Reversed-phase chromatography (also

Reversed-phase chromatography (also called RPC, reverse-phase chromatography, or hydrophobic chromatography) includes any chromatographic method that uses a hydrophobic stationary phase.[1] RPC refers to liquid (rather than gas) chromatography.

The term "reversed-phase" has a historical background. In the 1970s, most liquid chromatography was performed using a solid support stationary phase (also called a "column") containing unmodified silica or alumina resins. This method is now called "normal phase chromatography". In normal phase chromatography, the stationary phase is hydrophilic and therefore has a strong affinity for hydrophilic molecules in the mobile phase. Thus, the hydrophilic molecules in the mobile phase tend to bind (or "adsorb") to the column, while the hydrophobic molecules pass through the column and are eluted first. In normal phase chromatography, hydrophilic molecules can be eluted from the column by increasing the polarity of the solution in the mobile phase.

The introduction of a technique using alkyl chains covalently bonded to the solid support created a hydrophobic stationary phase, which has a stronger affinity for hydrophobic compounds. The use of a hydrophobic stationary phase can be considered the opposite, or "reverse", of normal phase chromatography - hence the term "reversed-phase chromatography".[2][3] Reversed-phase chromatography employs a polar (aqueous) mobile phase. As a result, hydrophobic molecules in the polar mobile phase tend to adsorb to the hydrophobic stationary phase, and hydrophilic molecules in the mobile phase will pass through the column and are eluted first.[2][4] Hydrophobic molecules can be eluted from the column by decreasing the polarity of the mobile phase using an organic (non-polar) solvent, which reduces hydrophobic interactions. The more hydrophobic the molecule, the more strongly it will bind to the stationary phase, and the higher the concentration of organic solvent that will be required to elute the molecule.

Many of the mathematical and experimental considerations used in other chromatographic methods also apply to RPC (for example, the separation resolution is dependent on the length of the column). It can be used for the separation of a wide variety of molecules. It is not typically used for separation of proteins, because the organic solvents used in RPC can denature many proteins. For this reason, normal phase chromatography is more commonly used for separation of proteins.

Today, RPC is a frequently used analytical technique. There are a variety of stationary phases available for use in RPC, allowing great flexibility in the development of separation methods.

Contents [hide]
1 Stationary phases
1.1 Silica-based stationary phases
2 Mobile phases
3 See also
4 References
5 External links
Stationary phases[edit]
Silica-based stationary phases[edit]
Any inert non-polar substance that achieves sufficient packing can be used for reversed-phase chromatography. The most popular column is an octadecyl carbon chain (C18)-bonded silica (USP classification L1) with 297 columns commercially available.[5] This is followed by C8-bonded silica (L7 - 166 columns), pure silica (L3 - 88 columns), cyano-bonded silica (L10 - 73 columns) and phenyl-bonded silica (L11 - 72 columns). Note that C18, C8 and phenyl are dedicated reversed-phase resins, while cyano columns can be used in a reversed-phase mode depending on analyte and mobile phase conditions. It should be noted at this point that not all C18 columns have identical retention properties. Surface functionalization of silica can be performed in a monomeric or a polymeric reaction with different short-chain organosilanes used in a second step to cover remaining silanol groups (end-capping). While the overall retention mechanism remains the same, subtle differences in the surface chemistries of different stationary phases will lead to changes in selectivity.

Modern columns have different polarity. PFP is pentafluorphenyl. CN is cyano. NH2 is amino. ODS is octadecyl or C18. ODCN is a mixed mode column consisting of C18 and nitrile. SCX is strong cationic exchange (used for separation of organic amines). SAX is strong anionic exchange (used for separation of carboxylic acid compounds).

Mobile phases[edit]
Mixtures of water or aqueous buffers and organic solvents are used to elute analytes from a reversed-phase column.[2] The solvents must be miscible with water, and the most common organic solvents used are acetonitrile, methanol, and tetrahydrofuran (THF). Other solvents can be used such as ethanol or 2-propanol (isopropyl alcohol). Elution can be performed isocratically (the water-solvent composition does not change during the separation process) or by using a solution gradient (the water-solvent composition changes during the separation process, usually by decreasing the polarity). The pH of the mobile phase can have an important role on the retention of an analyte and can change the selectivity of certain analytes.

