human hepatocyte culture intoxicate

human hepatocyte culture
intoxicated with a-amanitin
a-Amanitin (a-AMA) is the main toxin of Amanita phalloides and its subspecies (A. virosa and A. verna). The primary mechanism of a-AMA toxicity is associated with protein synthesis blocking in hepatocytes. Additionally, a-AMA exhibits prooxidant properties that may contribute to its severe hepatotoxicity. The aim of the present study was to assess the effect of a-AMA on lipid peroxidation and the activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) in human hepatocyte culture. The effects of benzylpenicillin (BPCN), N-acetyl-L-cysteine (ACC), and silibinin (SIL) on SOD and CAT activities and on lipid peroxidation in human hepatocyte culture intoxicated with a-AMA were also examined. In human hepatocyte culture, 48-hour expo- sure to a-AMA at a 2-mM concentration caused an increase in SOD activity, a reduction of CAT activity, and a significant increase in lipid peroxidation. Changes in SOD and CAT activity caused by a-AMA could probably enhance lipid peroxidation by increased generation of hydrogen peroxide combined with reduced detoxifica- tion of that oxygen radical. The addition of antidotes (ACC or SIL) to the culture medium provided more effective protection against lipid peroxidation in human hepatocytes intoxicated with a-AMA than the addition of BPCN, possessing no antioxidant properties.
Death cap (Amanita phalloides) and its subspecies;
death angel (Amanita virosa) and destroying angel (Amanita verna), are responsible for 95% of all mushroom-related deaths.1 The three species contain two main groups of toxins in their tissues, namely phallotoxins and amatoxins, which are both multicyc- lic peptides.Because phallotoxins are not absorbed from the gastrointestinal tract, they do not cause sys- temic manifestations of poisoning, although they may be responsible for gastrointestinal irritation. Amatox-
ins are primary human hepatotoxins. Death cap poi- soning is characterized by liver necrosis, in many
cases with acute hepatic insufficiency with subse- quent complications including hepatic coma, coagula- tion disorders, and renal failure.1-5 One medium-size specimen of death cap contains from 10 to 12 mg of amatoxins, whereas a dose as small as 0.1 mg/kg of body weight may be lethal for an adult human.6,7 a-Amanitin (a-AMA), the main amatoxin, is readilyabsorbed from the gastrointestinal tract and carried to the liver via the portal vein. Hepatocyte uptake of a-AMA is mediated by OATP1B3, a subtype of the organic anion transporting polypeptide (OATP) located in the plasma membrane.8 In hepatocytes, a-AMA inhi- bits protein synthesis by binding to RNA-polymerase II.1,9 Hepatocytes, which are dependent on a high rate of protein synthesis, are rapidly destroyed.1 According to Zheleva et al.,10 a-AMA also exhibits both antioxi- dant and prooxidant properties. In vitro and in vivo experiments on mice revealed that a-AMA may influ- ence the activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT), enzymes crucial for the prevention of oxidative stress-related injury.10-12 These findings sup- port the hypothesis that a-AMA generates free radicals, which may contribute to its severe hepatotoxicity.10,12 However, it is uncertain what the effect of a-AMA is on the activities of enzymes protecting human hepato- cytes against oxidative stress. It is also unexplained whether changes in the redox system may play a signif- icant role in the pathogenesis of hepatic disorders in humans intoxicated with amanitin-containing mush- rooms. Benzylpenicillin (BPCN), N-acetyl-L-cysteine (ACC), and silibinin (SIL) are used as antidotes in a-AMA intoxication, but their efficacy and influence on the redox system during a-AMA intoxication is not fully established.
The purpose of this study was to assess the effect of a-AMA on lipid peroxidation (LPO) and the activities of SOD and CAT in human hepatocyte culture. The effects of BPCN, ACC, and SIL on SOD and CAT activities and on LPO in human hepatocyte culture intoxicated with a-AMA were also examined.
