comparing standard concentrations o

comparing standard concentrations of DNA with samples’ band intensities.
No statistically significant difference was found in the ct values obtained from the heat-treated samples compared to raw samples. In the real-time PCR method, the chicken and turkey species could be detected in all samples subjected to 100, 150, and 200 ◦ C at the level of 0.001%. Since the regions amplified with primers designed specifically for chicken and turkey were shorter than
150 bp, therefore, they were considered not to be affected by heat treatment. On the other hand, since the internal temperature did not rise above 100 ◦ C in the oven-cooked samples under normal atmosphere conditions, it was considered that even if a temperature up to 200 ◦ C was applied, DNA would not suffer much damage. In addition, if heat processing is applied under pressure (in autoclave), the damage is estimated to be more and ct values are expected to rise. The ct values detected in nearly all raw and heat-treated mixtures were 1 to 3 ct lower than that of the values attained for the equivalent levels of DNA dilutions in water (Table 1).
In the conventional PCR method, chicken and turkey species
in raw and heat-treated meat mixtures were detected up to the level of 0.01%. While the heat processing did not have any neg- ative effect on the detection of chicken and turkey species, the detection limit was 10 times lower than that of the real-time PCR method. The presence of undeclared species below 0.1% in meat products is generally considered to be the result of accidental con- tamination because it is not economical. Therefore, the detection limits obtained using both conventional PCR and real-time PCR are efficient enough to detect accidental contamination but since the conventional PCR method is not quantitative, it can not iden- tify meat species adulteration by either accidental or intentional practice.
As a result, species specific real-time PCR assays developed in this study showed a high linearity over a wide range of tem- plate concentrations that enables a consistent and precise deter- mination of target DNA within all tested meat mixtures. Purity of nucleic acid templates is particularly important for real-time PCR, since contaminants can interfere with fluorescence detec- tion. Therefore, in this study, a commercial DNA isolation kit was used to minimize errors that may have arisen from DNA isola- tion. By the isolation method, where DNA is attached to a silica matrix, both PCR inhibitors and impurities that result in false positive results by causing probe degradation during the real-time PCR assay were considered to be substantially removed. In this study, commercial master mix was used in real-time PCR and conventional PCR reactions. So, not only the time was saved and but also the accuracy, repeatability, and its suitability for the routine analysis were increased while the standardization was simplified.

Conclusions
In this study, we developed real-time PCR techniques, for the specific and quantitative detection of chicken and turkey species in raw and heat-treated meat mixtures. Species specific primer–probe sets were designed by using variability of the ND2 gene on mito- chondrial DNA for both species. The detection limit in raw and heat-treated meat samples for both species using the conventional PCR technique was 10 times lower than that of the real-time PCR technique.

Kết quả (Việt) 1:

so sánh tiêu chuẩn nồng độ của DNA với mẫu ban nhạc cường độ.Không có sự khác biệt ý nghĩa thống kê được tìm thấy trong các giá trị ct thu được từ các mẫu nhiệt so với nguyên mẫu. Trong phương pháp PCR thời gian thực, các loài gà và Thổ Nhĩ Kỳ có thể được phát hiện trong tất cả mẫu 100, 150, và 200 ◦ C ở cấp độ của 0,001%. Kể từ khi các vùng khuếch đại với chất nền, mồi được thiết kế đặc biệt cho gà và gà tây đã ngắn hơn150 bp, do đó, chúng được xem là không để bị ảnh hưởng bởi xử lý nhiệt. Mặt khác, kể từ khi nhiệt độ bên trong đã không tăng trên 100 ◦ C trong các mẫu lò nấu chín trong điều kiện khí quyển bình thường, nó được coi là rằng ngay cả khi một nhiệt độ lên đến 200 ◦ C đã được áp dụng, DNA sẽ không bị thiệt hại nhiều. Ngoài ra, nếu xử lý nhiệt được áp dụng dưới áp lực (trong nồi hấp), thiệt hại ước tính nhiều hơn và ct giá trị dự kiến sẽ tăng lên. Các giá trị ct phát hiện ở gần như tất cả các hỗn hợp nguyên và nhiệt là 1 đến 3 ct thấp hơn giá trị đạt được cho các đơn vị tương đương DNA dilutions trong nước (bảng 1).Trong các truyền thống PCR phương pháp, gà và Thổ Nhĩ Kỳ loàitrong thịt nguyên và nhiệt hỗn hợp được phát hiện lên đến mức độ 0,01%. Trong khi xử lý nhiệt không có bất kỳ tác dụng neg-Anh phát hiện của loài gà và Thổ Nhĩ Kỳ, giới hạn phát hiện là 10 lần thấp hơn so với phương pháp PCR thời gian thực. Sự hiện diện của undeclared loài dưới 0.1% trong các sản phẩm thịt thường được coi là kết quả của con-tamination tình cờ vì nó không phải là kinh tế. Do đó, việc phát hiện giới hạn thu được bằng cách sử dụng cả hai đảng Cộng sản Romania thông thường và Đảng Cộng sản Romania thời gian thực được hiệu quả, đủ để phát hiện tình cờ ô nhiễm nhưng kể từ khi các phương pháp PCR thông thường không phải là định lượng, nó có thể không iden-tify thịt loài adulteration bởi hoặc là tình cờ hay cố ý thực hành.Kết quả là, thử nghiệm Đảng Cộng sản Romania thời gian thực loài cụ thể phát triển trong nghiên cứu này cho thấy một linearity cao trên một loạt các nồng độ tem cánh cho phép một phù hợp và chính xác ngăn chặn-mination của mục tiêu DNA trong tất cả thịt được thử nghiệm hỗn hợp. Độ tinh khiết của axít nucleic mẫu là đặc biệt quan trọng đối với Đảng Cộng sản Romania thời gian thực, kể từ khi chất gây ô nhiễm có thể cản trở sự phát huỳnh quang detec-tion. Vì vậy, trong nghiên cứu này, bộ cô lập thương mại DNA đã được sử dụng để giảm thiểu lỗi mà có thể phát sinh từ DNA isola-tion. Bằng phương pháp cách ly, nơi DNA gắn liền với một ma trận silica, thuốc ức chế PCR lẫn tạp chất đó dẫn đến kết quả sai tích cực bởi gây ra suy thoái thăm dò trong khảo nghiệm Đảng Cộng sản Romania thời gian thực được coi là đáng kể được gỡ bỏ. Trong nghiên cứu này, thương mại tổng thể trộn được sử dụng trong Đảng Cộng sản Romania thời gian thực và phản ứng thông thường của Đảng Cộng sản Romania. Vì vậy, không chỉ có thời gian đã được cứu sống và nhưng cũng tính chính xác, độ và của nó phù hợp với phân tích thông thường đã được tăng lên trong khi các tiêu chuẩn đã được đơn giản hóa.Kết luậnTrong nghiên cứu này, chúng tôi phát triển kỹ thuật Đảng Cộng sản Romania thời gian thực, để phát hiện các cụ thể và số lượng loài gà và Thổ Nhĩ Kỳ trong các hỗn hợp thịt nguyên và nhiệt. Loài cụ thể mồi-thăm dò bộ được thiết kế bằng cách sử dụng các biến đổi của các gen ND2 mito-chondrial DNA cho cả hai loài. Giới hạn phát hiện trong thịt nguyên và nhiệt mẫu cho cả hai loài bằng cách sử dụng phương pháp PCR thông thường là 10 lần thấp hơn so với các kỹ thuật thời gian thực của Đảng Cộng sản Romania.

