Much has been learned about the mec

Much has been learned about the mechanism of cyclin degradation through the use of in vitro systems that recapitulate the regulated degradation of mitotic cyclins (Mur- ray and Kirschner, 1989; Lucaand Ruderman, 1989). The N-terminus of both A- and B-type cyclins contains a short conserved sequence, termed the destruction box, which when mutated or deleted will stabilize cyclin against mitosis-specific proteolysis (Luca et al., 1991; Glotzer et al., 1991; Lorca et al., 1992a). Mitotic cyclins can therefore be separated into two functional domains, the N-terminus, which targets the protein for degradation, and the C-terminus, which is required for binding and activation of Cdc2 (Figure 4C). When expressed alone, the N-terminus of sea urchin cyclin B is efficiently degraded in mitosis (Glotzer et al., 1991; Holloway et al., 1993), and when fused to a heterologous protein, the protein can be targeted for destruction. However, mutations of Xenopus cyclins A and B2 that block binding to Cdc2 inhibit their degradation, suggesting that the requirements for their degradation may be more complex (Stewart et al., 1994; van der Velden and Lohka, 1994). Several lines of evidence now suggest that cyclin is targeted for degradation by the ubiquitin pathway, which has been implicated in the turnover of other cellular regulators such as ~53 (reviewed by Ciechanover and Schwartz, 1994): cyclin B is ubiquitinated in mitotic, but not interphase Xenopus egg extracts, and ubiquitination depends upon the presence of an intact destruction box (Glotzer et al., 1991); methylated ubiquitin, an inhibitor of ubiquitin-mediated proteolysis, blocks the degradation of cyclins A and B in clam embryo extracts (Hershko et al., 1991); and mutations in subunits of the yeast proteasome, a large complex required for the proteolysis of ubiquitinated proteins, arrest the cell cycle in metaphase with elevated levels of B-type cyclins and Cdc2 kinase activity (Ghislain et al., 1993; Gordon et al., 1993). While thisdoes not prove that adefect in cyclin B proteolysis is responsible for the cell cycle arrest, it is interesting that at least one yeast proteasome mutant can be suppressed by deletion of CLBP, the major yeast B-type cyclin (Friedman and Snyder, 1994). The existence of nondegradable mutants of cyclin that retain the ability to activate CdcP kinase made it possible to test the hypothesis that cyclin degradation and MPF inactivation are required to exit the mitotic state. Nonde- gradable mutants of cyclin A or B will arrest the cell cycle with elevated levels of kinase activity in embryonic extracts, in human cells, and in yeast (Murray et al., 1989; Gallant and Nigg, 1992; Ghiara et al., 1991; Luca et al., 1991), indicating that cyclin degradation is required for the inactivation of MPF. However, close examination of spindle morphology during mitotic arrest revealed that sister chromatid separation occurred normally, with arrest occurring in telophase (Hollowayet al., 1993). Additionally, several mutant strains of Saccharomyces cerevisiae complete anaphase without inactivating MPF (Surana et al., 1993). These data suggest that MPF inactivation is not
required for the transition to anaphase, but rather that MPF must be inactivated for the cell to complete cytokinesis and return to the interphase state (Figure 48).

Kết quả (Việt) 1:

Nhiều đã được biết về cơ chế của sự suy thoái cyclin bằng cách sử dụng hệ thống trong ống nghiệm recapitulate sự xuống cấp quy định của cyclins phân bào (Mur-ray và Kirschner, năm 1989; Lucaand Ruderman, 1989). N-ga cuối của cả hai A và B kiểu cyclins chứa một chuỗi bảo tồn ngắn, gọi là hộp tiêu hủy khi đột biến hoặc đã bị xóa sẽ ổn định cyclin chống lại dành riêng cho nguyên phân proteolysis (Luca et al., 1991; Glotzer et al., 1991; Lorca et al., 1992a). Phân bào cyclins do đó có thể được tách ra thành hai chức năng miền, N-terminus, nhắm mục tiêu protein cho suy thoái, và C-terminus, là cần thiết để ràng buộc và kích hoạt của Cdc2 (hình 4 c). Khi bày tỏ một mình, terminus N urchin biển cyclin B hiệu quả suy thoái trong nguyên phân (Glotzer et al., 1991; Holloway et al., 1993), và khi hợp nhất với một protein heterologous, protein có thể được nhắm mục tiêu cho tiêu hủy. Tuy nhiên, đột biến của Xenopus cyclins A và B2 khối đó ràng buộc để Cdc2 ức chế của họ suy thoái, gợi ý rằng các yêu cầu cho sự xuống cấp của họ có thể phức tạp hơn (Stewart et al., 1994; van der Velden và Lohka, 1994). Một số dòng bằng chứng bây giờ đề nghị rằng cyclin là mục tiêu cho suy thoái của con đường của ubiquitin, đã bị dính líu trong doanh thu của các cơ quan quản lý di động chẳng hạn như ~ 53 (xem xét bởi Ciechanover và Schwartz, 1994): cyclin B là ubiquitinated tại phân bào, nhưng không interphase Xenopus chất chiết xuất từ trứng, và ubiquitination phụ thuộc vào sự hiện diện của một hộp nguyên vẹn hủy diệt (Glotzer et al. 1991); xitôzin ubiquitin, một chất ức chế của trung gian của ubiquitin proteolysis, chặn sự xuống cấp của cyclins A và B trong Nghêu phôi chất chiết xuất từ (Hershko et al., 1991); và đột biến trong subunits của proteasome nấm men, một phức tạp lớn cần thiết cho proteolysis ubiquitinated protein, bắt giữ chu kỳ tế bào ở metaphase với nồng độ của loại B cyclins và Cdc2 hoạt động kinase (Ghislain et al., 1993; Gordon et al, 1993). Trong khi thisdoes không chứng minh rằng adefect cyclin Si proteolysis chịu trách nhiệm về việc bắt giữ chu kỳ tế bào, nó là thú vị rằng ít nhất một nấm men proteasome đột biến có thể được dập tắt bằng cách loại bỏ CLBP, lớn nấm men loại B cyclin (Friedman và Snyder, 1994). Sự tồn tại của người đột biến nondegradable của cyclin mà giữ lại khả năng kích hoạt CdcP kinase làm cho nó có thể thử nghiệm giả thuyết rằng sự xuống cấp cyclin và ngừng hoạt động MPF được yêu cầu để thoát khỏi nhà nước phân bào. Nonde - gradable đột biến của cyclin A hoặc B sẽ bắt chu kỳ tế bào với nồng độ của hoạt động kinase trong phôi chất chiết xuất từ, các tế bào của con người và nấm men (Murray et al., năm 1989; Gallant và Nigg, 1992; Ghiara et al., 1991; Luca et al., 1991), chỉ ra rằng cyclin suy thoái là cần thiết cho ngừng hoạt động của MPF. Tuy nhiên, kiểm tra kỹ của hình thái trục chính trong quá trình phân bào bắt giữ tiết lộ rằng chị chromatid tách xảy ra bình thường, với bắt giữ xảy ra trong telophase (Hollowayet al., 1993). Ngoài ra, một số đột biến chủng Saccharomyces cerevisiae hoàn thành anaphase mà không inactivating MPF (Surana và ctv., 1993). Những dữ liệu này cho thấy rằng MPF ngừng hoạt động không phải là cần thiết cho quá trình chuyển đổi để anaphase, nhưng thay vì MPF đó phải được gan cho các tế bào để hoàn thành cytokinesis và trở về trạng thái interphase (hình 48).