Materials and methods
Chemicals and materials
Media, supplements, and reagents used for hepatocyte
culture, a-AMA, and all tested antidotes were obtained from Sigma Poland Chem (a-amanitin, cat. no A2263; Benzylpenicillin/Penicillin G potassium salt, cat. no P7794; N-acetyl-L-cysteine, cat. no A9165; Silibinin, cat. no. S0417). Fresh, single donor human hepatocytes plated in 6-well culture plates were obtained from Lonza, Belgium (batch no. HE0911101
Hepatocyte culture
All experiments were approved by the Local Ethics
Commission at Wrocław Medical University. After

2 hours of initial incubation, the shipping medium was substituted with defined culture medium consist- ing of Earle's balanced salt solution (EBSS) and Waymouth's 752/1 supplemented with 10% foetal bovine serum (FBS). Following another 12 hours of incubation, the medium was exchanged and the pri- mary hepatocyte culture were maintained for 48 hours with a-AMA and/or the tested antidotes (ACC, BPCN, SIL) in the following final concentrations: control group - hepatocytes received medium without a-AMA or antidotes; group AMA: a-amanitin (2 mM); group BPCN: benzylpenicyllin (1 mM); group ACC: N-acetyl-L-cysteine (1 mM); group SIL: silibinin
(100 mM); group AMA þ BPCN: a-amanitin (2 mM)
þ benzylpenicyllin (1 mM); group AMA þ ACC: a-amanitin (2 mM) þ N-acetyl-L-cysteine (1 mM); and group AMA þ SIL: a-amanitin (2 mM) þ silibinin
(100 mM). a-AMA was used at a concentration caus-
ing a reduction in cell viability in human hepatocyte cultures.13,14 The BPCN concentration corresponded to its plasma levels obtained after the dosage recom- mended in therapy of toadstool death cap poisoning, that is 300,000 - 1,000,000 U/kg/day intravenously (i.v.).1,15 There are no reports on a standard dosage regimen of ACC in mushroom poisoning. Therefore, we tested ACC in concentrations corresponding to its plasma levels obtained after the recommended dosage during the treatment of acetaminophen toxicity.16 SIL was used at concentrations corresponding to its
therapeutic plasma levels.17,18 In the AMA þ BPCN,
AMA þ ACC, and AMA þ SIL groups, hepatocytes
were simultaneously exposed to a-AMA and tested
antidotes.
SOD and CAT activity and the concentration of malonyldialdehyde (MDA) were determined in super- natants isolated from cultured hepatocyte homogenates after 48 hours of exposure to a-AMA and/or tested antidotes.

Analytical methods
SOD activity was determined using assay kits pro-
cured from Cayman Chemical Company (cat no. 706002). The assay was based on the generation of
O2- in a system containing xanthine oxidase. O2-
reduces tetrazolium salt to formazan dye, which is
measured colorimetrically. One unit of SOD activity is defined as the amount of enzyme needed to exhibit 50% dismutation of the superoxide radical.
CAT activity was determined using a Catalase Assay Kit (Cayman Chemical Company, cat. no

Kết quả (Việt) 1:

văn hóa của con người hepatocyte bị mê hoặc với một amanitin a-Amanitin (a-AMA) là độc tố chính của tử thần và phân loài (A. virosa và A. verna). Cơ chế chính một AMA độc tính được liên kết với tổng hợp protein chặn ở hepatocytes. Ngoài ra, một AMA trưng bày tài sản prooxidant có thể đóng góp để nổi nghiêm trọng của nó. Mục đích của nghiên cứu hiện nay là để đánh giá hiệu quả của một AMA trên lipid peroxidation và các hoạt động của superoxide dismutase (SOD) và catalase (CAT) trong con người hepatocyte văn hóa. Những ảnh hưởng của benzylpenicillin (BPCN), N-axetyl-L-cysteine (ACC), và silibinin (SIL) hoạt động SOD và mèo và lipid peroxidation trong văn hóa của con người hepatocyte bị mê hoặc với một AMA cũng đã được kiểm tra. Trong văn hóa của con người hepatocyte, 48 giờ hội chợ triển lãm-chắc chắn một AMA tại nồng độ 2-mM gây ra sự gia tăng trong hoạt động SOD, một giảm CAT hoạt