Multiple myeloma (MM) is a terminal

Multiple myeloma (MM) is a terminally differentiated B cell neoplastic disorder, characterized by the presence of clonal proliferation of malignant plasma cells (PCs) in bone marrow and excessive monoclonal immunoglobulin associated with organ dysfunction [1]. Furthermore, MM is also a genetically heterogeneous disease, and whole-genome screening studies have shown that almost all MM patients harbor genetic abnormalities [2–4]. These genetic abnormalities can be caused by translocation of immunoglobulin heavy chain alleles (IgH) with various partner chromosome alleles, copy number variation (CNV) or acquired mutation [5]. As complex genome contributes to the initiation and progression of MM, cytogenetic aberration has emerged as the most important prognostic factor and is currently being used to predict the prognosis and make medical decisions for therapy [6].

Although conventional metaphase karyotyping offers a full view of chromosomes, alterations are only detected in 30% of MM cases due to the low mitotic activity of MM cells and the low resolution of the technique [7]. Interphase fluorescence in situ hybridization (iFISH) is able to overcome this shortcoming, and approximately 90% of abnormalities are reported when iFISH is applied for CD138 tumor cells [8]. Therefore, iFISH has emerged as the most viable and widely used approach to detect cytogenetic aberrations in MM. However, the problem remains since iFISH analysis is a laborious and time-consuming method with high cost, and is only capable to detect deletion or amplification of sequences larger than 20–50 kb. Furthermore, mutations cannot be detected by iFISH. In order to provide detailed evaluation of genomic complexity in MM, DNA microarray/comparative genome hybridization (CGH), next-generation sequencing (NGS), and gene expression profile (GEP) analysis have been carried out [8]. Although these novel techniques are more sensitive and amenable to higher throughput analysis, these assays are still difficult to be used in the routine clinical settings due to the cost and turnaround time.

Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) is a multiplex polymerase chain reaction (PCR) method for detecting CNVs up to 50 different genomic sequences simultaneously. MLPA probes are able to recognize target sequences with 50–100 nucleotides in length, which makes it possible to be applied for highly fragmented DNA, and the detection of small deletion encompassing only a single exon [9]. To date, hundreds of special panels have been developed and used successfully in the diagnosis of both benign and malignant diseases.

In this study, MLPA analysis was used to detect CNVs in MM using purified CD138 cells. The results were compared with iFISH data to determine the efficiency of MLPA. The combinatorial application of MLPA and iFISH in the routine diagnosis of MM was proposed.

Kết quả (Việt) 1:

Multiple myeloma (MM) là một rối loạn ung thư tế bào B Nan phân biệt, đặc trưng bởi sự hiện diện của vô tính gia tăng của các tế bào plasma ác tính (máy tính) trong tủy xương immunoglobulin monoclonal quá nhiều liên kết với các rối loạn chức năng nội tạng [1]. Hơn nữa, MM cũng là một bệnh di truyền không đồng nhất, và kiểm tra toàn bộ bộ gen nghiên cứu chỉ ra rằng hầu như tất cả các bệnh nhân MM harbor di truyền bất thường [2-4]. Những bất thường di truyền có thể được gây ra bởi translocation globulin miễn dịch nặng chuỗi alen (IgH) với các đối tác nhiễm sắc thể alen, sao chép số biến thể (CNV) hoặc mua lại đột biến [5]. Như phức tạp gen góp phần khởi xướng và tiến triển của MM, cytogenetic sai đã nổi lên như là yếu tố quan trọng nhất prognostic và hiện nay đang được sử dụng để dự đoán tiên lượng và thực hiện các quyết định y tế để điều trị [6].Mặc dù thông thường metaphase karyotyping cung cấp một cái nhìn đầy đủ của nhiễm sắc thể, thay đổi chỉ được phát hiện trong 30% các trường hợp MM do thấp hoạt động phân bào của các tế bào MM và độ phân giải thấp của kỹ thuật [7]. Interphase huỳnh quang tại chỗ lai giống (iFISH) có thể khắc phục thiếu sót này, và khoảng 90% các bất thường được báo cáo khi iFISH được áp dụng cho các tế bào khối u CD138 [8]. Do đó, iFISH đã nổi lên như là phương pháp khả thi nhất và được sử dụng rộng rãi để phát hiện cytogenetic quang sai trong MM. Tuy nhiên, vấn đề còn lại kể từ khi iFISH phân tích một phương pháp siêng năng và tốn thời gian với chi phí cao, và chỉ có khả năng phát hiện xoá hoặc được khuếch đại của chuỗi lớn hơn 20-50 kb. Hơn nữa, đột biến không thể được phát hiện bởi iFISH. Để cung cấp chi tiết đánh giá của các gen phức tạp trong MM, lai giống DNA microarray/so sánh bộ gen (CGH), thế hệ tiếp theo trình tự (Spincam) và phân tích hồ sơ (GEP) biểu hiện gen đã được tiến hành [8]. Mặc dù các kỹ thuật mới lạ amenable để cao hơn thông qua phân tích và nhạy cảm hơn, những thử nghiệm là vẫn còn khó khăn để được sử dụng trong các thiết lập lâm sàng thường xuyên do chi phí và quay vòng thời gian.Multiplex ligation phụ thuộc vào thăm dò khuếch đại (MLPA) là một phương pháp phản ứng dây chuyền (PCR) multiplex polymerase để phát hiện CNVs lên đến 50 các trình tự gen khác nhau cùng một lúc. Đầu dò MLPA có thể nhận biết mục tiêu chuỗi với 50-100 nucleotide trong chiều dài, làm cho nó có thể được áp dụng rất phân mảnh ADN, và phát hiện nhỏ xóa bao gồm chỉ một đơn exon [9]. Đến nay, hàng trăm tấm đặc biệt đã được phát triển và sử dụng thành công trong việc chẩn đoán bệnh lành tính và ác tính.Trong nghiên cứu này, MLPA phân tích được sử dụng để phát hiện CNVs ở MM sử dụng tế bào CD138 tinh khiết. Kết quả đã được so sánh với các dữ liệu iFISH để xác định hiệu quả của MLPA. Tổ hợp ứng dụng MLPA và iFISH trong chẩn đoán thông thường của MM được đề nghị.

