and widely used as forage. In addit

and widely used as forage. In addition, both have great nutritional potential due to their high content of fibers and bioactive com- pounds. Many studies have attempted to utilize barley or wheat bran to extract various functional compounds, such as polyphenols and xylose (Tamagawa and others 1998; Cruz and others 2000). However, only a few studies have reported the utilization of barley or wheat bran to produce GABA from glutamate. Therefore, both byproducts are materials of interest for this study because they can be made available inexpensively as a GAD source to produce GABA. The objectives of this study were to examine the optimal reaction conditions to produce GABA from glutamate using bar- ley or wheat bran without microbiological fermentation processes and to compare GABA conversion rates between barley bran and wheat bran.

Materials and Methods
Materials
Barley and wheat bran were prepared from whole barley (Alchan cultivar) or wheat (Olbori cultivar) grains, respectively, harvested in South Korea in 2011, at a local mill. GABA, glutamate, pyridoxal 5’-phosphate (PLP), and O-phthaldialdehyde (OPA) were purchased from Sigma Chemicals Co. (St. Louis, Mo., U.S.A.). Methanol was of high-performance liquid chromatog- raphy (HPLC) grade. Other chemicals and reagents were of an- alytical grade and were all purchased from Sigma Chemicals Co. (St. Louis, Mo., U.S.A.).

Production of GABA from glutamate
Between 0.25 and 2 g of barley or wheat bran were added to 10 mL of distilled water containing glutamate ranging between 0 and 40 mM, and PLP ranging between 0 to 100 μM, and then mixed thoroughly. To produce GABA from glutamate, reaction temper- atures and times were arbitrarily adjusted. Reaction temperatures were varied from 4 to 60 ◦C, and reaction times from 1 to 48 h. To prevent microbial growth, sodium azide was added to reaction mixtures at a final concentration of 0.2% (w/v). The enzymatic conversion reaction was stopped by heat inactivation at 80 ◦C for 20 min. Supernatants were obtained after centrifugation to de- termine the production efficiencies of GABA under the various reaction conditions. Each reaction was carried out in triplicate.

Quantitation of GABA and glutamate in reaction mixtures
The concentrations of GABA and glutamate in the reaction mixtures were determined by an HPLC assay with OPA precol- umn derivatization, as described previously (Pereira and others 2008). The derivatization was performed in the sample injection loop, as described previously. Ten microliters of sample mixture and 10 μL of OPA derivatization solution were consecutively loaded in the injection loop and retained for 3min to promote the derivatization. After derivatization, the loop contents (20 μL) were forced on to the column at a flow rate of 1 mL/min. The in- jections were performed less than 80 min after derivatization. Two solvents were used: solvent A (1% tetrahydrofuran, 8% methanol, and 91% 10 mM phosphate buffer, pH 7.0) and solvent B (80% methanol and 20% 10 mM phosphate buffer, pH 7.0). The col- umn was eluted for 80 min with a linear gradient of 0% to 100% solution A. The GABA and glutamate analyses were performed using a HPLC system equipped with an analytical-scale (4 μm, 3.9
mm×150 mm) Nova-Pak C18 column (Waters, Milford, Mass., U.S.A.), a Waters 600s controller (Waters, Milford, Mass., U.S.A.),
a Waters 474 scanning fluorescence detector (Waters, Milford,

Kết quả (Việt) 1:

và sử dụng rộng rãi như là thức ăn gia súc. Ngoài ra, cả hai đều có tiềm năng rất lớn về dinh dưỡng do nội dung của họ cao của sợi và hoạt tính sinh học com-Pound. Nhiều nghiên cứu đã cố gắng sử dụng Cám lúa mạch hoặc lúa mì để trích xuất các hợp chất khác nhau, chức năng, chẳng hạn như polyphenols và xylose (Tamagawa và những người khác năm 1998; Cruz và những người khác năm 2000). Tuy nhiên, chỉ có một vài nghiên cứu đã báo cáo việc sử dụng của Cám lúa mạch hoặc lúa mì để sản xuất GABA từ glutamate. Vì vậy, cả hai sản phẩm phụ là vật liệu lãi suất cho nghiên cứu này bởi vì họ có thể được làm sẵn có tiết kiệm chi phí như là một nguồn GAD để sản xuất GABA. Những mục tiêu của nghiên cứu này là để kiểm tra các điều kiện phản ứng tối ưu để sản xuất GABA từ glutamate sử dụng cám bar-ley hoặc lúa mì mà không có quá trình lên men vi sinh và để so sánh tỷ lệ chuyển đổi của GABA giữa Cám lúa mạch và Cám lúa mì.Vật liệu và phương phápVật liệuCám lúa mạch và lúa mì đã chuẩn bị từ cả lúa mạch (Alchan cây trồng) hoặc lúa mì ngũ cốc (Olbori cây trồng), tương ứng, thu hoạch ở Hàn Quốc trong năm 2011, tại nhà máy địa phương. GABA, glutamate, pyridoxal 5'-phosphate (PLP), và O-phthaldialdehyde (OPA) đã được mua từ công ty hóa chất Sigma (St. Louis, MO, Mỹ). Methanol là loại hiệu suất cao lỏng chromatog - raphy (HPLC). Hóa chất và các chất khác của một alytical lớp và được tất cả mua từ công ty hóa chất Sigma (St. Louis, MO, Mỹ).Sản xuất của GABA từ glutamateGiữa 0,25 2 g của lúa mạch hoặc lúa mì cám đã được thêm vào 10 mL nước cất chứa Glutamat khác nhau, giữa 0, 40 mM và PLP khác nhau, từ 0 đến 100 μM, và sau đó pha trộn kỹ lưỡng. Để sản xuất GABA từ glutamate, phản ứng temper-atures và thời gian đã tự ý điều chỉnh. Phản ứng nhiệt độ đã được thay đổi từ 4 đến 60 ◦C, và thời gian phản ứng từ 1 đến 48 h. Để ngăn chặn vi khuẩn phát triển, natri Azua được bổ sung vào phản ứng hỗn hợp lúc cuối cùng nồng độ 0,2% (w/v). Các phản ứng enzym chuyển đổi đã dừng lại bởi nhiệt ngừng hoạt động tại 80 ◦C cho 20 phút Supernatants đã thu được sau khi số để de-termine hiệu quả sản xuất của GABA theo các điều kiện phản ứng khác nhau. Mỗi phản ứng đã được thực hiện trong triplicate.Quantitation của GABA và glutamate trong phản ứng hỗn hợpNồng độ của GABA và glutamate trong hỗn hợp phản ứng đã được xác định bởi một khảo nghiệm HPLC với OPA precol-umn derivatization, như được mô tả trước đó (Pereira và những người khác năm 2008). Derivatization được thực hiện vào mẫu tiêm loop, như được mô tả trước đó. Microliters mười mẫu hỗn hợp và 10 μL OPA derivatization giải pháp đã được nạp liên tiếp trong vòng lặp tiêm và giữ lại cho 3 phút để thúc đẩy derivatization. Sau khi derivatization, nội dung loop (20 μL) bị buộc vào cột tại một tỷ lệ lưu lượng 1 mL/phút. Tại jections đã được thực hiện ít hơn 80 phút sau khi derivatization. Hai dung môi được sử dụng: dung môi (1% tetrahydrofuran, 8% methanol và 91% 10 mM phosphat đệm, pH 7,0) và dung môi B (80% methanol và 20% 10 mM phosphat đệm, pH 7,0). Col umn eluted cho 80 phút với một gradient tuyến tính của giải pháp 0% đến 100% A. Phân tích GABA và glutamate đã được thực hiện bằng cách sử dụng một hệ thống HPLC được trang bị với một phân tích quy mô (4 μm, 3.9mm × 150 mm) Nova-Pak C18 cột (Waters, Milford, Massachusetts, Mỹ), một bộ điều khiển vùng biển 600s (Waters, Milford, Massachusetts, Mỹ),một vùng biển 474 quét detector huỳnh quang (Waters, Milford,