động, và một gia tăng đáng kể trong lipid peroxidation. Những thay đổi trong SOD và mèo hoạt động gây ra bởi một AMA có lẽ có thể tăng cường lipid peroxidation bởi các thế hệ tăng của hydrogen peroxide kết hợp với giảm detoxifica-tion đó oxy triệt để. Việc bổ sung các thuốc giải độc (ACC hoặc SIL) với văn hóa cung cấp bảo vệ hiệu quả hơn chống lại lipid peroxidation trong con người hepatocytes bị mê hoặc với một AMA hơn việc bổ sung các BPCN, sở hữu không có thuộc tính chất chống oxy hoá.Cái chết cap (tử thần) và phân loài của nó; Death angel (Amanita virosa) và destroying angel (Amanita verna), chịu trách nhiệm đối với 95% của tất cả các loài nấm liên quan deaths.1 ba chứa hai nhóm chính của chất độc trong của mô, cụ thể là phallotoxins và amatoxins, mà là cả hai peptide multicyc-lic. Bởi vì phallotoxins không được hấp thu từ đường tiêu hóa, họ không gây ra sys-temic biểu hiện của ngộ độc, mặc dù họ có thể chịu trách nhiệm về đường tiêu hóa kích thích. Amatox- bổ sung là chính của con người đối. Cái chết cap poi-soning được đặc trưng bởi hoại tử gan, trong nhiều Các trường hợp suy gan cấp tính với biến chứng subse-quent trong đó có tình trạng hôn mê gan, rối loạn coagula-tion, và thận của failure.1-5 một vừa kích thước mẫu của cái chết cap chứa từ 10 đến 12 mg của amatoxins, trong khi một liều nhỏ đến 0.1 mg/kg của trọng lượng cơ thể có thể gây tử vong cho một dành cho người lớn human.6,7 a-Amanitin (a-AMA), amatoxin chính, là readilyabsorbed từ đường tiêu hóa và mang đến gan thông qua các tĩnh mạch cổng thông tin. Hepatocyte hấp thụ của một AMA là trung gian của OATP1B3, một phiên bản của anion hữu cơ vận chuyển polypeptide (OATP) ở plasma membrane.8 ở hepatocytes, tổng hợp protein một AMA inhi-bit bởi ràng buộc để RNA-polymerase II.1,9 Hepatocytes, mà phụ thuộc vào một tỷ lệ cao của tổng hợp protein, là nhanh chóng destroyed.1 theo Zheleva et al., 10 một AMA cũng trưng bày các antioxi-dant và prooxidant thuộc tính. Trong ống nghiệm và tại vivo thí nghiệm trên chuột tiết lộ rằng một AMA có thể influ-ence hoạt động superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), enzyme quan trọng cho công tác phòng chống oxy hóa căng thẳng liên quan đến injury.10-12 kết quả sup-port tạo ra các giả thuyết rằng một-AMA miễn phí cực đoan, có thể đóng góp vào hepatotoxicity.10,12 nghiêm trọng tuy nhiên, nó là không chắc chắn những gì có hiệu lực của một AMA là về các hoạt động của enzyme bảo vệ mục-cytes của con người chống lại căng thẳng oxy hoá. Nó cũng là không giải thích được cho dù những thay đổi trong hệ thống redox có thể đóng một signif - vai trò icant trong sinh bệnh học của các rối loạn gan ở người bị mê hoặc với chứa amanitin mush-phòng. Benzylpenicillin (BPCN), N-axetyl-L-cysteine (ACC), và silibinin (SIL) được sử dụng như là thuốc giải độc ngộ độc một AMA, nhưng hiệu quả và ảnh hưởng đến hệ thống ôxi trong một AMA ngộ độc của họ không đầy đủ thiết lập. Mục đích của nghiên cứu này là để đánh giá hiệu quả của một AMA trên lipid peroxidation (LPO) và các hoạt động của SOD và mèo trong văn hóa của con người hepatocyte. Ảnh hưởng của BPCN, ACC và SIL SOD và mèo hoạt động và LPO trong văn hóa của con người hepatocyte bị mê hoặc với một AMA cũng đã được kiểm tra. Vật liệu và phương pháp Hóa chất và vật liệu Phương tiện truyền thông, bổ sung, và thuốc thử được sử dụng cho hepatocyte văn hóa, một AMA, và thuốc giải độc tất cả thử nghiệm đã thu được từ Sigma Ba Lan Chem (a-amanitin, mèo không có A2263; Benzylpenicillin/Penicillin G kali muối, mèo. không có P7794; N-axetyl-L-cysteine, mèo. không có A9165; Silibinin, mèo. Không. S0417). Nhà tài trợ mới, duy nhất của con người hepatocytes mạ trong văn hóa 6-cũng tấm được lấy từ Lonza, Bỉ (batch no. HE0911101Hepatocyte văn hóa Tất cả các thí nghiệm được chấp thuận bởi đạo Đức địa phương Ủy ban tại Đại