Kết quả (Việt) 2:

so sánh nồng độ tiêu chuẩn của DNA với cường độ ban nhạc mẫu ".
Không có khác biệt đáng kể về mặt thống kê đã được tìm thấy trong các giá trị ct thu được từ các mẫu được xử lý nhiệt so với các mẫu nguyên liệu. Trong phương pháp real-time PCR, các loài gà và gà tây có thể được phát hiện trong tất cả các mẫu phải chịu 100, 150, và 200 ◦ C ở mức 0,001%. Kể từ khi các vùng khuếch đại với cặp mồi được thiết kế đặc biệt cho gà và gà tây ngắn hơn
150 bp, do đó, họ được coi là không bị ảnh hưởng bởi nhiệt. Mặt khác, kể từ khi nhiệt độ bên trong không vượt lên trên 100 ◦ C trong các mẫu lò nấu chín trong điều kiện không khí bình thường, nó được coi là ngay cả khi nhiệt độ lên đến 200 ◦ C đã được áp dụng, DNA sẽ không phải chịu nhiều thiệt hại. Ngoài ra, nếu xử lý nhiệt được áp dụng dưới áp lực (trong nồi hấp), thiệt hại ước tính hơn và giá trị ct được dự kiến sẽ tăng. Các giá trị ct phát hiện trong gần như tất cả các hỗn hợp nguyên liệu và xử lý nhiệt là 1-3 ct thấp hơn so với giá trị đạt được đối với các mức độ tương đương với các độ pha loãng DNA trong nước (Bảng 1).
Trong phương pháp, gà và gà tây loài PCR thông thường
trong hỗn hợp thịt sống và được xử lý nhiệt đã được phát hiện lên đến mức 0,01%. Trong khi việc xử lý nhiệt không có bất kỳ tác ative neg- về sự phát hiện của các loài gà và gà tây, giới hạn phát hiện thấp hơn so với các phương pháp real-time PCR 10 lần. Sự hiện diện của các loài không khai báo dưới 0,1% trong các sản phẩm thịt thường được coi là kết quả của tình cờ tamination con- vì nó không phải là kinh tế. Do đó, các giới hạn phát hiện được bằng cách sử dụng cả hai thường PCR và real-time PCR là đủ hiệu quả để phát hiện nhiễm bẩn ngẫu nhiên nhưng kể từ khi phương pháp PCR thông thường là không định lượng, nó không thể iden- tify thịt adulteration loài bằng cách thực hành tình cờ hay cố ý.
Như một Kết quả, các loài thử nghiệm PCR real-thời gian cụ thể phát triển trong nghiên cứu này đã cho thấy một tuyến tính cao trên một phạm vi rộng các nồng tấm tem- cho phép một mination ngăn chặn, nhất quán và chính xác của DNA mục tiêu trong tất cả các hỗn hợp thịt được kiểm tra. Độ tinh khiết của axit nucleic mẫu là đặc biệt quan trọng cho real-time PCR, vì chất gây ô nhiễm có thể gây trở ngại cho sự phát huỳnh quang detec tion. Vì vậy, trong nghiên cứu này, một bộ tách DNA thương mại được sử dụng để giảm thiểu các lỗi có thể phát sinh từ DNA cách li tion. Bằng các phương pháp cô lập, nơi mà DNA được gắn vào một ma trận silica, các chất ức chế cả PCR và các tạp chất mà dẫn đến kết quả dương tính giả bằng cách gây ra suy thoái thăm dò trong các xét nghiệm PCR thời gian thực được coi là loại bỏ đáng kể. Trong nghiên cứu này, kết hợp tổng thể thương mại được sử dụng trong thời gian thực và các phản ứng PCR PCR thông thường. Vì vậy, không chỉ là thời gian đã được cứu và mà còn về tính chính xác, độ lặp lại, và phù hợp cho việc phân tích thường xuyên được tăng lên trong khi các tiêu chuẩn đã được đơn giản hóa. Kết luận Trong nghiên cứu này, chúng tôi phát triển các kỹ thuật PCR thời gian thực, để phát hiện và định lượng cụ thể của loài gà và gà tây trong hỗn hợp thịt sống và được xử lý nhiệt. Loài cặp mồi-thăm dò cụ thể đã được thiết kế bằng cách sử dụng biến đổi của gen ND2 trên DNA chondrial mito- cho cả hai loài. Giới hạn phát hiện trong các mẫu thịt sống và được xử lý nhiệt cho cả hai loài bằng cách sử dụng kỹ thuật PCR thông thường là thấp hơn so với các kỹ thuật PCR thời gian thực 10 lần.