2.2. Initiation Stage:- 2.2.1. Plan

2.2. Initiation Stage:- 2.2.1. Plant Material and Preparation of
Explants:- During January 2007, dormant, but fully
vernalized shoots (20 cm) long were collected from
dormant, 4.0 years old peach tree cv. "Red June". The
dormant shoots were washed thoroughly under
running tap water to remove soil and other superficial
contamination. Thereafter, the dormant shoots were
rinsed in steriled-distilled water, placed in 500 ml
beaker containing 400 ml steriled-distilled water for
48 hrs. in the laboratory at 21±2˚C. They were then
transferred to a beaker containing 400 ml of a mixture
of 10 ppm kinetin and 10 ppm GA3 for 3weeks (PGRs
solution was changed every 72 hrs.). After 3weeks
the buds became active and the growth resumed.
When the shoots were 0.5-1.0 cm long, they were
excised and washed three times for 5 min. with
sterile-distilled water; these shoots were used as
explants.

2.2.2. Explant Disinfestations:- Under aseptic condition in Laminar Flow System,
the explants were treated with different concentrations
of NaOCl [0, 0.1, 0.2, 0.3, and 0.5 (w/v)]. [0, 2.0, 4.0,
6.0, and 10 % (v/v) commercial bleach solution
containing 5% NaOCl] for 10 min. followed by 3
rinses in sterile-distilled water.
The explants were then treated with (0, 25, 50,
and 100 ppm) Ampicillin solution (Troge, Germany)
for 5 min. then rinsed in sterile-distilled water 3.0-
times at 5 min. intervals the outer leaves were
removed from each explant .

2.3. Effect of Pretreatment on Shoot Proliferation:- To study the effect of pretreatment on explant
browning and shoot proliferation, sterilized explants
were placed aseptically in 150x25 test tubes
containing 15 ml of liquid MS medium supplemented
with 2.0 mg.L-l BA combined with 2.0 mg.L-l GA3 [Based on the results obtained form the experiment in
solid medium while the MS medium containing (0,
0.5, 1.0, and 2.0 mg.L-l) BA combined with (0, 0.25,
and 0.5 mg.L-l) IAA)] and media were changed every
2.0 weeks. The cultures were maintained at 24±1˚C
and 60±5% relative humidity in a culture room under
16 hr. photoperiod provided by white fluorescent
tubes. Shoot numbers, shoot lengths and leaves
number/explant were recorded after 4.0 weeks of
culture. The experiment was carried out in (CRD) and
significant differences among the mean values were
compared using Duncan’s Multiple Range test at 5% level.
2.4. Rooting Stage:- When the explants reached 2-4 cm in length, they
were transferred to rooting media. Two step
procedures were adopted for standardizing most
suitable auxin type and concentrations to root
induction. In the first step, explants were cultured on full and half strength, solid and liquid MS medium containing different concentration of IAA, IBA and NAA.
A total of 48 treatments was employed with (5) replications (tubes) per treatment as shown in
the table below.
Second step, after 4.0 weeks of culture, treated
shoots were transferred into full strength liquid MS
medium without growth regulators. Liquid medium
was changed every 2.0 weeks in both steps.
The tubes were closed with polypyrolene closer
and maintained in the culture room at 24±1˚C;
60±5% relative humidity for 16hrs. photoperiod
provided by white florescent tubes. The experiment
lasted 8 weeks at the termination of experiments, the
callus formation, type and color of callus, percentage
of rooting, number of root, root lengths were
recorded.


The experiment was carried out using (CRD)
design, the difference between means were evaluated
using Duncan's Multiple Range test at 5% level.
2.4. Statistical Analysis:-
In all cases, Duncan’s multiple range tests was
applied when one-way ANOVA showed significant
differences (P< 0.05). All statistical analysis was
performed using SPSS 12.0 (SPSS Inc., Chicago, III.)
(Casanova et al., 2004a).