Kết quả (Việt) 2:

Phần lớn đã được học về các cơ chế của sự suy thoái cyclin thông qua việc sử dụng in vitro hệ thống gồm tóm suy thoái quy định của cyclin phân bào (Mur- ray và Kirschner, 1989; Lucaand Ruderman, 1989). Các N-terminus của cả hai A- và B-type cyclin chứa một trình tự bảo tồn ngắn, gọi là hộp tiêu hủy, mà khi bị biến đổi hoặc bị xoá sẽ ổn định cyclin chống phân bào cụ thể phân giải protein (Luca et al, 1991;. Glotzer et al,. 1991;. Lorca et al, 1992a). Cyclin phân bào do đó có thể được chia thành hai lĩnh vực chức năng, các N-ga cuối, mà mục tiêu protein của sự suy thoái, và C-terminus, đó là cần thiết cho các ràng buộc và kích hoạt cdc2 (hình 4C). Khi thể hiện một mình, N-terminus của nhím biển cyclin B được hiệu quả phân hủy trong quá trình nguyên phân (Glotzer et al, 1991;.. Holloway et al, 1993), và khi hợp nhất với một loại protein dị loại, các protein có thể được nhắm mục tiêu để tiêu hủy. Tuy nhiên, đột biến của Xenopus cyclin A và B2 chặn ràng buộc để cdc2 ức chế sự xuống cấp của họ, cho thấy rằng các yêu cầu của sự suy thoái của họ có thể phức tạp hơn (Stewart et al, 1994;. Van der Velden và Lohka, 1994). Nhiều chứng cứ hiện nay yêu cyclin là mục tiêu cho sự xuống cấp của con đường ubiquitin, mà đã được liên quan đến doanh thu của các nhà quản lý di động khác như ~ 53 (xem xét bởi Ciechanover và Schwartz, 1994): cyclin B được ubiquitinated trong phân bào, nhưng không interphase chiết xuất trứng Xenopus, và ubiquitination phụ thuộc vào sự hiện diện của một hộp tiêu hủy nguyên vẹn (Glotzer et al., 1991); ubiquitin methyl hóa, một chất ức chế của ubiquitin qua trung gian phân giải protein, khối sự xuống cấp của cyclin A và B trong chất chiết xuất từ phôi ngao (Hershko et al., 1991); và các đột biến ở các tiểu đơn vị của proteasome men, một phức hợp lớn cần thiết cho sự phân giải protein của protein ubiquitinated, bắt giữ các chu kỳ tế bào ở metaphase với mức độ cao của B-type cyclin và hoạt động kinase cdc2 (Ghislain et al, 1993;. Gordon et al. , 1993). Trong khi thisdoes không chứng minh rằng adefect trong cyclin B phân giải protein chịu trách nhiệm cho việc bắt giữ chu kỳ tế bào, nó là thú vị mà ít nhất một men proteasome đột biến có thể bị ức chế bởi việc xóa CLBP, các chính men B-type cyclin (Friedman và Snyder, 1994) . Sự tồn tại của các đột biến nondegradable của cyclin và vẫn giữ được khả năng kích hoạt CdcP kinase làm cho nó có thể kiểm tra giả thuyết rằng sự suy thoái cyclin và MPF bất hoạt được yêu cầu để thoát khỏi tình trạng phân bào. Đột biến gradable Nonde- của cyclin A hoặc B sẽ bắt giữ các chu kỳ tế bào có mức độ hoạt động kinase trong chiết xuất phôi, trong các tế bào của con người, và trong men (Murray et al, 1989;. Gallant và Nigg, 1992;. Ghiara et al, 1991;. Luca et al, 1991), chỉ ra rằng suy thoái cyclin là cần thiết cho sự bất hoạt của MPF. Tuy nhiên, kiểm tra chặt chẽ các hình thái trục chính trong quá trình bắt giữ phân bào tiết lộ rằng sister chromatid tách xảy ra bình thường, bắt giữ xảy ra trong telophase (1993 Hollowayet al.). Ngoài ra, một số chủng đột biến của nấm men Saccharomyces cerevisiae hoàn anaphase mà không khử hoạt tính MPF (Surana et al., 1993). Những dữ liệu này cho thấy rằng MPF bất hoạt không
cần thiết cho việc chuyển đổi sang anaphase, mà đúng hơn là MPF phải được khử hoạt tính cho tế bào hoàn cytokinesis và trở về trạng thái interphase (Hình 48).