3.6. Enzyme kineticsThe kinetic par

3.6. Enzyme kinetics
The kinetic parameters of the recombinant enzyme Bgl1T protein were determined using different pNP--d-glucoside concentrations as the substrate. The initial rate of the enzyme reaction was measured under the optimal reaction conditions. The reaction kinetic parameters of the purified enzyme were determined from double reciprocal Lineweaver–Burk plots. The putative glucosidase had an apparent Km value of 1.45mM, a Vmax value of 20.5U/mg, a kcat value of 1370/min and a kcat/Km value of 943/mM/min. This Vmax value for Bgl1T protein was in agreement with that recorded for -glucosidase from uncultured microorganisms [9]. Knowledge of these properties of Bgl1T protein should allow better industrial production of glucose or ethanol by biological processes under moderate conditions.
4. Conclusions
We have identified a novel gene (bgl1T) that encodes an enzyme with -glucosidase activity following a function-based screening of a metagenomic library from uncultured microorganisms. This appears to be the first study on the cloning and the characterization of a putative -glucosidase gene from microbes in sludge samplesfromabioreactor.Sequenceanalysisresultsdemonstratedthat Bgl1T protein was related to -glucosidases. Characterization with HPLC confirmed that the recombinant Bgl1T protein could catalyze hydrolysis of d-(+)-cellobiose to form glucose. A more detailed biochemical characterization of Bgl1T is currently in progress. These results are a first step toward a better understanding of the propertiesofBgl1Tproteinisolatedfromabioreactorsludgemetagenome.
Acknowledgements
This research was supported by the Open Research Fund Program of the Key Laboratory of Ministry of Education for Microbial and Plant Genetic Engineering (Grant No. J0801).

Kết quả (Việt) 2:

3.6. Động học enzyme
Các thông số động học của các protein tái tổ hợp Bgl1T enzyme được xác định bằng cách sử dụng khác nhau PNP - nồng độ d-glucoside như các chất nền. Tỷ lệ ban đầu của phản ứng enzyme được đo theo các điều kiện phản ứng tối ưu. Các thông số động học phản ứng của enzyme tinh sạch được xác định từ hai đối ứng lô Lineweaver-Burk. Các glucosidase giả định có một Km giá trị rõ ràng của 1.45mM, một giá trị Vmax của 20.5U / mg, một giá trị kcat 1370 / phút và một kcat / Km giá trị của 943 / mM / phút. Điều này có giá trị Vmax cho protein Bgl1T là trong thỏa thuận với điều đó được ghi lại cho -glucosidase từ vi sinh vật vô văn [9]. Kiến thức về các đặc tính của protein Bgl1T nên cho phép sản xuất công nghiệp tốt hơn glucose hoặc ethanol bởi quá trình sinh học trong điều kiện vừa phải.
4. Kết luận
Chúng tôi đã xác định được một gen mới (bgl1T) mã hóa một enzyme có hoạt -glucosidase sau một sàng lọc dựa trên chức năng của một thư viện metagenomic từ vi sinh vật vô văn. Điều này dường như là nghiên cứu đầu tiên về nhân bản và các đặc tính của một gen -glucosidase giả định từ vi khuẩn trong bùn samplesfromabioreactor.Sequenceanalysisresultsdemonstratedthat protein Bgl1T được liên quan đến -glucosidases. Đặc tính với HPLC xác nhận rằng các protein tái tổ hợp Bgl1T thể xúc tác cho quá trình thủy phân của d - (+) - cellobiose để tạo thành glucose. Một đặc tính sinh hóa chi tiết hơn về Bgl1T hiện đang được tiến hành. Những kết quả này là một bước đầu tiên hướng tới một sự hiểu biết tốt hơn về các propertiesofBgl1Tproteinisolatedfromabioreactorsludgemetagenome.
Lời cảm ơn
Nghiên cứu này được tài trợ bởi Chương trình Quỹ Nghiên cứu mở của Phòng thí nghiệm trọng của Bộ Giáo dục cho vi sinh vật và thực vật di truyền Kỹ thuật (Grant số J0801).