3. RESULTS AND DISCUSSION:- 3.1. Explant Disinfestations:- Fig. (1) Shows the survival rate of the explant
under different concentrations of NaOCl (0.1, 0.2, 0.3
and 0.5%) with different concentrations of ampicillin
(0, 25, 50 and 100 ppm). The explants taken from
developing buds dipped in 25 ppm ampicillin after
the surface sterilization with 0.3% NaOCl for 10 min.
resulted in the highest percentage of disinfested
explants (90%). Whereas, the explants dipped in 50
and 100 ppm ampicillin after surface sterilization
with 0.5% NaOCl showed high degree of damaging.
This treatment resulted in bleaching of chlorophyll
and 100% death of explants after 2 weeks. However
the sterilization by dipping explants in 0.1- 0.2%
NaOCl alone with 0 or 25 ppm ampicillin resulted in
a lower survival rate percentage and this was due to
fungal and bacterial contamination.
For initiation of the aseptic culture, a review of
literature showed that surface sterilization of peach is
problematic and different approaches have been
adopted. Hammerschlag (1980, 1982) has used
dipping in 100 ppm Pencillin-streptomycin after the
surface sterilization with commercial bleach solution
at concentration of 10% for 15-20 min. Our results
show that the treatment with ampicillin after surface
sterilization with 0.3% NaOCl (6% bleach solution)
was very effective in reducing contamination to 10%.
These results are in line with Hammerschlag (1982).
Many literature data support the idea of
performing one, two or may be three optimal
sterilization procedures for most woody plants, the
most frequently used procedure is the sterilization
with 70% ethanol and 1-3% NaOCl. The standard
sterilization procedure gave very satisfactory results,
also in the case of propagation of Prunus in vitro
(Meier– Dinkel, 1986 and Preil, 1997).
Our results clearly showed that sterilization with
NaOCl at 0.3% and ampicillin at 25 ppm gave better
results for the elimination of the microorganism and
not damaging the explants. This means also
thatshorter time is needed for producing plants.
Fig.1:- Survival% of explant under different
concentrations of NaOCl with Ampicillin for (10)
min. While: - A= 0.1% NaOCl, B= 0.2% NaOCl, C=
0.3% NaOCl, D= 0.5 % NaOCl and P= Ampicillin.

Kết quả (Việt) 1:

2.2. bắt đầu giai đoạn:-2.2.1. Vật liệu và chuẩn bịExplants: - trong tháng 1 năm 2007, không hoạt động, nhưng hoàn toànvernalized bắn (20 cm) dài được thu thập từkhông hoạt động, 4.0 tuổi đào cây var. "Red ngày". Cáckhông hoạt động bắn đã được rửa sạch triệt để nhỏ hơnchạy vòi nước để loại bỏ đất và khác trên bề mặtô nhiễm. Sau đó, các cành non không hoạt độngrửa trong nước chưng cất steriled, đặt trong 500 mlCốc có chứa 400 ml steriled chưng cất nước cho48 giờ. trong phòng thí nghiệm tại 21±2˚C. Họ đã rồichuyển sang một cốc có chứa 400 ml hỗn hợp10 ppm kinetin và trang/phút 10 GA3 cho 3weeks (PGRsgiải pháp đã được thay đổi mỗi 72 giờ.). Sau khi 3weeksCác chồi bắt đầu hoạt động và sự phát triển tiếp tục.Khi