Charged analytes can be separated on a reversed-phase column by the use of ion-pairing (also called ion-interaction). This technique is known as reversed-phase ion-pairing chromatogra

Kết quả (Việt) 1:

Sắc kí đảo ngược pha (tiếng Anh thường gọi là RPC, đảo ngược pha sắc kí hoặc sắc kí kỵ nước) bao gồm bất kỳ phương pháp chromatographic sử dụng một giai đoạn văn phòng phẩm kỵ nước. [1] RPC đề cập đến sắc ký lỏng (chứ không phải là khí).Thuật ngữ "đảo ngược-pha" có một nền lịch sử. Trong thập niên 1970, sắc ký lỏng hầu hết được thực hiện bằng cách sử dụng một giai đoạn văn phòng phẩm rắn hỗ trợ (tiếng Anh thường gọi là một "cột") có chứa các loại nhựa chưa sửa đổi của silica hoặc nhôm. Phương pháp này bây giờ được gọi là "giai đoạn bình thường sắc kí". Trong sắc ký bình thường giai đoạn, giai đoạn văn phòng phẩm là Purifying và do đó có một ái lực mạnh mẽ cho Purifying phân tử trong giai đoạn di động. Vì vậy, các phân tử Purifying trong giai đoạn di động có xu hướng để ràng buộc (hoặc "adsorb") để cột, trong khi các phân tử hydrophobic đi qua các cột và được eluted đầu tiên. Trong giai đoạn bình thường sắc kí, Purifying phân tử có thể được eluted từ cột bằng cách tăng cực của các giải pháp trong giai đoạn di động.Sự ra đời của một kỹ thuật sử dụng dây chuyền ankyl một liên kết với sự hỗ trợ vững chắc đã tạo ra một giai đoạn văn phòng phẩm kỵ nước, trong đó có một mối quan hệ mạnh mẽ hơn cho các hợp chất kỵ nước. Sử dụng một giai đoạn văn phòng phẩm kỵ nước có thể được coi là đối diện, hoặc "đảo ngược", của sắc kí giai đoạn bình thường - do đó thuật ngữ "giai đoạn đảo ngược sắc kí". [2] [3] Reversed pha sắc kí sử dụng một giai đoạn cực điện thoại di động (dung dịch). Kết quả là, các phân tử hydrophobic trong giai đoạn di động cực có xu hướng adsorb sang giai đoạn văn phòng phẩm kỵ nước, và các phân tử Purifying trong giai đoạn di động sẽ đi qua các cột và được eluted đầu tiên. [2] [4] kỵ nước phân tử có thể được eluted từ cột bằng cách giảm phân cực của giai đoạn điện thoại di động bằng cách sử dụng một dung môi hữu cơ (không phân cực), làm giảm kỵ nước tương tác. Kỵ nước nhiều hơn các phân tử, càng mạnh mẽ nó sẽ ràng buộc để giai đoạn văn phòng phẩm, và cao hơn nồng độ của các dung môi hữu cơ sẽ được yêu cầu để elute các phân tử.Nhiều người trong số các cân nhắc thực nghiệm và toán học được sử dụng trong các phương pháp chromatographic cũng áp dụng cho RPC (ví dụ, độ phân giải ly thân là phụ thuộc vào độ dài của các cột). Nó có thể được sử dụng cho sự chia tách của một loạt các phân tử. Nó không thường sử dụng tách của protein, bởi vì các dung môi hữu cơ được sử dụng trong RPC có thể denature nhiều protein. Vì lý do này, sắc ký bình thường pha thường được sử dụng cho ly thân của protein.Hôm nay, RPC là một kỹ thuật phân tích được sử dụng thường xuyên. Có