học y khoa Wrocław. Sau khi 2 giờ ủ bệnh ban đầu, các phương tiện vận chuyển được thay thế bằng văn hóa được xác định phương tiện truyền thông bao gồm-ing của cân bằng dung dịch muối của Earle (EBSS) và Waymouth của 752/1 bổ sung 10% thai nhi bò huyết thanh (FBS). Sau một giờ 12 ấp, các phương tiện được trao đổi và văn hóa hepatocyte pri-mary được duy trì trong 48 giờ với một AMA và/hoặc thuốc giải độc thử nghiệm (ACC, BPCN, SIL) ở nồng độ cuối cùng sau: nhóm kiểm soát - hepatocytes nhận được trung bình mà không có một AMA hoặc thuốc giải độc; Nhóm AMA: a-amanitin (2 mM); Nhóm BPCN: benzylpenicyllin (1 mM); Nhóm ACC: N-axetyl-L-cysteine (1 mM); Nhóm SIL: silibinin (100 mM); Nhóm AMA þ BPCN: a-amanitin (2 mM) benzylpenicyllin þ (1 mM); Nhóm AMA þ ACC: a-amanitin (2 mM) þ N-axetyl-L-cysteine (1 mM); và nhóm AMA þ SIL: a-amanitin (2 mM) þ silibinin (100 mM). một AMA đã được sử dụng tại một tập trung ĐVCNT- ing một giảm khả năng di động trong con người hepatocyte cultures.13,14 The BPCN nồng độ tương ứng với mức độ huyết tương của nó thu được sau khi liều lượng recom - vá trong trị liệu toadstool chết cap ngộ độc, đó là 300.000-1.000.000 U/kg/ngày tĩnh mạch (i.v.).1,15 có là không có báo cáo về một chế độ tiêu chuẩn liều lượng của ACC trong ngộ độc nấm. Vì vậy, chúng tôi thử nghiệm ACC ở nồng độ tương ứng với mức độ huyết tương của nó thu được sau khi liều được đề nghị trong thời gian điều trị acetaminophen toxicity.16 SIL được sử dụng ở nồng độ tương ứng với của nó điều trị huyết tương levels.17,18 trong the AMA þ BPCN, AMA þ ACC, và AMA þ SIL nhóm, hepatocytes đồng thời đã tiếp xúc với một AMA và thử nghiệm thuốc giải độc. SOD và mèo hoạt động và tập trung của malonyldialdehyde (MDA) đã được xác định trong siêu-natants bị cô lập từ văn hóa hepatocyte homogenates sau 48 giờ tiếp xúc với một AMA và/hoặc thử nghiệm thuốc giải độc. Phương pháp phân tích SOD hoạt động đã được xác định bằng cách sử dụng bộ dụng cụ khảo nghiệm pro- chữa khỏi từ công ty hóa chất Cayman (mèo số 706002). Các khảo nghiệm được dựa trên các thế hệ của O2-trong một hệ thống có xanthin oxidase. O2- làm giảm tetrazolium muối để thuốc nhuộm formazan, mà là đo colorimetrically. Một đơn vị của SOD hoạt động được định nghĩa là số lượng các men tiêu hóa cần thiết để triển lãm 50% dismutation của superoxide triệt để. CAT hoạt động đã được xác định bằng cách sử dụng một bộ khảo nghiệm Catalase (công ty hóa chất Cayman, mèo không có

Kết quả (Việt) 2:

văn hóa tế bào gan của con người
say sưa với a-amanitin
a-Amanitin (a-AMA) là các độc tố chính của Amanita phalloides và phân loài của nó (A. virosa và A. Verna). Cơ chế chính của một-AMA độc tính được liên kết với sự tổng hợp protein trong tế bào gan chặn. Ngoài ra, một-AMA hiện thuộc tính prooxidant có thể góp phần độc gan nghiêm trọng của nó. Mục đích của nghiên cứu này là để đánh giá hiệu quả của một-AMA trên peroxy lipid và các hoạt động của superoxide dismutase (SOD) và catalase (CAT) trong văn hóa tế bào gan của con người. Những ảnh hưởng của benzylpenicillin (BPCN), N-acetyl-L-cysteine ​​(ACC), và SILYBIN (SIL) về hoạt động SOD và CAT và lipid peroxy trong văn hóa tế bào gan của con người say sưa với một-AMA cũng đã được kiểm tra. Trong văn hóa tế bào gan của con người, 48 giờ Nhiễm chì chắc chắn một-AMA ở nồng độ 2 mM gây ra sự gia tăng trong hoạt động SOD, giảm hoạt động CAT, và một sự gia tăng đáng kể trong lipid peroxy. Những thay đổi trong SOD và CAT hoạt động gây ra bởi một-AMA có thể có thể tăng cường lipid peroxy bởi tăng thế hệ của hydrogen peroxide kết hợp với giảm tion detoxifica- của oxy gốc tự do. Việc bổ sung các thuốc giải độc (ACC hoặc SIL) vào môi trường văn hóa cung cấp bảo vệ hiệu quả hơn chống lipid peroxy trong tế bào gan người say sưa với một-AMA hơn việc bổ sung BPCN, sở hữu không có tính chống oxy hóa.