các cành là 0,5-1.0 cm dài, họ đãexcised và rửa ba lần cho 5 phút vớivô trùng chưng cất nước; các cành được sử dụng nhưexplants.2.2.2. explant Disinfestations: - các điều kiện aseptic trong hệ thống Laminar Flow,Các explants đã được điều trị với nồng độ khác nhaucủa NaOCl [0, 0.1, 0.2, 0.3 và 0,5 (w/v)]. [0, 2.0, 4.0,6.0, và 10% (v/v) thuốc tẩy thương mại giải phápcó 5% NaOCl] cho 10 phút tiếp theo 3rinses trong vô trùng chưng cất nước.Các explants sau đó đã được điều trị với (0, 25, 50,và 100 ppm) Ampicillin giải pháp (Troge, Đức)cho 5 phút sau đó rửa trong vô trùng chưng cất nước 3.0-lần 5 phút khoảng lá bên ngoàiloại bỏ từ mỗi explant. 2.3. ảnh hưởng của Pretreatment bắn phổ biến: - để nghiên cứu tác dụng của pretreatment ngày explantmàu nâu và bắn phổ biến, tiệt trùng explantsđược đặt aseptically trong ống nghiệm 150 x 25có 15 ml của chất lỏng MS phương tiện bổ sungvới 2,0 mg. L-l BA kết hợp với 2,0 mg. L-l GA3 [dựa trên các hình thức kết quả thu được thử nghiệm trongCác phương tiện vững chắc trong khi các phương tiện MS có (0,0,5, 1.0 và 2,0 mg. L-l) BA kết hợp với (0, 0,25,và 0,5 mg. L-l) IAA)] và phương tiện truyền thông đã được thay đổi mỗi2.0 tuần. Các nền văn hóa đã được duy trì ở 24±1˚Cvà 60±5% độ ẩm tương đối trong một căn phòng văn hóa dưới16 giờ. photoperiod được cung cấp bởi trắng huỳnh quangống. Bắn con số, bắn dài và lásố/explant đã được ghi lại sau 4.0 tuầnvăn hóa. Các thử nghiệm được thực hiện tại (CRD) vàsự khác biệt đáng kể giữa các giá trị có nghĩa làso sánh sử dụng của Duncan nhiều phạm vi thử nghiệm ở mức 5%.2.4. rooting giai đoạn: - khi các explants đạt đến 2-4 cm chiều dài, họđược chuyển cho rễ phương tiện truyền thông. Hai bướcthủ tục đã được áp dụng cho tiêu chuẩn hóa hầu hếtauxin phù hợp loại và nồng độ gốccảm ứng. Trong bước đầu tiên, explants đã được nuôi cấy ngày đầy đủ và một nửa sức mạnh, rắn và chất lỏng MS trung bình có chứa các nồng độ khác nhau của IAA, IBA và North American.Tổng cộng 48 phương pháp điều trị được sử dụng với (5) replications (ống) một điều trị như minh hoạ trongbảng dưới đây.Bước thứ hai, sau 4.0 tuần văn hóa, điều trịbắn được chuyển thành đầy đủ chất lỏng MSphương tiện truyền thông mà không có điều chỉnh tăng trưởng. Chất lỏng trung bìnhđược thay đổi mỗi tuần 2.0 trong cả hai bước.Các ống đã bị đóng cửa với polypyrolene gần gũi hơnvà duy trì trong phòng văn hóa tại 24±1˚C;60±5% độ ẩm tương đối cho 16hrs. photoperiodcung cấp bởi ống SX trắng. Thử nghiệmkéo dài 8 tuần lúc kết thúc của thử nghiệm, cáccallus hình thành, loại và màu sắc của callus, tỷ lệ phần trămcủa rễ, số lượng gốc, gốc dàighi lại.Các thử nghiệm được tiến hành bằng cách sử dụng (CRD)thiết kế, sự khác biệt giữa phương tiện đã được đánh giásử dụng của Duncan nhiều phạm vi thử nghiệm ở mức 5%.2.4. thống kê phân tích:-Trong mọi trường hợp, Duncan của bài kiểm tra nhiều phạm viáp dụng khi một chiều ANOVA cho thấy quan trọngkhác biệt (P < 0,05). Tất cả các phân tích thống kêthực hiện bằng cách sử dụng SPSS 