rất nhiều văn phòng phẩm giai đoạn có sẵn để sử dụng trong RPC, cho phép sự linh hoạt tuyệt vời trong sự phát triển của phương pháp tách.Nội dung [ẩn] 1 giai đoạn văn phòng phẩm1.1 silica dựa trên giai đoạn văn phòng phẩmGiai đoạn 2 điện thoại di động3 Xem thêm4 tham khảo5 liên kết ngoàiVăn phòng phẩm giai đoạn [sửa]Giai đoạn văn phòng phẩm silica dựa trên [sửa]Bất kỳ chất không phân cực trơ đạt được đóng gói đầy đủ có thể được sử dụng cho giai đoạn đảo ngược sắc kí. Cột phổ biến nhất là một chuỗi cacbon octadecyl (C18)-ngoại quan silica (USP phân loại L1) với 297 cột thương mại có sẵn. [5] tiếp theo là ngoại quan C8 silica (L7 - 166 cột), tinh khiết silica (L3 - 88 cột), cyano ngoại quan silica (L10 - 73 cột) và ngoại quan phênyl silica (L11 - 72 cột). Lưu ý rằng C18, C8 và phênyl là dành riêng cho giai đoạn đảo ngược loại nhựa, trong khi cyano cột có thể được sử dụng trong một chế độ đảo ngược pha tùy thuộc vào analyte và điện thoại di động giai đoạn điều kiện. Nó nên được ghi nhận vào thời điểm này rằng không phải tất cả C18 cột có tính chất giống hệt nhau lưu giữ. Functionalization bề mặt của silica có thể được thực hiện trong một monomeric hoặc một phản ứng polymer với khác nhau ngắn-chuỗi organosilanes được sử dụng trong một bước thứ hai để trang trải các nhóm silanol còn lại (kết thúc suất). Trong khi cơ chế lưu trữ tổng thể vẫn cùng một, tinh tế khác biệt trong chemistries giai đoạn khác nhau của văn phòng phẩm, bề mặt sẽ dẫn đến những thay đổi trong chọn lọc.Cột hiện đại có khác nhau phân cực. PFP là pentafluorphenyl. CN là cyano. NH2 là amin. ODS là octadecyl hoặc C18. ODCN là một cột chế độ hỗn hợp gồm C18 và nitrile. SCX là mạnh mẽ trao đổi cation (được sử dụng cho ly thân của Amin hữu cơ). SAX là mạnh mẽ trao đổi anion (được sử dụng để tách các axít cacboxylic hợp chất).Điện thoại di động giai đoạn [sửa]Hỗn hợp của nước hoặc bộ đệm dung dịch nước và dung môi hữu cơ được sử dụng để elute analytes từ một đảo ngược giai đoạn cột. [2] các dung môi phải như với nước, và các dung môi hữu cơ phổ biến nhất được sử dụng là acetonitrile, methanol, và tetrahydrofuran (THF). Các dung môi khác có thể được sử dụng như ethanol hoặc 2-propanol (isopropyl rượu). Elution có thể là thực hiện isocratically (các thành phần nước dung môi không thay đổi trong quá trình ly thân) hoặc bằng cách sử dụng một giải pháp gradient (các dung môi nước thành phần thay đổi trong quá trình ly thân, thường bằng cách giảm phân cực). Độ pH của giai đoạn điện thoại di động có thể có một vai trò quan trọng trong việc lưu giữ một analyte và có thể thay đổi chọn lọc một số analytes.Tính analytes có thể được tách ra trên đảo ngược-giai đoạn trụ bằng cách sử dụng ion ghép nối (tiếng Anh thường gọi là ion tương tác). Kỹ thuật này được gọi là đảo ngược pha ghép nối ion chromatogra

