Multiple IPTG induction strategy on

Multiple IPTG induction strategy on improving Pfu DNA polymerase production in shake flasks
The total amount of IPTG addition was too low to result in optimal expression, and the higher Pfu DNA polymerase activity correlated with higher dosages of IPTG (Table 1). One effective induction method was the addition of 75 μM IPTG seven times, at 0.5 h intervals from 2 to 5 h. Using this IPTG induction strategy, the Pfu DNA polymerase activity increased 14.5 % compared with addition of a single dose of 1 mM IPTG. In addition, using this strategy, the total dosage of IPTG was equivalent to 0.525 mM, approximately half dosage that of the full 1 mM induction. Another effective method of IPTG addition was the addition of 100 lM IPTG four times at 1 h intervals from 2 to 5 h. Using this strategy, the Pfu DNA polymerase activity reached 624 U mL-1 medium, a 13.5 % increase compared to the control and resulting in a final dosage of IPTG equivalent to 0.4 mM. Table 1 showed that the total dosage of multiple adding IPTG was better in the range of 0.4–0.6 mM, and it was not full induction below the range but the expression of Pfu was inhibited above the range. The induction method consisting of the addition of 0.1 mM
IPTG four times at 1 h intervals was selected as the developed induction strategy.
Mechanism on multiple IPTG addition for improving Pfu DNA polymerase production
The changes of the IPTG concentration in the liquid medium and within the cells were measured in response to two different methods of IPTG addition. In the first, a single addition of IPTG (IPTG concentrations ranged from 0.1 to 2.0 mM) was conducted at 2 h. The second was the multiple additions of 0.1 mM of IPTG every hour from 2 to 6 h (four additions). Samples were collected over time until 12 h, and the concentrations of IPTG in the liquid medium and within the cells were analyzed.

Kết quả (Việt) 1:

Nhiều IPTG cảm ứng chiến lược về nâng cao Pfu DNA polymerase sản xuất ở lắc bi-đôngTổng số tiền bổ sung IPTG là quá thấp để gây ra biểu thức tối ưu, và các hoạt động Pfu DNA polymerase cao tương quan với liều lượng cao hơn của IPTG (bảng 1). Một phương pháp hiệu quả cảm ứng là bổ sung 75 μM IPTG bảy lần, cách 0.5 h khoảng từ 2 đến 5 h. sử dụng chiến lược này cảm ứng IPTG, Pfu DNA polymerase hoạt động tăng 14,5% so với bổ sung của một liều duy nhất 1 mm IPTG. Ngoài ra, sử dụng chiến lược này, liều IPTG, tất cả là tương đương với 0.525 mM, khoảng một nửa liều lượng của cảm ứng đầy đủ 1 mM. Một phương pháp hiệu quả của IPTG bổ sung là thêm vào 100 lM IPTG bốn lần lúc 1 h khoảng từ 2 đến 5 h. sử dụng chiến lược này, các hoạt động Pfu DNA polymerase đạt 624 U mL-1 trung bình, một sự gia tăng 13,5% so với sự kiểm soát và kết quả là một liều lượng cuối cùng của IPTG tương đương với cách 0.4 mM. Bảng 1 cho thấy tất cả các liều lượng nhiều thêm IPTG là tốt hơn trong phạm vi của 0.4-0.6 mM, và nó đã không đầy đủ cảm ứng dưới dãy nhưng sự biểu hiện của Pfu ức chế trên phạm vi. Phương pháp cảm ứng bao gồm việc bổ sung các 0,1 mMIPTG bốn lần tại các khoảng 1 h được lựa chọn như là chiến lược phát triển cảm ứng.Cơ chế trên nhiều IPTG bổ sung để cải thiện Pfu DNA polymerase sản xuấtNhững thay đổi của tập trung IPTG trong môi trường lỏng và trong các tế bào được đo để đáp ứng với hai phương pháp khác nhau của IPTG bổ sung. Trong lần đầu tiên, một bổ sung duy nhất của IPTG (IPTG nồng độ dao động từ 0.1 đến 2.0 mM) được tiến hành tại 2 h. Thứ hai là bổ sung nhiều 0,1 mM IPTG mỗi giờ từ 2 đến 6 h (bốn bổ sung). Mẫu đã được thu thập qua thời gian cho đến 12 h, và nồng độ IPTG trong môi trường lỏng và trong các tế bào được phân tích.