cap Death (Amanita phalloides) và phân loài của nó;
chết thiên thần (Amanita virosa) và phá hủy thiên thần (Amanita Verna), chịu trách nhiệm 95% của tất cả các nấm liên quan đến deaths.1 Ba loài chứa hai nhóm chính của các chất độc trong các mô của họ, cụ thể là phallotoxins và amatoxins, mà là cả hai lic multicyc- peptides.Because phallotoxins không được hấp thu qua đường tiêu hóa, chúng không gây ra các biểu hiện Temic thống của ngộ độc, mặc dù họ có thể chịu trách nhiệm cho sự kích thích tiêu hóa. Amatox-
ins là độc tố gan của con người chính. Cap chết soning poi- được đặc trưng bởi hoại tử gan, trong nhiều
trường hợp suy gan cấp tính với các biến chứng quent subse- bao gồm hôn mê gan, rối loạn tion coagula-, và thận failure.1-5 mẫu One vừa kích thước của nắp cái chết có chứa từ 10 đến 12 mg amatoxins, trong khi một liều nhỏ như 0,1 mg / kg trọng lượng cơ thể có thể gây tử vong cho một người trưởng thành human.6,7 a-Amanitin (a-AMA), các amatoxin chính, được readilyabsorbed qua đường tiêu hóa và mang đến gan qua tĩnh mạch cửa. Hấp thu tế bào gan của một-AMA được trung gian bởi OATP1B3, một subtype của các anion hữu cơ vận chuyển polypeptide (OATP) nằm trong membrane.8 plasma Trong tế bào gan, a-AMA bit inhi- tổng hợp protein bằng cách gắn vào RNA polymerase-II.1, 9 tế bào gan, mà phụ thuộc vào tỷ lệ cao trong tổng hợp protein, đang nhanh chóng destroyed.1 Theo Zheleva et al., 10 a-AMA cũng trưng bày cả dant chất chống oxy hóa và các thuộc tính prooxidant. In vitro và in vivo các thí nghiệm trên chuột cho thấy một-AMA thể influ- khoa các hoạt động của superoxide dismutase (SOD) và catalase (CAT), enzyme quan trọng trong việc ngăn ngừa oxy hóa liên quan đến stress injury.10-12 Những phát hiện sup- cổng giả thuyết rằng một-AMA tạo ra các gốc tự do, trong đó có thể góp phần vào hepatotoxicity.10,12 nghiêm trọng của nó Tuy nhiên, nó là không chắc chắn những gì hiệu quả của một-AMA là về các hoạt động của các enzym bảo vệ cytes gan con người chống lại stress oxy hóa. Nó cũng là không giải thích được liệu những thay đổi trong hệ thống oxi hóa khử có thể đóng một vai trò signif icant trong bệnh sinh của rối loạn gan ở người say sưa với phòng mush- amanitin chứa. Benzylpenicillin (BPCN), N-acetyl-L-cysteine ​​(ACC), và SILYBIN (SIL) được sử dụng như thuốc giải độc trong một-AMA nhiễm độc, nhưng hiệu quả và ảnh hưởng của họ trên hệ thống oxi hóa khử trong một-AMA nhiễm độc không được thành lập hoàn toàn.
