWsi8 370c +++/+++ +++/+++ +++/+++450c ++/++ ++/+++ ++/++600c -/- -/- -/-9 370c ++/+++ ++/+++ +++/+++450c +++/++ +/++ ++/+++600c -/- -/- -/-10 370c ++/+++ +/++ +/++450c +/+ ++/+ ++/+600c -/- -/- -/-11 370c +/++ -/+ +/++450c -/++ -/+ -/+600c -/- -/- -/-Key: ++ +/ +++ (Thêm protolytic hoạt động / tỷ lệ tăng trưởng), + +/ ++ (điều phối hoạt động proteolytic / tỷ lệ tăng trưởng), +/ + (tốtproteolytic hoạt động / tỷ lệ tăng trưởng), (không có hoạt động proteolytic / tỷ lệ tăng trưởng)Bảng 2. Đặc tính hình thái học và hóa sinh của chủng được chọnĐặc điểm chủngATCSsi DSsi DWsiThuộc địa hình / màu sắc không đều tròn/màu trắng thường/màu vàng/màu trắngPhản ứng gam ++-Hình dạng tế bào Cocci Rod RodCatalase + -Coagulase ++TSI K/AH2S+MR/VP-/ +Indol-Key: + (tích cực), - (âm), ATCSsi (Atse Tewodrose quán cà phê đất mẫu isolate), DSsi (Dashen đất mẫu isolate), DWsi(Dashen nước mẫu isolate), K / A (nghiêng màu đỏ/vàng nhưng), H2S+ (Hydrogen peroxide sản xuất)olytic hoạt động của DSSiTối ưu hóa và các đặc tính của lựa chọncô lậpNhư là kết quả chỉ ra rằng ba chủng đã được thể hiệnhoạt động proteolytic tốt và phát triển tốt tại 370C và 450C cả tại VN 8 và 10. Đã có không có sự tăng trưởng vàproteolytic hoạt động của tất cả các chủng ba ở 600C trong tất cảđiều chỉnh độ pH khác nhau (Table1).Theo gam nhuộm quả hai (ATCSs vàDSs) chủng là gram Dương. ATCSs isolate làcocci Hiển thị di động hình Thái, catalase và coagulasekết quả tích cực. (DSs và DWs) hai chủng đãHiển thị thanh tế bào hình Thái. Nhưng DSs isolate được hiển thịmột kết quả tiêu cực cho catalase test và tích cực nhấtkiểm tra coagulase. Một trong những (DWs) isolate là gram âm,sản xuất H2S và lên men glucose (bảng 2).Dựa trên ở trên hình thái học và hóa sinhđặc tính, ATCSs isolate được nhóm lại theochi tụ cầu. Hai khác (DSs và DWs)chủng cần thêm đặc tính cho các nhận dạng tạichi cấp.DISCUSSIO

Kết quả (Việt) 2:

Mỗi khuẩn lạc riêng lẻ bị cô lập được các vệt sọc trên để
tryptone men chiết xuất tấm thạch khéo léo (tryptone 1%,
dextrose 0,1%, nấm men trích 0,5%, agar 2%) và
ủ ở 37 0
c trong 48 giờ để xác định
hoạt động phân giải protein. Sau 48 giờ, sự hình thành rõ ràng
khu vực xung quanh các thuộc địa kết quả từ casein
thủy phân được thực hiện như là bằng chứng về hoạt động phân giải protein
(Vidya Pallavi et al., 2012).
Tối ưu hóa và đặc tính của chọn
phân lập
để tối ưu hóa hoạt động của các vi khuẩn sản xuất protease,
phân lập được lựa chọn bị sọc để tryptone men
chiết xuất tấm dextrose và ủ ở pH và khác biệt
nhiệt độ. Để xác định ảnh hưởng của nhiệt độ và
độ kiềm vào hoạt động phân giải protein, phân lập được
cấy trên tryptone men tấm chiết xuất dextrose
điều chỉnh vào giá trị pH 8, 9, 10, và 11 và ủ ở
370C, 500C và 600C trong 48 giờ (Ghasemi ASL et al .,
2011; Narasimha et al, 2011;... Vidya Pallavi et al, 2012)
Sau khi ủ kết quả đã được ghi lại.
phân lập chọn được gam màu và được đặc trưng
bằng các xét nghiệm sinh hóa khác nhau (catalase, coagulase,
TSI kiểm tra, indol, và urease thử nghiệm). Các thử nghiệm catalase đã được
thực hiện trên các cầu khuẩn Gram dương. Điều này đã được thực hiện bằng cách
trộn một nền văn hóa dày đặc với hai giọt H2O2 và
tìm kiếm bong bóng. Các sinh tích cực (sản xuất
bong bóng) trong các thử nghiệm đã được coi là
Staphylococci. Các Staphylococci được tiếp tục thử nghiệm
với các thử nghiệm coagulase. Các thử nghiệm coagulase được
thực hiện bằng cách trộn một hệ thống treo dày đặc của các nền văn hóa
với huyết tương chứa trong một ống nghiệm nhỏ. Các thiết lập
được ủ qua đêm, và sau đó quan sát cho fibrin
cục máu đông. Những tích cực trong các thử nghiệm coagulase đã được xác định
là Staphylococcus aureus, và những tiêu cực là
coagulase staphylococci âm (Srinivas Naik etal,.