Kết quả (Việt) 2:

Đảo ngược pha sắc ký (cũng được gọi là RPC, ngược pha sắc ký, sắc ký hay kỵ nước) bao gồm bất kỳ phương pháp sắc ký mà sử dụng một pha tĩnh kỵ nước. [1] RPC đề cập đến chất lỏng (chứ không phải khí) sắc ký. Thuật ngữ "giai đoạn đảo ngược" có một nền lịch sử. Trong những năm 1970, sắc ký lỏng nhất được thực hiện bằng cách sử dụng một sự hỗ trợ vững chắc pha tĩnh (cũng được gọi là một "cột") có chứa silica hay alumina nhựa chưa sửa đổi. Phương pháp này hiện nay được gọi là "bình thường pha sắc ký". Trong sắc ký giai đoạn bình thường, các pha tĩnh là ưa nước và do đó có ái lực mạnh mẽ cho các phân tử ưa nước trong pha động. Như vậy, các phân tử ưa nước trong pha động có xu hướng kết (hoặc "hấp thụ") đến cột, trong khi các phân tử kỵ nước đi qua các cột và được tách rửa đầu tiên. Trong sắc ký giai đoạn bình thường, các phân tử ưa nước có thể được rửa giải ra khỏi cột bằng cách gia tăng sự phân cực của các giải pháp trong pha động. Sự ra đời của một kỹ thuật sử dụng các chuỗi alkyl đồng hóa trị ngoại quan đến sự hỗ trợ vững chắc tạo ra một pha tĩnh kỵ nước, trong đó có một mối quan hệ mạnh mẽ hơn các hợp chất kỵ nước. Việc sử dụng một pha tĩnh kỵ nước có thể được coi là đối diện, hay "đảo ngược", sắc ký giai đoạn bình thường -. Do đó thuật ngữ "sắc ký giai đoạn đảo ngược" [2] [3] sắc ký pha đảo ngược sử dụng một cực (dung dịch nước) điện thoại di động giai đoạn. Kết quả là, các phân tử kỵ nước trong pha động cực có xu hướng hấp thụ các giai đoạn văn phòng phẩm kỵ nước và các phân tử ưa nước trong pha động sẽ đi qua các cột và được tách rửa đầu tiên. [2] [4] phân tử kỵ nước có thể được rửa giải từ cột bằng cách giảm độ phân cực của pha động bằng cách sử dụng một cách hữu cơ (không phân cực) dung môi, làm giảm tương tác kỵ nước. Các kỵ hơn các phân tử, các mạnh mẽ hơn nữa nó sẽ liên kết với các pha tĩnh, và cao hơn nồng độ của dung môi hữu cơ có thể sẽ được yêu cầu để rửa giải chất phân tử. Nhiều người trong số những cân nhắc toán học và thí nghiệm được sử dụng trong phương pháp sắc ký khác cũng áp dụng cho RPC (ví dụ, việc giải quyết ly thân là phụ thuộc vào độ dài của cột). Nó có thể được sử dụng cho việc tách một loạt các phân tử. Nó không thường được sử dụng để phân tách các protein, vì các dung môi hữu cơ được sử dụng trong RPC có thể làm biến tính nhiều protein. Vì lý do này, sắc ký giai đoạn bình thường thường được sử dụng để phân tách các protein. Hôm nay, RPC là một kỹ thuật phân tích thường xuyên sử dụng. Có một loạt các giai đoạn văn phòng phẩm có sẵn để sử dụng trong RPC, cho phép sự linh hoạt tuyệt vời trong việc phát triển các phương pháp tách. Mục lục [ẩn] 1 giai đoạn Stationary 1.1 Silica dựa trên giai đoạn stationary 2 giai đoạn di động 3 Xem thêm 4 Tham khảo 5 Liên kết ngoài giai đoạn Stationary [ sửa] Silica dựa trên các giai đoạn văn phòng phẩm [sửa] Bất kỳ chất không phân cực trơ, đạt đủ đóng gói có thể được sử dụng cho sắc giai đoạn đảo ngược. . Các cột phổ biến nhất là một chuỗi octadecyl carbon (C18) silica -bonded (USP phân loại L1) với 297 cột thương mại có sẵn [5] Tiếp theo là silica C8-ngoại quan (L7 - 166 cột), silica tinh khiết (L3 - 88 cột), cyano-ngoại quan silica (L10 - 73 cột) và phenyl-ngoại quan silica (L11 - 72 cột). Lưu ý rằng C18, C8 và phenyl được dành riêng nhựa giai đoạn đảo ngược, trong khi cột cyano có thể được sử dụng trong một chế độ giai đoạn đảo ngược tùy thuộc vào chất phân tích và pha động điều kiện. Cần lưu ý ở điểm này mà không phải tất cả các cột C18 có đặc tính giữ lại giống hệt nhau. Functionalization bề mặt silica có thể được thực hiện trong một monomeric hoặc một phản ứng polyme với organosilanes chuỗi ngắn khác nhau được sử dụng trong một bước thứ hai để đưa nhóm silanol còn lại (end-đóng nắp). Trong khi cơ chế duy trì tổng thể vẫn giữ nguyên, sự khác biệt tinh tế trong các chất hóa học bề mặt của giai đoạn văn phòng phẩm khác nhau sẽ dẫn đến những thay đổi trong tính chọn lọc. cột hiện đại có phân cực khác nhau. PFP là pentafluorphenyl. CN là cyano. NH2 là amin. ODS là octadecyl hoặc C18. ODCN là một cột chế độ hỗn hợp gồm C18 và nitrile. SCX là trao đổi cation mạnh (được sử dụng để tách các amin hữu cơ). SAX là trao đổi anion mạnh (được sử dụng để tách các hợp chất axit cacboxylic). giai đoạn di động [sửa] Hỗn hợp nước hoặc đệm dung dịch nước và dung môi hữu cơ được sử dụng để rửa giải chất phân tích từ một cột giai đoạn đảo ngược. [2] Các dung môi phải được trộn lẫn với nước và các dung môi hữu cơ phổ biến nhất được sử dụng là acetonitrile, methanol, và tetrahydrofuran (THF). Các dung môi khác có thể được sử dụng như ethanol hoặc 2-propanol (rượu isopropyl). Rửa giải có thể được thực hiện isocratically (thành phần nước dung môi không thay đổi trong suốt quá trình phân tách) hoặc bằng cách sử dụng một gradient dung dịch (nước-dung môi thay đổi thành phần trong quá trình tách, thường bằng cách giảm phân cực). Độ pH của pha động có thể có một vai trò quan trọng vào sự duy trì của một chất phân tích và có thể thay đổi lựa chọn của chất phân tích nhất định. Tính chất phân tích có thể được tách ra trên một cột giai đoạn đảo ngược bằng cách sử dụng các ion-pairing (còn gọi là ion tương tác ). Kỹ thuật này được gọi là giai đoạn đảo ngược chromatogra ion-pairing