In the present study, an attempt wa

In the present study, an attempt was made to utilize the dates syrup as carbon source, penicillin or surfactant and UV mutation to produce glutamic acid by shaking fermen- tation.
MATERIALS AND METHODS
Microorganism
Corynebacterium glutamicum AJ1510 obtained from Ajinomoto company was used for this study.
Media
Minimal salt medium (MSM)
It containing : 1g; KH2PO4, 0.6 g; K2 HPO4, 1g; (NH)2 SO4, 0.5g; MgSO4 .7 H2O. in 1L distilled water. The medium pH was adjusted to pH 7-7.5. Maintenance medium(g/l): Meat extract, 10, peptone, 10; NaCl, 5, agar, 20. pH adjusted at 7.
Fermentation medium
For L-glutamic acid production by C. glutamicum, cells were cultured in basal salt (BS) medium per liter. Basal salt medium contained the following: 5 g, (NH4)2SO4, 5 g, urea, 2 g, KH2PO4, 2 g, K2HPO4, 0.25 g , MgSO4• 7H2O, 0.01 g, FeSO4 • 7H2O, 0.01 g, MnSO4• 5H2O, 0.01 g, CaCl2 • 2H2O, 0.03 mg, ZnSO4• 7H2O, 0.1 mg, H3BO4, 0.07 mg, CoCl2 • 6H2O, 0.03 mg, CuCl2 • 2H2O, 0.01 mg, NiCl2, 0.1 mg of NaMo2O4 • 2H2O, different concentration of dates syrup, and 200 l of biotin (pH 7.0). Fifty milliliter (50 ml) of fermentation media were added to the flasks (250ml). To each flask, the 1 ml inoculums of a 24-h-old culture was added and incubated in a rotary flask shaker at 150 rpm at 31°C (Hoischen et al., 1990).
Mutation medium (MY)
It contained (g/L): 10, glucose; 3, yeast extract; 3, peptone extract; 5, malt extract; 15, agar.
Treatment of dates syrup
Alkaline treatment
The dates syrup (10 g) was diluted with distilled water (1 part ml), the pH of the mixture was adjusted to pH 9.5, and the mixture was shaking in water bath at 50°C for 10 min. Then it was kept undisturbed overnight, at room temperature. The precipitate solid material was separated from the supernatant by filtration. The supernatant was neutralized to pH 7 (Shah et al.. 2002).
Acid treatment
The dates syrup (10 g) was diluted with distilled water (1 part ml), 0.5 N oxalic acid were added and heated on a boiling water bath for 3 h. The supernatant solution was neutralized with barium carbonate then it was filtered and concentrated under vacuum to small volume, and it was added to the medium.
Mutagenesis
An aliquot of appropriate dilution of the C. glutamicum was grown in MY medium for 24 h. One milliliter (1 ml) of this culture from C. glutamicum cells were held in a Petri dish 20 cm and were exposed to UV lamp 254 nm at distance of 30 cm for 1, 2, 3, 4 and 5 min in a tightly closed wooden chamber. The mutated cells were plated into complex and minimal medium agar (MSM) plates and incubated for 48 h at 30°C. The numbers of survivals were calculated.
Analytical methods
Growth determination
The growths of cells were determined by measuring the absorbance at 600 nm spectrophotometrically (Shimadzu 24016), according to the methods of Hoischen et al. (1990). Absorbency was converted to dry weight by using a standard curve.
Determination of total carbohydrates
Total carbohydrates were determined by phenol sulphuric acid method according to the study of Dubois et al. (1956) .
Chromatography
Paper chromatography
Identification of the monosaccharides and oligosaccharides for the non treated, alkaline and acid treated dates syrup were proceeded by the paper chromatoghraphic technique using Whatman No. 1, and the solvent system n-butanol: acetic acid: water (60:15:25 v/v) for a period of 48 h. The chromatogram was dried, then dipped in alkaline -AgNO3.
Estimation of glutamic by thin chromatography

Kết quả (Việt) 1:

Trong nghiên cứu hiện nay, một nỗ lực đã được thực hiện để sử dụng xi-rô ngày đến như là nguồn cacbon, penicillin hoặc chất và tia UV đột biến để sản xuất axít glutamic bằng cách lắc fermen-tation.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Vi sinh vật Corynebacterium glutamicum AJ1510 thu được từ công ty Ajinomoto được sử dụng cho nghiên cứu này.Phương tiện truyền thông Trung bình tối thiểu muối (MSM) Nó có chứa: 1g; KH2PO4, cách 0.6 g; K2 HPO4, 1g; (NH) 2 SO4, 0.5 g; MgSO4.7 H2O. trong 1L nước cất. PH trung bình điều chỉnh độ pH 7-7,5. Bảo trì medium(g/l): thịt chiết xuất, 10, chế phẩm peptone, 10; NaCl, 5, agar, 20. Vn điều chỉnh lúc 7.Quá trình lên men vừa Cho việc sản xuất axit L glutamic bởi C. glutamicum, tế bào được nuôi cấy trong cơ sở vừa (BS) muối / lít. Cơ sở muối vừa chứa sau: 5 g, (NH4) 2SO4, 5 g, urê, 2 g, KH2PO4, 2 g, K2HPO4, 0.25 g, MgSO4• 7H2O, 0.01 g, FeSO4 • 7H2O, 0.01 g, MnSO4• 5H2O, 0.01 g, CaCl2 • 2H2O, 0.03 mg, ZnSO4• 7H2O, 0.1 mg, H3BO4, 0,07 mg, CoCl2 • 6H2O, 0.03 mg, CuCl2 • 2H2O, 0,01 mg, NiCl2, 0.1 mg NaMo2O4 • 2H2O, các nồng độ khác nhau của xi-rô ngày , và 200 l biotin (pH 7,0). Năm mươi milliliter (50 ml) của phương tiện truyền thông lên men được thêm vào bình (250ml). Để mỗi flask, inoculums 1 ml của một nền văn hóa 24 h cũ được thêm vào và ủ trong một shaker quay flask rpm 150 31° c (Hoischen và ctv., năm 1990). Đột biến Trung (Mỹ) Nó chứa (g/L): 10, glucose; 3, chiết xuất men; 3, các chế phẩm peptone giải nén; 5, chiết xuất mạch Nha; 15, agar. Điều trị ngày xi-rô Điều trị kiềm Xi-rô ngày (10 g) được pha loãng với nước cất (phần 1 ml), độ pH của hỗn hợp được điều chỉnh cho độ pH 9,5 và hỗn hợp run rẩy trong nước tắm lúc 50° C trong 10 phút. Sau đó nó đã được giữ yên tĩnh qua đêm, ở nhiệt độ phòng. Các vật liệu rắn precipitate được tách ra từ supernatant lọc. Supernatant đã được vô hiệu hóa để pH 7 (Shah và ctv. 2002). Điều trị acid Xi-rô ngày (10 g) được pha loãng với nước cất (1 phần ml), 0,5 N Axit oxalic được thêm vào và nước nóng vào tắm nước sôi cho 3 h. Supernatant giải pháp vô hiệu với Bari cacbonat sau đó nó được lọc và tập trung dưới chân không để âm lượng nhỏ, và nó đã được thêm vào các phương tiện. Mutagenesis Một aliquot thích hợp pha loãng C. glutamicum đã được trồng trong môi trường của tôi cho 24 h. Một trong những milliliter (1 ml) của nền văn hóa này từ C. glutamicum tế bào đã được tổ chức ở một Petri món ăn 20 cm và đã tiếp xúc với tia UV đèn 254 nm ở khoảng cách 30 cm cho 1, 2, 3, 4 và 5 phút trong một buồng gỗ chặt chẽ đóng. Các tế bào đột biến đã được mạ thành phức tạp và tối thiểu vừa agar (MSM) tấm và ủ cho 48 h 30° C. Số lượng nửa đã được tính toán. Phương pháp phân tích Xác định tăng trưởng Tăng trưởng của các tế bào đã được xác định bằng cách đo hấp thu tại 600 nm spectrophotometrically (Shimadzu 24016), theo phương pháp của Hoischen et al. (1990). Absorbency đã được chuyển đổi sang trọng lượng khô bằng cách sử dụng một đường cong chuẩn. Xác định tổng carbohydrate Carbohydrate tất cả đã được xác định bằng phương pháp axit sunfuric phenol theo nghiên cứu của Dubois et al. (1956). Sắc ký Sắc ký giấy Xác định các monosacarit và oligosaccharide cho các phòng không điều trị, kiềm và xi-rô axit ngày điều trị đã được tiến hành bằng kỹ thuật chromatoghraphic giấy tráng nhựa Whatman số 1 và hệ dung môi n-butanol: axit axetic: nước (60:15:25 v/v) cho một khoảng thời gian 48 h. Chromatogram đã được sấy khô, sau đó nhúng trong kiềm - AgNO3. Dự toán của glutamic bằng sắc kí mỏng

Kết quả (Việt) 2:

Trong nghiên cứu này, một nỗ lực đã được thực hiện để sử dụng các ngày xi-rô như là nguồn carbon, penicillin hoặc bề mặt và đột biến UV để sản xuất axit glutamic bằng cách lắc tation fermen-.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vi sinh vật
Corynebacterium glutamicum AJ1510 thu được từ công ty Ajinomoto đã được sử dụng cho nghiên cứu này .
Truyền thông
tối thiểu muối trung bình (MSM)
Nó chứa: 1g; KH2PO4, 0,6 g; K2 HPO4, 1g; (NH) 2 SO4, 0,5g; MgSO4 0,7 H2O. trong 1L nước cất. PH môi trường được điều chỉnh pH 7-7,5. Vừa bảo trì (g / l): Chiết xuất từ thịt, 10, peptone, 10; NaCl, 5, thạch, 20. pH được điều chỉnh tại 7.
Lên men vừa
Để sản xuất axit L-glutamic bằng C. glutamicum, các tế bào được nuôi cấy trong muối cơ sở (BS) vừa cho mỗi lít. Vừa muối đáy chứa những điều sau đây: 5 g, (NH4) 2SO4, 5 g, urê, 2 g, KH2PO4, 2 g, K2HPO4, 0,25 g, MgSO4 • 7H2O, 0,01 g, FeSO4 • 7H2O, 0,01 g, MnSO4 • 5H2O , 0,01 g, CaCl2 • 2H2O, 0,03 mg, ZnSO4 • 7H2O, 0,1 mg, H3BO4, 0,07 mg, CoCl2 • 6H2O, 0,03 mg, CuCl2 • 2H2O, 0,01 mg, NiCl2, 0,1 mg NaMo2O4 • 2H2O, nồng độ khác nhau của ngày xi-rô, và 200 l của biotin (pH 7.0). Năm mươi mililít (50 ml) của phương tiện truyền thông lên men đã được thêm vào các bình (250ml). Để mỗi bình, 1 ml Chế phẩm của một nền văn hóa 24-h-tuổi đã được bổ sung và ủ trong một shaker bình quay tại 150 rpm ở 31 ° C (Hoischen et al., 1990).
Đột biến trung bình (MY)
Nó chứa (g / L): 10, đường huyết; 3, men chiết xuất; 3, peptone chiết xuất; 5, chiết xuất mạch nha; 15, agar.
Điều trị ngày xi-rô
trị Alkaline
Ngày xi-rô (10 g) được pha loãng với nước cất (1 phần ml), độ pH của hỗn hợp đã được điều chỉnh pH 9,5, và hỗn hợp được lắc trong bồn tắm nước ở 50 ° C trong 10 phút. Sau đó, nó đã được giữ qua đêm yên tĩnh, ở nhiệt độ phòng. Các chất rắn kết tủa được tách ra từ bề bằng cách lọc. Các dịch nổi được trung hòa độ pH 7 (Shah et al .. 2002).
Acid điều trị
những ngày xi-rô (10 g) được pha loãng với nước cất (1 phần ml), 0,5 N axit oxalic đã được thêm vào và đun nóng trên một bồn tắm nước sôi 3 h. Các giải pháp nổi đã được trung hòa với bari cacbonat sau đó nó đã được lọc và cô đặc dưới chân không đến khối lượng nhỏ, và nó đã được thêm vào môi trường.
Đột biến
Một dịch chất pha loãng thích hợp của glutamicum C. được trồng trong môi trường MY 24 h. Một ml (1 ml) của nền văn hóa này từ C. tế bào glutamicum đã được tổ chức trong một đĩa Petri 20 cm và được tiếp xúc với đèn UV 254 nm ở khoảng cách 30 cm cho 1, 2, 3, 4 và 5 phút trong một đóng kín gỗ buồng. Các tế bào bị đột biến được cấy vào phức tạp và tối thiểu môi trường thạch (MSM) đĩa và ủ trong 48 giờ ở 30 ° C. Số lượng Tỉ lệ sống được tính toán.
Phương pháp phân tích
xác định tăng trưởng
của tăng trưởng của các tế bào được xác định bằng cách đo độ hấp thụ ở 600 nm spectrophotometrically (Shimadzu 24016), theo các phương pháp của Hoischen et al. (Năm 1990). Khả năng hấp thụ được chuyển đổi để làm khô trọng lượng bằng cách sử dụng một đường cong chuẩn.
Xác định tổng carbohydrate
Tổng carbohydrate được xác định bằng phương pháp phenol axit sulfuric, theo nghiên cứu của Dubois et al. . (1956)
Sắc ký
giấy sắc ký
Xác định các monosacarit và oligosaccharides cho không được điều trị, kiềm và axit điều trị ngày syrup được tiến hành bởi các kỹ thuật chromatoghraphic giấy sử dụng Whatman số 1, và các hệ thống dung môi n-butanol: axit axetic: nước ( 60:15:25 v / v) trong thời gian 48 giờ. Các sắc ký đã được sấy khô, sau đó nhúng vào -AgNO3 kiềm.
Ước tính glutamic bằng sắc ký mỏng