Mục đích của nghiên cứu này là đánh giá hiệu quả của một-AMA trên lipid peroxy (LPO) và các hoạt động của SOD và CAT trong văn hóa tế bào gan của con người. Những ảnh hưởng của BPCN, ACC, và SIL về hoạt động SOD và CAT và LPO trong văn hóa tế bào gan của con người say sưa với một-AMA cũng đã được kiểm tra.
Vật liệu và phương pháp
Hóa chất và vật liệu
Media, bổ sung, và các thuốc thử sử dụng cho các tế bào gan
văn hóa, một-AMA , và tất cả các thuốc giải độc thử nghiệm đã thu được từ Sigma Ba Lan Chem (a-amanitin, mèo không A2263;. benzylpenicillin / Penicillin G muối kali, mèo không P7794;.. N-acetyl-L-cysteine, mèo không A9165; SILYBIN, mèo. không có. S0417). Fresh, đơn bào gan người hiến mạ tấm văn hóa-6 cũng đã thu được từ Lonza, Bỉ (batch không. HE0911101
văn hóa tế bào gan
Tất cả các thí nghiệm đã được sự chấp thuận của Đạo đức địa phương
Ủy ban tại Đại học Y khoa Wrocław. Sau 2 giờ ủ ban đầu, các phương tiện vận chuyển được thay thế bằng văn hóa được xác định vừa ing consist- dung dịch muối cân bằng Earle (EBSS) và Waymouth của 752/1 bổ sung 10% huyết thanh bào thai bò (FBS). Sau vòng 12 giờ ủ, các phương tiện đã được trao đổi và các tế bào gan mary tiên văn hóa được duy trì trong 48 giờ với một-AMA và / hoặc các thuốc giải độc được thử nghiệm (ACC, BPCN, SIL) ở nồng độ thức sau: nhóm chứng - các tế bào gan đã nhận được trung bình mà không có một-AMA hoặc các thuốc giải độc; nhóm AMA: a-amanitin (2 mM); nhóm BPCN: benzylpenicyllin (1 mM); nhóm ACC: N-acetyl-L-cysteine ​​(1 mM); nhóm SIL: SILYBIN (100 mM); nhóm AMA þ BPCN: a-amanitin (2 mM) þ benzylpenicyllin (1 mM); nhóm AMA þ ACC: a-amanitin (2 mM) þ N-acetyl-L-cysteine ​​(1 mM); và nhóm AMA þ SIL: a-amanitin (2 mM) þ SILYBIN (100 mM). a-AMA đã được sử dụng ở nồng độ caus- ing giảm khả năng di động trong tế bào gan người cultures.13,14 Nồng BPCN tương ứng với nồng độ của nó đạt được sau khi các nghị liều vá trong điều trị ngộ độc thứ nấm mũ tử vong, đó là 300.000 - 1.000.000 U / kg / ngày tiêm tĩnh mạch (iv) .1,15 Không có báo cáo về một liều lượng tiêu chuẩn của ACC trong ngộ độc nấm. Do đó, chúng tôi thử nghiệm ACC ở nồng độ tương ứng với nồng độ của nó đạt được sau khi đề nghị liều dùng trong điều trị các acetaminophen toxicity.16 SIL đã được sử dụng ở nồng độ tương ứng với nó levels.17,18 plasma điều trị Trong þ AMA BPCN, AMA þ ACC, và nhóm SIL AMA þ, tế bào gan đã đồng thời tiếp xúc với một-AMA và thử nghiệm thuốc giải độc. SOD và hoạt động CAT và nồng độ của malonyldialdehyde (MDA) đã được xác định trong natants siêu phân lập từ tế bào gan homogenates nuôi sau 48 giờ tiếp xúc với một-AMA và / hoặc các thuốc giải độc được thử nghiệm. phương pháp phân tích hoạt động SOD được xác định bằng cách sử dụng bộ dụng cụ xét nghiệm trình chữa khỏi từ Công ty Hoá chất Cayman (mèo không có. 706.002). Xét nghiệm này được dựa trên các thế hệ của O2- trong một hệ thống có chứa xanthine oxidase. O2- giảm tetrazolium muối để formazan thuốc nhuộm, mà được đo colorimetrically. Một đơn vị hoạt động SOD được định nghĩa là lượng enzyme cần thiết để triển lãm 50% dismutation của các gốc tự do. Superoxide hoạt động CAT đã được xác định bằng cách sử dụng một catalase Assay Kit (Công ty Hoá chất Cayman, mèo. không