Begin with genomic DNA and/or 200-3

Begin with genomic DNA and/or 200-300 kb BAC clone library.

Mechanically shear DNA into ~2 kb bp overlapping fragments.

Isolate on agarose, purify, and clone into standard plasmid vectors.

Sequence ~500 bp from each end of each 2 kb insert.

Sequence from the middle 1,000 bp of each insert is obtained from overlapping clones.

Repeat the process so that 4-5x the total length of the genome is sequenced (dideoxy sequencing is 99.99% accurate).

Results in a contig library with ~97% genome coverage (the missing 3% is composed mostly of repeated DNA sequence).

Assemble hundreds of thousands of overlapping ~500 bp sequences with fast computers operating in parallel (supercomputer).

Kết quả (Việt) 1:

Bắt đầu với gen DNA và/hoặc 200-300 kb BAC clone thư viện.Máy móc shear ADN vào ~ 2 kb bp trùng lặp đoạn.Cô lập trên agarose, tinh chế, và sao chép vào tiêu chuẩn plasmid vectơ.Trình tự ~ 500 bp từ mỗi đầu mỗi 2 kb chèn.Theo trình tự từ bp Trung 1.000 số mỗi chèn là thu được từ chồng chéo bắt chước.Lặp lại quá trình do đó 4-5 x với tổng chiều dài của bộ gen trình tự (trình tự dideoxy là chính xác 99,99%).Kết quả trong một thư viện contig với vùng phủ sóng bộ gen ~ 97% (mất 3% gồm chủ yếu là các trình tự ADN lặp đi lặp lại).Tập hợp hàng trăm ngàn trùng lặp ~ 500 bp trình tự với các máy tính nhanh chóng hoạt động song song (siêu máy tính).