The search for ACE inhibitory activ

The search for ACE inhibitory activity is the most common strategy followed in the selection of antihypertensive hydrolysates and/or peptides derived from milk proteins, as well as from other food sources. The classical approaches involve the in vitro determination of the ACE inhibitory activity of milk protein hydrolysates, obtained by enzymatic digestion or microbial fermentation, followed by the identification of peptide structures and the chemical synthesis of potentially active peptides, or their analogues, in order to confirm their activity.
In order to facilitate the characterisation of ACE inhibitory peptides, the establishment of a simple, sensitive and reliable in vitro ACE inhibition assay is desirable. There are spectrophotometric, fluorimetric, radiochemical, HPLC and capillary electrophoresis methods to measure ACE activity. These can also be used to obtain information on the inhibitory potency of different substances (Li, Liu, Shi, & Le, 2005). This is usually expressed as the IC , or concentration needed to inhibit 50% of the enzyme activity. The spectrophotometric method of Cushman and Cheung (1971) is most commonly utilized. It is based on the hydrolysis of hippuryl His-Leu (HHL) by ACE to hippuric acid (HA) and HL. The extent of 50 HA release from HHL is measured after it is extracted with ethyl acetate, which is tedious and may overestimate ACE activity if unhydrolyzed HHL is also extracted. Direct, extraction-free methods have been published recently (Li et al., 2005; Shalaby, Zakora, & Otte, 2006). Another broadly used spectrophotometric method is based on the hydrolysis of a furanocryloyl tripeptide (FA–Phe–Gly Gly, FAPGG) to FAP and the dipeptide GG (Vermeirssen, Van Camp, & Verstraete, 2002). However, the observation that the ACE inhibitory activity differed with the method employed creates a need to standardize the methodologies to evaluate ACE inhibitory activity in vitro (Vercruysse, Smagghe, Herregods, & Van Camp, 2005). In practice, differences may arise among the results of different assays due to the use of different substrates or, within the same assay, due to the use of different test conditions or ACE from different origins. In particular, ACE activity levels need to be carefully controlled to obtain comparable and reproducible values (Murray, Walsh, & FitzGerald, 2004). The in vivo effects are tested in spontaneously hypertensive rats (SHR), which constitute an accepted model for human essential hypertension. In addition, in many in vivo studies it is also checked that antihypertensive peptides from milk proteins do not modify the arterial blood pressure of Wistar-Kyoto (WKY) rats, that are the normotensive control of the SHR. The hypotensive effects caused by the short-term administration to SHR of milk protein hydrolysates, fermented products and isolated milk-derived peptides have been summarized by FitzGerald et al. (2004).In general terms, the results of those tests have highlighted an important lack of correlation between the in vitro ACE inhibitory activity and the in vivo action. This poses doubts on the use of the in vitro ACE inhibitory activity as the exclusive selection criterium for potential antihypertensive substances, as it does not take into consideration the physiological transformations that determine the bioavailability of the peptides and because there might be other mechanisms of action than ACE inhibition.

Kết quả (Việt) 2:

Việc tìm kiếm các hoạt động ức chế ACE là chiến lược phổ biến nhất là do trong việc lựa chọn thủy phân hạ huyết áp và / hoặc các peptide có nguồn gốc từ protein sữa, cũng như từ các nguồn thực phẩm khác. Các phương pháp tiếp cận cổ điển liên quan đến việc xác định in vitro của ACE hoạt động ức chế của thủy phân protein sữa, thu được bằng cách tiêu hóa enzyme hoặc lên men vi sinh vật, tiếp theo là fi cation identi của cấu trúc peptide và các hóa chất tổng hợp các peptide có khả năng hoạt động, hoặc tương tự của chúng, để lừa fi rm hoạt động của họ.
Để tạo điều kiện cho các đặc tính của ACE peptide ức chế, việc thành lập một đơn giản, nhạy cảm và đáng tin cậy trong vitro ACE ức chế khảo nghiệm là mong muốn. Có quang phổ, fl uorimetric, hoá phóng xạ, HPLC và mao mạch điện phương pháp để đo hoạt động ACE. Đây cũng có thể được sử dụng để có được thông tin về những tiềm năng ức chế của các chất khác nhau (Li, Liu, Shi, & Lê, 2005). Điều này thường được thể hiện như các vi mạch, hoặc tập trung cần thiết để ức chế 50% của các hoạt động của enzyme. Các phương pháp quang phổ của Cushman và Cheung (1971) được dùng phổ biến nhất. Nó được dựa trên quá trình thủy phân của hippuryl His-Leu (HHL) của ACE để hippuric acid (HA) và HL. Mức độ 50 HA phát hành từ HHL được đo sau khi nó được chiết xuất với ethyl acetate, đó là tẻ nhạt và có thể đánh giá quá cao hoạt động ACE nếu unhydrolyzed HHL cũng được chiết xuất. , Phương pháp khai thác, trực tiếp đã được công bố gần đây (Li et al, 2005;. Shalaby, Zakora, & Otte, 2006). Một phương pháp quang phổ sử dụng rộng rãi dựa trên quá trình thủy phân của một tripeptide furanocryloyl (FA-Phe-Gly Gly, FAPGG) để FAP và GG dipeptit (Vermeirssen, Van Camp, & Verstraete, 2002). Tuy nhiên, việc quan sát thấy hoạt động ức chế ACE khác biệt với các phương pháp làm việc tạo ra một nhu cầu để chuẩn hóa các phương pháp để đánh giá hoạt động ức chế ACE trong ống nghiệm (Vercruysse, Smagghe, Herregods, & Van Camp, 2005). Trong thực tế, sự khác biệt có thể phát sinh trong các kết quả của các xét nghiệm khác nhau do việc sử dụng các chất nền khác nhau hoặc trong phạm vi các xét nghiệm này, do việc sử dụng các điều kiện thử nghiệm khác nhau hoặc ACE từ các nguồn gốc khác nhau. Đặc biệt, mức độ hoạt động ACE cần phải được kiểm soát một cách cẩn thận để có được giá trị tương đương và tái sản xuất (Murray, Walsh, & FitzGerald, 2004). Các hiệu ứng trong cơ thể đang được thử nghiệm ở chuột một cách tự nhiên tăng huyết áp (SHR), tạo thành một mô hình được chấp nhận cho tăng huyết áp cần thiết của con người. Ngoài ra, trong nhiều trong các nghiên cứu in vivo nó cũng được kiểm tra rằng peptide chống cao huyết áp từ protein sữa không làm thay đổi huyết áp động mạch của Wistar-Kyoto (WKY) chuột, đó là việc kiểm soát huyết áp bình thường của SHR. Các tác dụng hạ huyết áp gây ra bởi chính quyền ngắn hạn để SHR thủy phân protein sữa, các sản phẩm lên men và peptide có nguồn gốc từ sữa bị cô lập này được đúc kết bởi FitzGerald et al. (2004) .Trong điều kiện chung, kết quả của những bài kiểm tra đã nêu bật một sự thiếu quan trọng của mối tương quan giữa các ống nghiệm trong hoạt động ức chế ACE và các hành động trong cơ thể. Điều này đặt ra những nghi ngờ về việc sử dụng in vitro ACE hoạt động ức chế như criterium lựa chọn độc quyền đối với các chất chống cao huyết áp tiềm năng, vì nó không đi vào xem xét những biến đổi sinh lý mà xác định sinh khả dụng của các peptide và bởi vì có thể có cơ chế khác của hành động hơn ACE ức chế.