affinity to the ligand remain fluor

affinity to the ligand remain fluorescent and arc isolated using FACS (Fig. 2). Several methods have been described to introduce a fluorescent label into the protein of interest (Fig. 3). Fluorescent reporter groups can be directly introduced by chemical coupling. Protein ligands that arc produced by hctcrologous gene expression can be engineered such that they contain an additional epitope sequence, which is recognized by a monoclonal antibody. Ligand binding can then he detected by consecutive incubation of the cell
r+8 8
8 It 8
a SACS
Incubation with fluoresce nvy
fab-Ced Hound
LASER
deflection plates
microbial liquid cutlura rte




overnight culture on agar pines
Figure 2 Combinatorial library screening by FACS. A library of microbial cells displaying a protein of interest is incubated with a fluorescent ligand. Cells that are capable of binding the ligand arc detected by the LASER optics of the fluorescence activated cell sorter (FACS). The flow cytometer nozzle is vibrated at a high frequency, which causes the microscopic fluid stream to break into discrete droplets. As a fluorescent cell enclosed in a droplet reaches the droplet hreak-off point, it receives a positive or negative charge. As the droplets individually pass through two vertical deflection plates, the electric field created by those plates directs them a collection vial. Uncharged droplets flow into a waste receptacle. Positive cells are cultivated overnight on agar plates to prevent kiss of clones that grow more slowly than others. Colonies are scraped off and used to inoculate liquid medium, to which, at an appropriate optical density, inducer is added to induce expression of the hanslocatoripassenger protein fusion. This procedure is repeated for several rounds until fluorescent cells are enriched.

Kết quả (Việt) 1:

ái lực với ligand vẫn huỳnh quang và arc được cô lập bằng cách sử dụng FACS (hình 2). Một số phương pháp đã được mô tả để giới thiệu một nhãn huỳnh quang vào protein quan tâm (hình 3). Nhóm phóng viên huỳnh quang có thể được giới thiệu trực tiếp bằng hóa chất khớp nối. Protein ligand mà hồ quang được sản xuất bởi hctcrologous biểu hiện gen có thể được thiết kế như vậy mà chúng có chứa một chuỗi thêm epitope, được công nhận bởi monoclonal kháng. Ligand ràng buộc có thể sau đó ông phát hiện bởi các ấp trứng liên tiếp của tế bàor + 8 88 nó 8một túi (bao)Ấp trứng với fluoresce nvy Fab-Ced HoundLASERđộ lệch tấmvi khuẩn lỏng cutlura rte nền văn hóa qua đêm trên agar pinesHình 2 tổ hợp thư viện khám bởi FACS. Một thư viện của các tế bào vi khuẩn Hiển thị một protein quan tâm ủ với một phối tử huỳnh quang. Các tế bào có khả năng ràng buộc arc phối tử phát hiện bằng quang học LASER của huỳnh quang là kích hoạt bào sorter (FACS). Vòi phun cytometer dòng chảy rung ở một tần số cao, nguyên nhân vi dòng chất lỏng để phá vỡ thành hạt rời rạc. Khi một tế bào huỳnh quang kèm theo trong một giọt đạt đến giọt hreak-off điểm, nó nhận được một khoản phí tích cực hay tiêu cực. Khi các giọt riêng đi qua hai tấm độ lệch theo chiều dọc, điện trường tạo bởi những tấm chỉ đạo cho họ một bộ sưu tập lọ. Uncharged giọt chảy vào một thùng rác thải. Tích cực các tế bào được trồng qua đêm trên các tấm agar để ngăn chặn hôn của dòng vô tính phát triển chậm hơn so với những người khác. Thuộc địa được cạo ra và được sử dụng để cấy trung bình chất lỏng, mà, tại quang học mật độ thích hợp, inducer được thêm vào để tạo ra các biểu hiện phản ứng tổng hợp protein hanslocatoripassenger. Quy trình này được lặp lại cho một vài viên đạn cho đến khi các tế bào huỳnh quang được phong phú.

Kết quả (Việt) 2:

mối quan hệ để các ligand vẫn huỳnh quang và hồ quang bị cô lập bằng FACS (Hình. 2). Một số phương pháp đã được mô tả để giới thiệu một nhãn huỳnh quang vào các protein quan tâm (Hình. 3). Nhóm phóng viên huỳnh quang có thể được giới thiệu trực tiếp bằng khớp nối hóa học. Ligand Protein Arc sản xuất bởi sự biểu hiện gen hctcrologous thể được thiết kế như vậy mà họ có chứa một chuỗi epitope bổ sung, được công nhận bởi một kháng thể đơn dòng. Ligand ràng buộc có thể sau đó anh phát hiện bằng cách ủ liên tiếp của tế bào
r + 8 8
8 8 Nó
một SACS
ủ với phát ra huỳnh quang nvy
fab-CED Hound
LASER
tấm lệch
khuẩn lỏng cutlura rte




nuôi cấy qua đêm trên cây thông agar
Hình 2 chiếu thư viện tổ hợp bởi FACS. Một thư viện các tế bào vi khuẩn hiển thị một loại protein quan tâm được ủ với một phối tử huỳnh quang. Các tế bào có khả năng ràng buộc vòng cung ligand phát hiện bởi kính LASER huỳnh quang kích hoạt máy phân loại tế bào (FACS). Dòng cytometer vòi phun được rung với tần số cao, mà nguyên nhân của dòng chất lỏng cực nhỏ để phá vỡ thành những giọt rời rạc. Khi một tế bào huỳnh quang kèm theo trong một giọt đạt điểm giọt hreak-off, nó nhận được một điện tích dương hoặc âm. Như những giọt từng đi qua hai tấm lệch dọc, điện trường tạo ra bởi những tấm hướng họ một lọ sưu tập. Giọt không tích chảy vào một thùng rác. Tế bào dương được trồng qua đêm trên đĩa thạch để ngăn chặn hôn nhân bản mà tăng trưởng chậm hơn so với những người khác. Thuộc địa được lấy ra và sử dụng để cấy môi trường lỏng, mà, với một mật độ quang học thích hợp, cảm ứng được thêm vào để tạo ra biểu hiện của phản ứng tổng hợp protein hanslocatoripassenger. Thủ tục này được lặp lại cho nhiều vòng cho đến khi tế bào huỳnh quang được làm giàu.