12.0 (SPSS Inc, Chicago, III)(Casanova et al., 2004a).3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN: - 3.1. Explant Disinfestations:-hình (1) cho thấy tỷ lệ sống sót của explanttheo các nồng độ khác nhau của NaOCl (0,1, 0.2, 0.3và 0,5%) với các nồng độ khác nhau của ampicillin(0, 25, 50 và 100 ppm). Explants Lấy từphát triển các chồi nhúng trong 25 ppm ampicillin sau khikhử trùng bề mặt với 0,3% NaOCl trong 10 phút.kết quả là tỷ lệ phần trăm cao nhất của disinfestedexplants (90%). Trong khi đó, các explants nhúng trong 50và 100 ppm ampicillin sau khi khử trùng bề mặtvới 0,5% NaOCl cho thấy mức độ cao của làm hư hại.Điều trị này kết quả trong tẩy trắng của chất diệp lụcvà 100% cái chết của explants sau 2 tuần. Tuy nhiênkhử trùng bằng cách ngâm explants ở 0,1 - 0,2%Kết quả là NaOCl một mình với 0 hoặc 25 ppm ampicillinmột tỷ lệ phần trăm tỷ lệ sống còn thấp hơn và điều này là doô nhiễm nấm và vi khuẩn.Khởi văn hóa aseptic, xem xét lạivăn học cho thấy rằng các khử trùng bề mặt của đào làphương pháp tiếp cận vấn đề và khác nhau đãđược thông qua. Hammerschlag (1980, 1982) đã sử dụngngâm trong 100 ppm Pencillin-streptomycin sau khi cáckhử trùng bề mặt với thương mại thuốc tẩy giải phápở nồng độ 10% trong 15-20 phút. Kết quả của chúng tôithấy rằng điều trị với ampicillin sau khi bề mặtkhử trùng với 0,3% NaOCl (chất tẩy 6% giải pháp)là rất hiệu quả trong việc giảm ô nhiễm đến 10%.Những kết quả này là phù hợp với Hammerschlag (1982).Nhiều tài liệu dữ liệu hỗ trợ ý tưởngthực hiện một, hai hoặc ba có thể tối ưukhử trùng thủ tục cho hầu hết các cây thân gỗ, cácthủ tục được sử dụng thường xuyên nhất là khử trùngvới 70% ethanol và 1-3% NaOCl. Các tiêu chuẩnthủ tục khử trùng đã cho kết quả rất khả quan,cũng trong trường hợp của tuyên truyền của Prunus trong ống nghiệm(Meier-Dinkel, 1986 và Preil, 1997).Chúng tôi kết quả rõ ràng cho thấy rằng khử trùng vớiNaOCl 0,3% và ampicillin lúc 25 trang/phút cho tốt hơnCác kết quả cho loại bỏ các vi sinh vật vàKhông gây tổn hại các explants. Điều này có nghĩa là cũngthatshorter thời gian cần thiết để sản xuất cây trồng.Fig.1:-sự sống còn % của explant dưới khác nhaunồng độ của NaOCl với Ampicillin cho (10)min. Thời gian:-A = 0,1% NaOCl, B = 0.2% NaOCl, C =0,3% NaOCl, D = 0,5% NaOCl và P = Ampicillin.

Kết quả (Việt) 2:

2.2. Initiation Stage: - 2.2.1. Nhà máy Vật liệu và chuẩn bị
cấy: - Trong tháng Một năm 2007, không hoạt động, nhưng đầy đủ
vernalized măng (20 cm) dài đã được thu thập từ các
hoạt động, 4,0 tuổi cv cây đào. "Red June". Các
chồi ngủ được rửa kỹ dưới
vòi nước chảy để loại bỏ đất và bề mặt khác
gây ô nhiễm. Sau đó, các chồi ngủ được
rửa trong nước steriled chưng cất, được đặt trong 500 ml
cốc có chứa 400 ml nước steriled cất cho
48 giờ. trong phòng thí nghiệm ở 21 ± 2C. Sau đó họ được
chuyển giao cho một cốc chứa 400 ml hỗn hợp
của 10 ppm kinetin và 10 ppm GA3 cho 3weeks (PGRs
giải pháp đã được thay đổi mỗi 72 giờ.). Sau 3weeks
các chồi trở nên năng động và tăng trưởng trở lại.
