MethodsThe method desenbed here was

Methods
The method desenbed here was slightly modified froom Romero (23) and can be used for determining the presence of, or quantify - ing, phytoplamas (see Fig. 1)
1. Dilute the stock solution to working concentration (1x): take 100 uL of stock soution (1,000x) and add 100 mL of sterile distilled water. Store the working solution at 4 oC.
2. Take the young stems and petioles form the diseased plants (see Note 2).
3. Cut the samples in 1 cm lenghts and put them in sterile distilled water (see Note 3).
4. Immerse the samples in 5% glutaraldehyde solution and wash wiht 0.1 M phosphate buffer pH 6.9.
6. With the freezing microtome, cut longitudinal sections of 10 - 1 um from the fixed samples (see Note 4).
7. Place the sample seftion sections in the DAPI stain (1x working solu-tion for 25 min.
8. Remove the sectinons from the stain and put them in sterile distilled water to romove to remove some of the dye (must have at least 50% of the dye when mounted). Immediately mount sections on a slide and place the coverslip (see Note 5).
9. Observe the samples with a fluorescence microsope with a range of objective lenses (10x, 40x, 100x) (see Note 6).

Kết quả (Việt) 1:

Phương phápPhương pháp desenbed ở đây là một chút sửa đổi froom Romero (23) và có thể được sử dụng để xác định sự hiện diện của, hoặc định lượng - ing, phytoplamas (xem hình 1)1. pha loãng các giải pháp cổ phiếu để tập trung làm việc (1 x): mất 100 uL soution cổ phiếu (1, 000 x) và thêm 100 mL nước cất vô trùng. Lưu trữ giải pháp làm việc ở 4 đựơc2. đi theo hình thức trẻ thân và cuống lá cây bệnh (xem lưu ý 2).3. cắt các mẫu trong 1 cm lenghts và đặt chúng trong vô trùng nước cất (xem lưu ý 3).4. đắm mẫu trong 5% glutaraldehyde giải pháp và rửa với 0.1 M phosphat đệm pH 6.9.6. với lưỡi làm đóng băng, cắt theo chiều dọc phần của 10-1 um từ các mẫu cố định (xem lưu ý 4).7. đặt phần mẫu seftion trong DAPI vết (1 x làm việc solu-tion trong 25 phút.8. hủy bỏ các sectinons từ các vết bẩn và đặt chúng trong vô trùng nước cất để romove để loại bỏ một số thuốc nhuộm (phải có ít nhất 50% của thuốc nhuộm khi gắn kết). Ngay lập tức gắn kết các phần trên một slide và đặt coverslip (xem lưu ý 5).9. quan sát các mẫu với một microsope huỳnh quang với một loạt các ống kính mục tiêu (10 x, 40 x 100 x) (xem lưu ý 6).

Kết quả (Việt) 2:

Phương pháp
Phương pháp desenbed đây đã được thay đổi chút ít Froom Romero (23 tuổi) và có thể được sử dụng để xác định sự hiện diện của, hoặc định lượng - ing, phytoplamas (xem hình 1).
1. Pha loãng dung dịch với nồng độ (1x) ngày làm việc: mất 100 uL của cổ SOUTION (1,000x) và thêm 100 ml nước cất vô trùng. Lưu trữ các giải pháp làm việc tại 4 oC.
2. Lấy thân non và cuống lá tạo thành các cây bị bệnh (xem chú thích 2).
3. Cắt mẫu trong 1 lenghts cm và đặt chúng trong nước cất vô trùng (xem chú 3).
4. Đắm các mẫu trong dung dịch glutaraldehyde 5% và rửa VỚI 0,1 M phosphate đệm pH 6,9.
6. Với các lát mỏng đóng băng, cắt theo chiều dọc của phần 10-1 um ​​từ mẫu cố định (xem chú 4).
7. Đặt các phần mẫu seftion trong vết DAPI (1x làm việc solu-tion trong 25 phút.
8. Tháo sectinons từ các vết bẩn và đặt chúng trong nước cất vô trùng để romove để loại bỏ một số chất nhuộm (phải có ít nhất 50% thuốc nhuộm khi gắn kết). Ngay lập tức gắn kết phần vào slide show và đặt bao ngoài (xem chú 5).
9. Quan sát các mẫu với một microsope huỳnh quang với một loạt các vật kính (10x, 40x, 100x) (xem chú 6).