2013).
Sắt đường Ba (TSI) agar được sử dụng cho các
khác biệt của các Enterobacteriaceae. Sử dụng một vô trùng
dây thẳng TSI bị đâm sâu xuống phía dưới
và bề mặt của nghiêng thạch được sọc với các
sinh vật thử nghiệm. Bằng cách lên men ba đường, khác nhau
sản xuất tích tụ khí và hydrogen sulfide
khả năng Enterobacteriaceae đã được xác định. Các
thử nghiệm indole được thực hiện bằng cách cấy nước peptone,
và ấp nó qua đêm. Các phát hiện của indole là
bằng việc bổ sung các thuốc thử Kovac của Srinivas Naik etal.,
2013).
KẾT QUẢ
Phân lập và sàng lọc sản xuất protease
vi khuẩn
Từ tổng số 15 mẫu được thu thập, 32 thuộc địa bị
cô lập. Tất cả các thuộc địa cô lập được các vệt sọc trên tryptone
men truyền thông tấm chiết xuất dextrose. Trong số 32 mẫu phân lập, 3
(9,5%) được thể hiện rõ ràng khu vực xung quanh các chủng sọc
(Hình 1). Những người thuộc 3 phân lập được lấy từ
mẫu đất ATSE Tewodros Café, mẫu đất Dashin
và mẫu nước Dashin. Sau đó, những 3 phân lập được
chọn để phân tích sâu hơn và đặc tính. Prote-
23. Abebe et al.,
Bảng 1. proteolytic hoạt động và tốc độ tăng trưởng của các chủng phân lập ở nhiệt độ pH và khác nhau
hoạt động thông số thủy phân protein / Phát triển các chủng
'Nhiệt độ pH ATCSsi DSsi DWsi
8 370
c +++ / +++ +++ / +++ +++ / +++
450
c ++ / ++ ++ / +++ ++ / ++
600
c - / - - / - - / -
9 370
c ++ / +++ ++ / ++ + +++ / +++
450
c +++ / ++ + / ++ ++ / +++
600
c - / - - / - - / -
10 370
c ++ / +++ + / ++ + / ++
450
c + / + ++ / + ++ / +
600
c - / - - / - - / -
11 370
c + / ++ - / + + / ++
450
c - / ++ - / + - / +
600
c - / - - / - - / -
Key: +++ / +++ (hoạt động protolytic / tốc độ tăng trưởng hơn), ++ / ++ (Moderate phân giải protein hoạt động / tốc độ tăng trưởng), + / + (tốt
hoạt động / tốc độ tăng trưởng phân giải protein), (Không có hoạt động phân giải protein / tốc độ tăng trưởng)
Bảng 2. hình thái và đặc tính sinh hóa của chọn chủng
Đặc điểm phân lập
ATCSsi DSsi DWsi
Colony hình / color Thông tư / trắng Irregular / vàng Irregular / trắng
phản ứng Gram + + -
hình dạng tế bào cầu khuẩn Rod Rod
catalase + -
coagulase + +
TSI K / AH2S
+
MR / VP - / +
Indole -
chính: + (dương), - (âm), ATCSsi (ATSE Tewodrose phê đất mẫu cô lập), DSsi (Dashen đất mẫu cô lập), DWsi
(Dashen mẫu nước cô lập), K / A (nghiêng màu đỏ / màu vàng nhưng), H2S
+ (Hydrogen sản xuất peroxide)
hoạt động olytic của DSSi
Tối ưu hóa và đặc tính của lựa chọn
chủng
Như kết quả chỉ ra rằng ba chủng đã được thể hiện
hoạt động phân giải protein tốt và phát triển tốt ở 370C và 45
0C cả 8 và 10 pH. Không có sự tăng trưởng và
hoạt động phân giải protein của cả ba phân lập ở 600C trong tất cả các
pH khác nhau điều chỉnh (Table1).
Theo kết quả nhuộm gram hai (ATCSs và
DSS) chủng là gram dương. ATCSs phân lập được
thể hiện hình thái tế bào cầu khuẩn, catalase và coagulase
kết quả tích cực. Hai (DSS và DWS) chủng đã được
thể hiện hình thái tế bào que. Nhưng DSS phân lập được thể hiện
một kết quả âm tính với xét nghiệm catalase và tích cực cho
thử nghiệm coagulase. Một (DWS) cô lập là gram âm,
sản xuất H2S và glucose lên men (Bảng 2).
Dựa trên hình thái học và sinh hóa trên
đặc tính, ATCSs phân lập được nhóm theo
chi Staphylococcus. Khác hai (DSS và DWS)
phân lập cần đặc hơn để xác định ở
mức độ chi.
DISCUSSIO