Kết quả (Việt) 2:

và được sử dụng rộng rãi như là thức ăn gia súc. Ngoài ra, cả hai đều có tiềm năng dinh dưỡng tuyệt vời do hàm lượng cao của họ về sợi và hợp chất hoạt tính sinh học. Nhiều nghiên cứu đã cố gắng sử dụng lúa mạch hoặc lúa mì cám để trích xuất các hợp chất chức năng khác nhau, chẳng hạn như các chất polyphenols và xylose (Tamagawa và những người khác 1998; Cruz và những người khác 2000). Tuy nhiên, chỉ có một vài nghiên cứu đã báo cáo việc sử dụng lúa mạch hoặc lúa mì cám để sản xuất GABA từ glutamate. Do đó, cả hai sản phẩm phụ là vật liệu quan tâm cho nghiên cứu này vì chúng có thể được làm sẵn có rẻ tiền như một nguồn GAD để sản xuất GABA. Mục tiêu của nghiên cứu này là để kiểm tra các điều kiện phản ứng tối ưu để sản xuất GABA từ glutamate sử dụng bar-ley hoặc cám lúa mì mà không có quá trình lên men vi sinh và để so sánh tỷ lệ chuyển đổi GABA giữa cám lúa mạch và cám lúa mì. Vật liệu và phương pháp Vật liệu lúa mạch và cám lúa mì là chế biến từ toàn bộ lúa mạch (Alchan giống) hoặc lúa mì (Olbori giống) ngũ cốc, tương ứng, thu hoạch tại Hàn Quốc vào năm 2011, tại một nhà máy địa phương. GABA, mỳ chính, pyridoxal 5'-phosphate (PLP), và O-phthaldialdehyde (OPA) được mua từ Sigma ty Hóa chất (St. Louis, Missouri, Hoa Kỳ). Methanol là hiệu suất cao chromatog- Ðại (HPLC) lớp chất lỏng. Hóa chất và thuốc thử khác là của An- lớp alytical và tất cả đều được mua từ Sigma ty Hóa chất (St. Louis, Missouri, Hoa Kỳ). Sản xuất GABA từ glutamate giữa 0,25 và 2 g lúa mạch hoặc lúa mì cám đã được thêm vào 10 ml nước cất có chứa glutamate khác nhau giữa 0 và 40 mM, và PLP dao động từ 0 đến 100 mM, và sau đó trộn đều. Để sản xuất GABA từ glutamate, phản ứng atures temper- và thời gian đã được điều chỉnh tùy ý. Nhiệt độ phản ứng đã được thay đổi 4-60 ◦C, và thời gian phản ứng 1-48 h. Để ngăn chặn sự phát triển của vi sinh vật, natri azit đã được thêm vào hỗn hợp phản ứng ở một nồng độ cuối cùng là 0,2% (w / v). Các phản ứng chuyển đổi enzyme đã được ngừng lại bởi bất hoạt nhiệt ở 80 ◦C trong 20 phút. Supernatants thu được sau khi ly tâm để phát Termine những hiệu quả sản xuất của GABA theo các điều kiện phản ứng khác nhau. Mỗi phản ứng được thực hiện trong ba lần. Định lượng của GABA và glutamate trong phản ứng Hỗn hợp Hàm lượng GABA và glutamate trong hỗn hợp phản ứng được xác định bằng một xét nghiệm HPLC với OPA precol- umn dẫn suất, như được mô tả trước đây (Pereira và những người khác 2008). Các dẫn suất được thực hiện trong vòng lặp tiêm mẫu, như mô tả trước đây. Mười microliters của hỗn hợp mẫu và 10 ml dung dịch OPA dẫn suất đã liên tiếp nạp trong vòng tiêm và giữ lại cho 3min để thúc đẩy các dẫn suất. Sau khi dẫn suất, các nội dung vòng lặp (20 ml) được buộc vào cột với tốc độ dòng chảy của 1 ml / phút. Các jections trong- đã được thực hiện không quá 80 phút sau khi dẫn suất. Hai dung môi được sử dụng: dung môi A (1% tetrahydrofuran, 8% methanol, và 91% 10 mM đệm phosphate, pH 7,0) và dung môi B (80% methanol và 20% 10 mM đệm phosphate, pH 7.0). Các umn col được tách rửa cho 80 phút với một gradient tuyến tính từ 0% đến 100% dung dịch A. GABA và glutamate phân tích được thực hiện bằng một hệ thống HPLC được trang bị với một phân tích quy mô (4 mm, 3,9 mm × 150 mm) Nova -Pak C18 cột (Waters, Milford, Mass., Mỹ), một bộ điều khiển Waters 600s (Waters, Milford, Mass., Mỹ), một Waters 474 quét dò huỳnh quang (Waters, Milford,