INTRODUCTIONThe in vitro scratch as

INTRODUCTION
The in vitro scratch assay is a straightforward and economical method to study cell migrationin vitro 1
. This method is based on the observation that, upon creation of a new artificial gap, so called
‘‘scratch’’, on a confluent cell monolayer, the cells on the edge of the newly created gap will move toward the opening to close the ‘‘scratch’’ until new cell–cell contacts are established again. The basic steps involve creation of a ‘‘scratch’’ on monolayer cells,capture of images at the beginning and regular intervals during cell migration to close the scratch, and comparison of the images to determine the rate of cell migration.
One of the major advantages of this simple method is that it mimics to some extent migration of cellsin vivo.Forexample,removal of part of the endothelium in the blood vessels will induce
migration of endothelial cells (ECs) into the denuded area to close the wound
2
. Furthermore, the patterns of migration either as loosely connected population (e.g., fibroblasts) or as sheets of cells (e.g., epithelial and ECs) also mimic the behavior of these
cells during migrationin vivo. Another advantage of the in vitro scratch assay is its particular suitability to study the regulation of cell migration by cell interaction with extracellular matrix (ECM)
and cell–cell interactions. In other popular methods such as Boyden chamber assays, preparation of cells in suspension before the assays disrupts cell–cell and cell–ECM interactions. In addition,the in vitro scratch assay is also compatible with microscopy including live cell imaging, allowing analysis of intracellular signaling events (e.g., by visualization of green fluorescent protein (GFP)-tagged proteins for subcellular localization or fluorescent resonance
energy transfer for protein–protein interactions) during cell migration. On the other hand, it is also probably the simplest method to study cell migration in vitro and only uses the common and inexpensive supplies found in most laboratories capable of cell culturing.
Although it is developed and more suitable for measuring migration of population of cells, thein vitro scratch assay has also been combined with other techniques, such as microinjection
or gene transfection, to assess the effects of expression of exogenous
genes on migration of individual cells
3–5
. The migration path of
individual cells in the leading edge of the scratch is tracked with the
aid of time-lapse microscopy and image analysis software. Capturing of an image in the beginning of the experiment with fluorescence microscopy can mark the cells with expression of exogenous
gene or downregulation of endogenous genes by RNA interference (e.g., using a GFP marker). By comparing the tracks of these cells with surrounding control cells under the same experimental conditions allows determination of the role of a particular gene in the regulation of directional cell migration using the assay.

Kết quả (Việt) 1:

GIỚI THIỆUCác khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là một phương pháp đơn giản và kinh tế để nghiên cứu tế bào migrationin ống nghiệm 1. Phương pháp này dựa trên các quan sát rằng, sau khi tạo ra một khoảng cách nhân tạo mới, vì vậy gọi là'' đầu '', trên một monolayer confluent tế bào, các tế bào ở rìa của khoảng cách mới được tạo ra sẽ di chuyển về hướng cửa để đóng đầu '''' cho đến khi số liên lạc mới tế bào-tế bào được thành lập một lần nữa. Các bước cơ bản liên quan đến sáng tạo của một đầu '''' trên tế bào monolayer, chụp của hình ảnh ở đầu và các chu kỳ bình thường trong di động di chuyển để đóng đầu, và so sánh các hình ảnh để xác định tỷ lệ di động di chuyển.Một trong những lợi thế lớn của phương pháp này đơn giản là nó bắt chước để di chuyển một số mức độ của cellsin vivo. Forexample, loại bỏ một phần của nội mạc trong các mạch máu sẽ gây radi cư của các tế bào nội mô (ECs) vào khu vực denuded để đóng vết thương2. Hơn nữa, các mô hình của di chuyển là lỏng lẻo kết nối dân (ví dụ: fibroblasts) hoặc như tấm của tế bào (ví dụ:, biểu mô và ECs) cũng bắt chước hành vi của nhữngtế bào trong migrationin vivo. Một ưu điểm của các khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là của nó thích hợp cụ thể để nghiên cứu các quy định của di động di chuyển bằng di động tương tác với ngoại bào ma trận (ECM)và tế bào-tế bào tương tác. Trong phương pháp phổ biến khác chẳng hạn như Boyden phòng thử nghiệm, chuẩn bị của các tế bào trong hệ thống treo trước khi các thử nghiệm sẽ phá vỡ tế bào-tế bào và tế bào-ECM tương tác. Ngoài ra, các khảo nghiệm đầu trong ống nghiệm là cũng tương thích với kính hiển vi bao gồm cả hình ảnh sống di động, cho phép phân tích của sự kiện tín hiệu tế bào (ví dụ:, bởi kiểu trực quan của màu xanh lá cây huỳnh quang protein (GFP)-được dán protein cho địa phương hoá của hoặc cộng hưởng huỳnh quangnăng lượng chuyển cho tương tác protein-protein) trong khi di động di chuyển. Mặt khác, nó cũng có thể là phương pháp đơn giản nhất để học tập di động di chuyển trong ống nghiệm và chỉ sử dụng các nguồn cung cấp phổ biến và rẻ tiền được tìm thấy ở hầu hết các phòng thí nghiệm có khả năng di động nuôi.Mặc dù nó là phát triển và phù hợp hơn cho đo di cư của dân số tế bào, thein ống nghiệm đầu khảo nghiệm cũng đã được kết hợp với các kỹ thuật khác, chẳng hạn như microinjectionhoặc transfection gen, để đánh giá những tác động của các biểu hiện của ngoại sinhgen về di chuyển của các cá nhân tế bào3-5. Con đường di chuyểnCác tế bào cá nhân trong mép trong đầu theo dõi với cácTrợ giúp của thời gian trôi đi kính hiển vi và hình ảnh phần mềm phân tích. Thu giữ một hình ảnh ban đầu của thử nghiệm với kính hiển vi huỳnh quang có thể đánh dấu các tế bào với các biểu hiện của ngoại sinhgen hoặc downregulation của gen nội sinh bởi RNA can thiệp (ví dụ, bằng cách sử dụng một điểm đánh dấu GFP). Bằng cách so sánh các bài hát của các tế bào với xung quanh kiểm soát các tế bào theo các điều kiện cùng một thử nghiệm cho phép xác định vai trò của một gen cụ thể trong các quy định của di chuyển hướng di động bằng cách sử dụng các khảo nghiệm.

