Measurements of Monoamine Oxidase A

Measurements of Monoamine Oxidase Activity
Mouse brain mitochondrial fractions were prepared follow-
ing the procedure of Schurr and Livne.
7)
Monoamine oxidase
(MAO) activity was assessed spectrophotometrically as de-
scribed previously.
8)
Briefly, the brain tissues were homoge-
nized in 10 mmol/l cold sodium phosphate buffer (pH 7.4,
containing 320 mmol/l sucrose). The mixture was cen-
trifuged at 4000 r/min for 10 min; the supernatant was cen-
trifuged at 15000 r/min for 20 min to deposit the protein,
w
hich was suspended in the same buffer. Protein concentra-
tion was estimated and adjusted to 1 g/l. The assay mixtures
contained 4 mmol/l 5-HT or 2 mmol/l
b
-phenylethylamine
(as specific substrates for MAO-A and MAO-B, respec-
tively), 200
m
l of the mitochondrial fraction, and 10 mmol/l
sodium phosphate buffer (pH 7.4) up to a final volume of
1
ml. The reaction was allowed to proceed at 37 °C for
20 min, and ceased by adding 200
m
l of 1 mol/l hydrochloric
acid. The reaction product was extracted with 4 ml of butyl-
acetate (for MAO-A assay) or cyclohexane (for MAO-B
assay), respectively. The organic phase was measured at a
wa
v
elength of 280 or 242 nm for MAO-A or MAO-B assay
with a spectrophotometer. Blank samples were prepared by
adding 1 mol/l HCl (200
m
l) prior to reaction, and were sub-
sequently treated in the same manner.
Statistical Analysis
All data were presented as
mean

S.E.M. The effects of sarsasapogenin were analyzed
by
one-way analysis of variance (ANOVA). When significant
v
ariances (
p

0.05) were found, post hoc comparisons were
performed with Dunnett’s
t
-test

Kết quả (Việt) 1:

Đo lường hoạt động Monoamine OxidasePhần phân đoạn thể não chuột đã được chuẩn bị theo dõi-ing thủ tục Schurr và Livne.7)Monoamine oxidaseHoạt động (MAO) được đánh giá spectrophotometrically là de-scribed trước đó.8)Một thời gian ngắn, các mô não đã là homoge-nized trong 10 mmol/l lạnh natri phosphat đệm (pH 7.4,có 320 mmol/l sucroza). Hỗn hợp là cen-trifuged tại 4000 r/min cho 10 phút; supernatant là cen-trifuged tại 15000 r/min cho 20 phút để gửi tiền chất đạm,which đã bị đình chỉ trong cùng một bộ đệm. Protein concentra-tion ước tính và điều chỉnh cho 1 g/l. Hỗn hợp khảo nghiệmchứa 4 mmol/l 5-HT hoặc 2 mmol/l b-phenylethylamine(như các chất nền cụ thể cho các MAO - A và MAO-B, respec-cách), 200ml phần ti thể, và 10 mmol/lbộ đệm natri photphat (pH 7.4) đến cuối cùng diện tích1ml. Các phản ứng đã được cho phép để tiếp tục ở 37 ° C cho20 phút, và kết thúc bằng cách thêm 200ml của 1 mol/l HClaxit. Sản phẩm phản ứng đã được tách ra với 4 ml butyl-axetat (cho khảo nghiệm MAO-A) hay cyclohexane (đối với MAO-Bkhảo nghiệm), tương ứng. Giai đoạn hữu cơ được đo tại mộtWAvelength 280 hay 242 nm cho MAO-A hoặc khảo nghiệm MAO-Bvới bản phối. Mẫu trống đã được chuẩn bị bởiThêm 1 mol/l HCl (200ml) trước khi đến phản ứng, và tiểu -sequently điều trị theo cách thức tương tự.Phân tích thống kêTất cả dữ liệu đã được trình bày như làcó nghĩa làS.E.M. Tác dụng của sarsasapogenin được phân tíchbởimột chiều các phân tích phương sai (ANOVA). Khi quan trọngvariances)p0,05) đã được tìm thấy, post hoc so sánhthực hiện với của Dunnett t-kiểm tra