Khi măng đã dài 0,5-1,0 cm, họ đã
cắt và rửa ba lần trong 5 phút. với
nước vô trùng cất; quay này được sử dụng như
cấy. 2.2.2. Tiêu diệt côn trùng mẫu cấy: - Trong điều kiện vô trùng trong hệ thống dòng chảy Laminar, các mẫu cấy được điều trị với nồng độ khác nhau của NaOCl [0, 0.1, 0.2, 0.3, và 0.5 (w / v)]. [0, 2.0, 4.0, 6.0, và 10% (v / v) dung dịch thuốc tẩy thương mại có chứa 5% NaOCl] trong 10 phút. tiếp theo là 3 nước súc trong nước vô trùng-cất. Các cấy sau đó đã được điều trị bằng (0, 25, 50, và 100 ppm), giải pháp Ampicillin (Troge, Đức) trong 5 phút. sau đó rửa lại bằng nước vô trùng cất 3.0- lần tại 5 min. khoảng các lá bên ngoài được loại bỏ từ mỗi mẫu cấy. 2.3. Ảnh hưởng của tiền xử lý trên shoot phổ biến vũ khí: - Nghiên cứu ảnh hưởng của tiền xử lý trên mẫu cấy nâu và phổ biến vũ khí bắn, cấy vô trùng được đặt một cách vô trùng trong 150x25 ống nghiệm chứa 15 ml môi trường MS lỏng có bổ sung với 2,0 mg.Ll BA kết hợp với 2,0 mg.Ll GA3 [Dựa trên các kết quả thu được tạo thành các thử nghiệm trong môi trường rắn trong khi môi trường MS có chứa (0, 0.5, 1.0, và 2.0 mg.Ll) BA kết hợp với (0, 0.25, và 0,5 mg.Ll) IAA)] và phương tiện truyền thông đã được thay đổi mỗi 2,0 tuần. Các nền văn hóa được duy trì ở mức 24 ± 1C và độ ẩm tương đối 60 ± 5% trong một phòng văn hóa dưới 16 giờ. thời gian chiếu sáng được cung cấp bởi huỳnh quang trắng ống. Bắn số, bắn dài và lá số / mẫu cấy được ghi lại sau 4,0 tuần văn hóa. Thí nghiệm được thực hiện tại (CRD) và sự khác biệt đáng kể giữa các giá trị trung bình đã so sánh giữa sử dụng Nhiều thử nghiệm Phạm vi của Duncan ở mức 5%. 2.4. Rễ Stage: - Khi cấy đạt 2-4 cm chiều dài, họ được chuyển đến rễ phương tiện truyền thông. Hai bước thủ tục đã được áp dụng cho hầu hết các tiêu chuẩn loại auxin thích hợp và nồng độ để nhổ tận gốc cảm ứng. Trong bước đầu tiên, cấy được cấy trên toàn phần và bán mạnh, rắn và lỏng môi trường MS có chứa nồng độ khác nhau của IAA, IBA và NAA. Tổng cộng có 48 phương pháp điều trị đã được sử dụng với (5) lần lặp lại (ống) mỗi lần điều trị như trong các bảng dưới đây. Bước thứ hai, sau 4,0 tuần nuôi cấy, điều trị măng đã được chuyển thành sức mạnh đầy đủ MS lỏng vừa không có điều hòa sinh trưởng. Môi trường lỏng được thay đổi mỗi 2,0 tuần trong cả hai bước. Các ống được đóng lại với polypyrolene gần hơn và lưu giữ trong phòng nuôi cấy ở 24 ± 1C; độ ẩm tương đối 60 ± 5% cho 16hrs. thời gian chiếu sáng được cung cấp bởi các ống huỳnh quang trắng. Thí nghiệm kéo dài 8 tuần khi kết thúc thí nghiệm, các mô sẹo hình thành, loại và màu sắc của mô sẹo, tỷ lệ phần trăm của rễ, số rễ, chiều dài gốc được ghi lại. Thí nghiệm được thực hiện bằng cách sử dụng (CRD) thiết kế, sự khác biệt giữa các phương tiện là đánh giá bằng cách sử dụng Nhiều thử nghiệm Phạm vi của Duncan ở mức 5%. 