Commercial culture filtrate from T.

Commercial culture filtrate from T. reesei
(Celluclast, NOVO, Denmark) was subjected to gel
filtration (Biogel P-6) before fractionation by
DEAE-Trisacryl (IBF, France) ion-exchange
chromatography at pH 5.0 (5-250 mM ammonium
acetate, room temperature). Homogeneous
exo-cellobiohydrolase I and cellobiohydrolase
II were obtained by affinity chromatography
[6]. Endoglucanase II and III from T. reesei
QM 9414, purified by ion-exchange chromatography,
were kindly donated by Dr G. Pettersson
(Uppsala, Sweden). Estimated pl values for each
enzyme are as reported [7].
The 4-methylumbelliferyl P-glycosides of the
cello-oligosaccharides (MeUmbp(Glc)n n = l-5)
and of lactose (MeUmb &Gal p(l+4)Glc) were
prepared as described [5,8]. Cellobiose, lactose
and gluconolactone are commercial products
(Koch Light, England).
The release of 4-methylumbelliferone (MeUmb)
from the cellobioside or lactoside was measured
continuously by difference spectrophotometry at
347 nm [5]. Detection by HPLC of the
chromophoric reaction products (3 13 nm) resulting
from the action of the enzymes on
MeUmbfl(Glc), was as reported [5].
All reactions were at pH 5.0 (0.1 M sodium
acetate buffer) and 25°C. Protein was estimated
from absorption coefficients at 280 nm as determined
by dry weight measurements (H.v.T.,
unpublished).
Analytical isoelectric focusing (PAG-IEF) was
performed on an LKB Multiphore apparatus and
Ampholine PAG plates (pH 3.5-9.5). Samples
were first dialysed against distilled water using an
Amicon dialysis apparatus (PM-10 filters). Isoelectric
point standard proteins were from LKB. After
the focusing run gels were flooded with a solution
of the appropriate MeUmb@glycoside (0.5 mM in
sodium acetate buffer, pH 5.0) in the presence or
absence of an inhibitor (5 mM cellobiose, or 1 mM
gluconolactone). After approx. 2 min incubation
(room temperature) the gels were rinsed once with
distilled water. Enzyme active fractions became
visible as blue fluorescent bands upon trans-

Kết quả (Việt) 1:

Thương mại văn hóa filtrate từ T. reesei(Celluclast, NOVO, Đan Mạch) đã phải chịu để gellọc (Biogel P-6) trước khi đoạn bởiTrao đổi ion DEAE-Trisacryl (IBF, Pháp)sắc kí ở pH 5.0 (5-250 mM amoniaxetat, nhiệt độ phòng). Đồng nhấteXo-cellobiohydrolase tôi và cellobiohydrolaseII đã được ái lực sắc kí[6]. Endoglucanase II và III từ T. reeseiQM 9414, tinh chế bằng sắc kí trao đổi ion,đã vui lòng tặng bởi tiến sĩ G. Pettersson(Uppsala, Thụy Điển). Ước tính giá trị pl cho mỗienzyme như báo cáo [7].4-methylumbelliferyl P-glicozit của cácCello-oligosaccharide (MeUmbp (Glc) n n = l-5)và của đường sữa lactoza (MeUmb & Gal p(l+4)Glc)chuẩn bị như được mô tả [5,8]. Xenlobioza, đường sữa lactozavà gluconolactone là sản phẩm thương mại(Koch ánh sáng, Anh).Việc phát hành của 4-methylumbelliferone (MeUmb)từ cellobioside hoặc lactoside được đoliên tục bởi sự khác biệt quang phổ tại347 nm [5]. Phát hiện bởi HPLC của cácsản phẩm chromophoric phản ứng (3 13 nm) kết quảtừ hành động của các enzym ngàyMeUmbfl(Glc), là báo cáo [5].Tất cả các phản ứng ở pH 5.0 (cách 0.1 M natribộ đệm axetat) và 25 ° C. Protein ước tínhtừ hấp thụ hệ tại 280 nm được xác địnhbởi phép đo trọng lượng khô (H.v.T.,Chưa được công bố).Phân tích tập trung isoelectric (PAG-IEF) làthực hiện trên một thiết bị LKB Multiphore vàAmpholine PAG tấm (độ pH 3,5-9,5). Mẫulần đầu tiên được dialysed chống lại bằng cách sử dụng nước cất mộtBộ máy lọc máu Amicon (am-10 bộ lọc). Isoelectricđiểm chuẩn protein từ LKB. Sau khigel chạy tập trung bị ngập nước với một giải phápcủa MeUmb@glycoside thích hợp (0,5 mM trongnatri axetat đệm, pH 5.0) trong sự hiện diện hoặcsự vắng mặt của một chất ức chế (5 mM xenlobioza hoặc 1 mMgluconolactone). Sau khoảng 2 phút ấp(nhiệt độ phòng) gel được rửa một lần vớinước cất. Phần phân đoạn của hoạt động enzyme trở thànhnhìn thấy được như màu xanh huỳnh quang ban nhạc khi trans-