Kết quả (Việt) 2:

GIỚI THIỆU
The in vitro đầu khảo nghiệm là một phương pháp đơn giản và kinh tế để nghiên cứu tế bào migrationin vitro 1
. Phương pháp này dựa trên quan sát rằng, khi tạo ra một khoảng cách nhân tạo mới, vì vậy được gọi là
'' đầu '', trên một lớp tế bào confluent, các tế bào trên các cạnh của khoảng cách vừa được tạo ra sẽ di chuyển về phía mở để đóng '' đầu '' cho đến khi liên lạc di động tế bào mới được thành lập lại. Các bước cơ bản liên quan đến việc tạo ra một '' đầu '' trên các tế bào đơn lớp, chụp hình ảnh ở đầu và khoảng thời gian thường xuyên trong quá trình chuyển tế bào để đóng đầu, và so sánh các hình ảnh để xác định tỷ lệ di cư tế bào.
Một trong những chính ưu điểm của phương pháp này đơn giản là nó bắt chước một số di dân mức độ cellsin vivo.Forexample, cắt bỏ một phần của nội mạc trong các mạch máu sẽ gây ra
sự di cư của các tế bào nội mô (ECs) vào khu vực núi trọc để đóng vết thương
2
. Hơn nữa, mô hình di cư hoặc dân như kết nối lỏng lẻo (ví dụ, các nguyên bào sợi) hoặc như tấm tế bào (ví dụ, biểu mô và ECs) cũng bắt chước các hành vi của các
tế bào trong migrationin vivo. Một ưu điểm khác của in vitro đầu khảo nghiệm là phù hợp đặc biệt của mình để nghiên cứu các quy định về di cư tế bào bằng cách tương tác với tế bào ma trận ngoại bào (ECM)
và tương tác tế bào-tế bào. Trong các phương pháp phổ biến khác như Boyden xét ​​nghiệm buồng, chuẩn bị của các tế bào trong hệ thống treo trước khi xét nghiệm sẽ phá vỡ tế bào-tế bào và tế bào tương tác-ECM. Ngoài ra, trong ống nghiệm đầu khảo nghiệm cũng tương thích với kính hiển vi bao gồm cả hình ảnh di động, cho phép phân tích các sự kiện truyền tín hiệu nội bào (ví dụ, bằng cách hình dung của protein huỳnh quang xanh (GFP) protein -tagged cho nội địa hóa dưới tế bào hoặc huỳnh quang cộng hưởng
truyền năng lượng cho protein- tương tác protein) trong quá trình chuyển động. Mặt khác, nó cũng có lẽ là phương pháp đơn giản nhất để nghiên cứu di cư tế bào in vitro và chỉ sử dụng các vật tư thông dụng và rẻ tiền được tìm thấy trong hầu hết các phòng thí nghiệm có khả năng tế bào nuôi cấy.
Mặc dù nó được phát triển và phù hợp hơn để đo di cư dân số của các tế bào, Thein vitro đầu khảo nghiệm cũng đã được kết hợp với các kỹ thuật khác, chẳng hạn như tiêm
hoặc gen thâm chuyển, đánh giá hiệu quả của các biểu hiện của ngoại sinh
gen về di cư của các tế bào riêng lẻ
3-5
. Các con đường di chuyển của
tế bào riêng lẻ trong phần đầu của đầu được theo dõi với sự
trợ giúp của thời gian trôi kính hiển vi và phần mềm phân tích hình ảnh. Chụp một hình ảnh trong đầu của thí nghiệm với kính hiển vi huỳnh quang có thể đánh dấu các tế bào với biểu hiện của ngoại sinh
gen hoặc ức chế tuyến yên của gen nội sinh do sự can thiệp RNA (ví dụ, bằng cách sử dụng một dấu GFP). Bằng cách so sánh các bài hát của các tế bào này với xung quanh các tế bào kiểm soát theo các điều kiện thí nghiệm như nhau cho phép xác định vai trò của một gen đặc biệt trong việc điều tiết di cư tế bào định hướng sử dụng các xét nghiệm.