Kết quả (Việt) 2:

Nhiều myeloma (MM) là một tế bào B rối loạn ung thư giai đoạn cuối khác biệt, đặc trưng bởi sự hiện diện của tăng sinh vô tính của các tế bào plasma ác tính (PC) trong tủy xương và globulin miễn dịch đơn dòng quá mức liên quan đến rối loạn chức năng cơ quan [1]. Hơn nữa, MM cũng là một căn bệnh không đồng nhất về mặt di truyền, và các nghiên cứu kiểm tra toàn bộ hệ gen đã chỉ ra rằng hầu hết các bệnh nhân MM chứa chấp những bất thường di truyền [2-4]. Những bất thường về di truyền có thể được gây ra bởi chuyển của alen globulin miễn dịch chuỗi nặng (igh) với alen nhiễm sắc thể đối tác khác nhau, sao chép biến số (CNV) hoặc đột biến có được [5]. Như hệ gen phức tạp góp phần vào việc bắt đầu và tiến triển của MM, quang sai di truyền tế bào đã nổi lên như là yếu tố tiên lượng quan trọng nhất và hiện đang được sử dụng để dự đoán tiên lượng và đưa ra quyết định y tế để điều trị [6].

Mặc dù metaphase karyotyping thông thường cung cấp một cái nhìn đầy đủ nhiễm sắc thể, thay đổi chỉ được phát hiện trong 30% các trường hợp MM do hoạt động phân bào của các tế bào thấp MM và độ phân giải thấp của kỹ thuật này [7]. Interphase huỳnh quang tại chỗ lai (iFISH) có thể khắc phục hạn chế này, và khoảng 90% các bất thường được báo cáo khi iFISH được áp dụng cho các tế bào khối u CD138 [8]. Do đó, iFISH đã nổi lên như một giải pháp khả thi nhất và sử dụng rộng rãi để phát hiện sai lệch di truyền tế bào trong MM. Tuy nhiên, vấn đề vẫn còn từ phân tích iFISH là một phương pháp mất thời gian và tốn nhiều thời gian với chi phí cao, và chỉ có khả năng để phát hiện xóa hoặc khuếch đại trình tự lớn hơn 20-50 kb. Hơn nữa, các đột biến không thể được phát hiện bởi iFISH. Để cung cấp đánh giá chi tiết của sự phức tạp của bộ gen trong MM, microarray DNA / so sánh bộ gen lai (CGH), thế hệ tiếp theo trình tự (NGS), và biểu hiện gen (GEP) phân tích đã được thực hiện [8]. Mặc dù các kỹ thuật mới nhạy cảm hơn và áp dụng các nghiên thông lượng cao hơn, các xét nghiệm vẫn còn khó khăn để được sử dụng trong các thiết lập lâm sàng thường do chi phí và quay vòng thời gian.

Multiplex thắt phụ thuộc vào đầu dò khuếch đại (MLPA) là một phản ứng dây chuyền polymerase multiplex phương pháp (PCR) để phát hiện CNVs lên đến 50 chuỗi gen khác nhau cùng một lúc. MLPA đầu dò có thể nhận ra các chuỗi mục tiêu với 50-100 nucleotide dài, mà làm cho nó có thể được áp dụng cho DNA rất phân tán, và phát hiện xóa nhỏ bao gồm chỉ một exon đơn [9]. Cho đến nay, hàng trăm tấm đặc biệt đã được phát triển và sử dụng thành công trong việc chẩn đoán các loại bệnh lành tính và ác tính.

Trong nghiên cứu này, phân tích MLPA đã được sử dụng để phát hiện CNVs trong MM sử dụng tế bào CD138 tinh khiết. Các kết quả được so sánh với dữ liệu iFISH để xác định hiệu quả của MLPA. Các ứng dụng tổ hợp của MLPA và iFISH trong chẩn đoán thường xuyên của MM đã được đề xuất.