Kết quả (Việt) 2:

Lọc văn hóa thương mại từ T. reesei
(Celluclast, NOVO, Đan Mạch) đã phải chịu gel
lọc (Biogel P-6) trước khi phân đoạn bởi
DEAE-Trisacryl (IBF, Pháp) trao đổi ion
sắc ký ở pH 5.0 (5-250 mM ammonium
acetate , nhiệt độ phòng). Đồng nhất
exo-cellobiohydrolase tôi và cellobiohydrolase
II đã thu được bằng phương pháp sắc ký ái lực
[6]. Endoglucanase II và III từ T. reesei
QM 9414, tinh chế bằng sắc ký trao đổi ion,
đã vui lòng tặng bằng Tiến sĩ G. Pettersson
(Uppsala, Thụy Điển). Giá trị pl ước tính cho mỗi
enzyme được như báo cáo [7].
The 4-methylumbelliferyl P-glycosid của
cello-oligosaccharides (MeUmbp (GLC) nn = l-5)
và đường lactose (MeUmb & Gal p (l + 4) GLC) đã được
chuẩn bị như mô tả [5,8]. Cellobiose, lactose
và Glucono delta-lacton là những sản phẩm thương mại
(Koch Light, England).
Việc phát hành 4 methylumbelliferone (MeUmb)
từ cellobioside hoặc lactoside được đo
liên tục bởi sự khác biệt quang phổ ở
347 nm [5]. Phát hiện bởi HPLC của
sản phẩm phản ứng chromophoric (3 13 nm) kết quả
từ hành động của các enzyme trên
MeUmbfl (GLC), đã được báo cáo [5].
Tất cả các phản ứng là ở pH 5,0 (0,1 M sodium
acetate buffer) và 25 ° C . Protein được ước tính
từ hệ số hấp thụ ở 280 nm được xác định
bằng cách đo trọng lượng khô (HVT,
chưa công bố).
Đẳng điện phân tích tập trung (PAG-IEF) đã được
thực hiện trên một bộ máy LKB Multiphore và
tấm Ampholine PAG (pH 3,5-9,5). Mẫu
đầu tiên được chạy thận đối với nước cất bằng cách sử dụng một
bộ máy Amicon lọc máu (PM-10 bộ lọc). Đẳng điện
protein chuẩn điểm là từ LKB. Sau khi
các bản gel chạy tập trung bị ngập nước với một giải pháp
của hợp MeUmb @ glycoside (0,5 mM trong
natri đệm acetate, pH 5.0) với sự có mặt hay
vắng mặt của một chất ức chế (5 mM cellobiose, hoặc 1 mM
Glucono delta-lacton). Sau khoảng. 2 phút ủ
(nhiệt độ phòng) gel được rửa một lần với
nước cất. Enzyme phân số hoạt động đã trở thành
hữu hình như các ban nhạc huỳnh quang màu xanh khi máy biến áp