RAPD reaction The RAPD reaction was

RAPD reaction
The RAPD reaction was performed according to the method developed by
(McClelland et al., 1995). The reactions were carried out in 25 µl volume in a tube
using eight random decanucleotide primers, OPC-1, OPC-2, OPC-3, OPC-4, OPC-5,
OPC-6, OPC-7, and OPC-8 (Operon Technologies Inc., USA). Each reaction tube
contained 30 ng template DNA, 1.5 mM MgCl
, 300 µM of dNTPs, 2.5 µl1xTaq
DNA polymerase buffer, 25 pM decanucleotide primer and 1.5 units of Taq DNA
polymerase (Genei, India). Amplification was performed in a DNA thermal cycler
(Techne Thermal cycler, England) using the following conditions: 95 ºC for 3 min; 36
cycles at 94 ºC for 1 min, 35.6 ºC for 30 s and 72 ºC for 1 min; final extension at 72
ºC for 2 min. PCR products were resolved on 1.2% agarose gel in 1xTAE buffer. The
DNA was stained with 0.5 mg/mL ethidium bromide, visualized and photographed
under a UV transilluminator. A sample without template DNA was included as a
negative control in each experiment to check contamination. Electrophoretic profile
was visualized under UV radiation and photographed with UV transilluminator, U.K.
The sizes of DNA fragments were estimated by comparison with standard Ladder 1kb
and 100 bp (Banglore Genei, India).
2

Kết quả (Việt) 1:

RAPD phản ứng Phản ứng RAPD được thực hiện theo các phương pháp được phát triển bởi(McClelland et al., 1995). Các phản ứng đã được thực hiện trong 25 ML khối lượng trong ốngsử dụng lớp lót ngẫu nhiên decanucleotide 8, OPC-1, OPC-2, OPC-3, OPC-4, OPC-5,OPC-6, OPC-7 và OPC-8 (Operon Technologies Inc., USA). Mỗi ống phản ứngchứa 30 ng mẫu ADN, 1.5 mM MgCl, 300 μm dNTPs, 2.5 µl1xTaqDNA polymerase đệm, 25 AM decanucleotide mồi và 1.5 các đơn vị của Taq ADNpolymerase (Genei, Ấn Độ). Khuếch đại được thực hiện trong một người đạp xe máy nhiệt DNA(Techne nhiệt người đạp xe máy, Anh) bằng cách sử dụng các điều kiện sau đây: 95 ºC cho 3 phút; 36chu kỳ tại 94 ºC cho 1 phút, 35,6 ºC 30 s và 72 ºC cho 1 phút; cuối cùng mở rộng 72ºC 2 min. PCR sản phẩm đã được giải quyết trên gel agarose 1,2% trong bộ đệm 1xTAE. CácDNA đã được nhuộm màu với bromua ethidium 0.5 mg/mL, hình dung và chụp ảnhtheo một transilluminator UV. Một mẫu mà không có mẫu DNA đã được bao gồm như là mộttiêu cực điều khiển trong mỗi thử nghiệm để kiểm tra ô nhiễm. Electrophoretic hồ sơhình dung dưới tia cực tím và chụp ảnh với UV transilluminator, U.K.Các kích thước của các mảnh vỡ của ADN được ước tính nguồn chuẩn thang 1 kbvà 100 bp (Genei Banglore, Ấn Độ). 2

Kết quả (Việt) 2:

Phản ứng RAPD
Phản ứng RAPD đã được thực hiện theo các phương pháp được phát triển bởi
(McClelland et al., 1995). Các phản ứng được thực hiện ở 25 khối lượng ml trong một ống
sử dụng tám mồi decanucleotide ngẫu nhiên, OPC-1, OPC-2, OPC-3, OPC-4, OPC-5,
OPC-6, OPC-7, và OPC-8 (operon Technologies Inc., USA). Mỗi ống phản ứng
chứa 30 ng mẫu DNA, 1,5 mM MgCl
, 300 mM của dNTP, 2,5 μl1xTaq
DNA polymerase đệm, 25 PM decanucleotide mồi và 1,5 đơn vị Taq DNA
polymerase (Genei, Ấn Độ). Khuếch đại được thực hiện trong một chu trình nhiệt DNA
(techne nhiệt chu trình, Anh) sử dụng các điều kiện sau đây: 95 ºC trong 3 phút; 36
chu kỳ với 94 ºC trong 1 phút, 35,6 ºC trong 30 giây và 72 ºC trong 1 phút; mở rộng cuối cùng ở 72
ºC trong 2 phút. Sản phẩm PCR được giải quyết trên 1.2% gel agarose trong 1xTAE đệm. Các
DNA đã được nhuộm với 0,5 mg / mL ethidium bromide, hình dung và chụp ảnh
dưới một transilluminator UV. Một mẫu mà không có mẫu DNA được bao gồm như là một
kiểm soát tiêu cực trong mỗi thí nghiệm để kiểm tra ô nhiễm. Hồ sơ điện di
được hình dung dưới bức xạ UV và chụp ảnh với transilluminator UV, Vương quốc Anh
Các kích thước của các đoạn ADN được ước tính bằng cách so sánh với 1kb Ladder tiêu chuẩn
và 100 bp (Banglore Genei, Ấn Độ).
2