2.4. Phân tích thống kê: - Trong tất cả các trường hợp, nhiều thử nghiệm ở khoảng Duncan đã được áp dụng khi một chiều ANOVA cho thấy ý nghĩa khác biệt (P <0,05). Tất cả phân tích thống kê được thực hiện bằng cách sử dụng SPSS 12.0 (SPSS Inc., Chicago, III.) (Casanova et al., 2004a). 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN: - 3.1. Cấy Tiêu diệt côn trùng: - Hình. (1) Cho thấy tỷ lệ sống của mẫu cấy dưới nồng độ khác nhau của NaOCl (0,1, 0,2, 0,3 và 0,5%) với nồng độ khác nhau của ampicillin (0, 25, 50 và 100 ppm). Việc cấy lấy từ chồi phát triển nhúng trong 25 ppm ampicillin sau khi khử trùng bề mặt bằng 0,3% NaOCl trong 10 phút. dẫn đến tỷ lệ phần trăm cao nhất của disinfested cấy (90%). Trong khi đó, các mẫu cấy nhúng vào 50 và 100 ppm ampicillin sau khi khử trùng bề mặt với 0,5% NaOCl cho thấy mức độ cao gây thiệt hại. Điều này dẫn đến điều trị tẩy trắng của chất diệp lục và 100% cái chết của cấy sau 2 tuần. Tuy nhiên việc khử trùng bằng cách cấy ngâm trong 0.1- 0.2% NaOCl một mình với 0 hoặc 25 ppm ampicillin dẫn đến một tỷ lệ phần trăm tỷ lệ sống thấp hơn và điều này là do nấm và vi khuẩn truyền nhiễm. Đối với khởi đầu của nền văn hóa vô trùng, xem xét lại các tài liệu cho thấy bề mặt khử trùng của đào là có vấn đề và cách tiếp cận khác nhau đã được thông qua. Hammerschlag (1980, 1982) đã sử dụng ngâm trong 100 ppm Pencillin-streptomycin sau khi khử trùng bề mặt bằng dung dịch thuốc tẩy thương mại ở nồng độ 10% trong 15-20 phút. Kết quả của chúng tôi cho thấy rằng điều trị bằng ampicillin sau khi bề mặt trùng với 0,3% NaOCl (6% dung dịch thuốc tẩy) rất hiệu quả trong việc giảm ô nhiễm tới 10%. Các kết quả này phù hợp với Hammerschlag (1982). Nhiều dữ liệu văn học ủng hộ ý tưởng thực hiện một, hai hoặc ba có thể tối ưu quy trình khử trùng đối với hầu hết các cây thân gỗ, các thủ tục thường được sử dụng nhất là việc khử trùng với 70% ethanol và 1-3% NaOCl. Các tiêu chuẩn của quy trình khử trùng đã cho kết quả rất khả quan, còn trong trường hợp tuyên truyền của Prunus in vitro (Meier- Dinkel, 1986 và Preil, 1997). Kết quả của chúng tôi cho thấy rõ ràng rằng khử trùng bằng NaOCl ở mức 0,3% và ampicillin ở 25 ppm cho tốt hơn kết quả cho việc loại bỏ các vi sinh vật và không làm tổn hại các chồi bên. Điều này cũng có nghĩa là thatshorter thời gian là cần thiết cho các nhà máy sản xuất. Hình 1: - Survival% của mẫu cấy dưới khác nhau nồng độ NaOCl với Ampicillin cho (10) phút. Trong khi: - A = 0.1% NaOCl, B = 0,2% NaOCl, C = 0,3% NaOCl, D = 0,5% NaOCl và P = Ampicillin.