In hemagglutinin assay, washed pool

In hemagglutinin assay, washed pooled chicken red blood
cells (10% in Alsever's solution, Lampire Biological Laboratories)
were diluted to 1% using PBS buffer solution right
before the experiment. After treated by as-coated slips for 2 h
(20 mg mm2 of La0.9MnO3), PR8 solution (100 mL at
3.57  105 TCID50 mL1
) was added into the first column
of a Corning V-bottom 96-well plate, which was then 2-fold
serially diluted across the 96-well plate with PBS. The final
50 mL of solution from each well in the last column was
disposed. Then 50 mL of freshly diluted chicken red blood
cells (1%) was added to each well and mixed by gently tapping
the plate. The plate was incubated for 30 min at 4 1C and HA
Unit (HAU) was observed directly from end point of agglutination
phenomena. Experiments were carried out in triplicate.
Neuraminidase assays were carried out in a 48-well plate.
As-coated slips (with 20 mg mm2 of La0.9MnO3) were
immersed in 30 uL of neuraminidase solution (1UN mL1
,
Type V, from Clostridium perfringens) on ice for 1 h. Then
6 mL of solution was taken out and mixed with 50 mL of 20
-(4-
Methylumbelliferyl)-α-D-N-acetyl neuraminic acid sodium salt
hydrate aqueous solution (5 mM) and 550 mL of sodium
acetate buffer (100 mM) with calcium chloride (2 mM). The
mixture was incubated at 37 1C for 30 min. Then, 200 mL of
glycine buffer (200 mM, pH 10.7) was added and the
fluorescence signal from 400 to 500 nm was collected using
a Quanta Master Spectrofluorimeter (Photon Technology
International) with an exciting wavelength of 365 nm. The
emission intensity at 450 nm was used to compare the activity
of neuraminidase.
3. Results and discussion
Fig. 1 shows the XRD patterns of LaxMnO3 (x¼1, 0.95, and
0.9) samples calcined at 700 1C. The diffraction patterns of
LaxMnO3 are assigned to a rhombohedral perovskite-structured
oxide phase with a space group of R3̄
c. It is worth noticing that
no diffraction peak of Mn3O4 phase appeared in the
La0.95MnO3 and La0.9MnO3 samples, which is in agreement
with other reports [55,56].
The electron configuration of Mn4þ ions in an octahedral field
(
4
A2g) allows observing their electron paramagnetic resonance
(EPR) spectra at room temperature [57]. Thus, we investigated
Mn4þ ions signal of the LaxMnO3 (x¼1, 0.95, and 0.9) samples
by EPR measurement. As shown in Fig. 2, a unique signal with gvalue
around 1.99 was detected for all LaxMnO3 (x¼, 0.95, and
0.9) samples, which was correlated with Mn4þ ions [58]. Due to
the fact that intensity of Mn4þ ions is proportion to the double
integrated area of EPR spectrum [59], we compared the concentration
of Mn4þ ions among the LaxMnO3 (x¼1, 0.95, and 0.9)
samples. The double integrated area (La0.9MnO37.88 1011;
La0.95MnO32.95 1011; LaMnO31.14 1011) increased with
decreasing of La/Mn ratio. Therefore, the lower La/Mn ratio
achieved the higher concentration of Mn4þ ions in the LaxMnO3
(x¼1, 0.95, and 0.9) samples, which correlated to higher oxidative
ability [56,60].
The results of H2-TPR experiments performed on the
LaxMnO3 (x=1, 0.95, and 0.9) samples are depicted in
Fig. 3. The LaxMnO3 (x¼1, 0.95, and 0.9) samples were characterized by the presence of three H2 reduction peaks
based on temperature, which indicated the multiple sites for the
reduction of perovskites. The first peak located at the
temperature of 250–260 1C was assigned to the removal of
non-stoichiometric excess oxygen accommodated within the
lattice. The following two peaks located at 330–340 1C and
370–380 1C were attributed to the reduction of Mn4þ to Mn3þ
[60,61]. In order to further investigate the Mn4þ ions amount
in the LaxMnO3 (x=1, 0.95, and 0.9) samples, we integrated
the peak area and summarized in Table 1. It was noted that the
integrated peak area assigned to the reduction of Mn4þ to
Mn3þin the LaxMnO3 (x¼1, 0.95, and 0.9) samples was
getting larger while the ratio of La/Mn was decreased, which
indicated the more amount of Mn4þ ions at x¼0.9 and
corresponded well to the EPR results

Kết quả (Việt) 1:

Trong khảo nghiệm hemagglutinin, rửa sạch những chicken đỏ máuCác tế bào (10% giải pháp của Alsever, Phòng thí nghiệm sinh học Lampire)đã được pha loãng 1% sử dụng PBS đệm giải pháp quyềntrước khi thử nghiệm. Sau khi được điều trị bởi tráng như phiếu cho 2 h(20 mg mm2 La0.9MnO3), PR8 giải pháp (100 mL ởML1 3,57 105 TCID50) đã được bổ sung vào cột đầu tiênmột tấm Corning V-bottom 96-Vâng, đó là sau đó 2-foldserially pha loãng trên tấm 96-cũng với PBS. Trận chung kết50 mL của các giải pháp từ mỗi tốt trong các cột cuối cùng làxử lý. Sau đó 50 mL máu tươi pha loãng gà đỏCác tế bào (1%) đã được thêm vào mỗi tốt và pha trộn bằng cách bấm vào nhẹ nhàngCác tấm. Các tấm được ủ trong 30 phút tại 1 c 4 và HAĐơn vị (hậu) được quan sát trực tiếp từ điểm cuối của agglutinationhiện tượng. Thí nghiệm đã được thực hiện trong triplicate.Neuraminidase thử nghiệm được tiến hành trong một tấm 48-Vâng.Đã tráng như phiếu (với 20 mg mm2 của La0.9MnO3)đắm mình trong 30 uL neuraminidase giải pháp (1UN mL1,Loại V, từ Clostridium perfringens) trên băng cho 1 h. sau đó6 mL của giải pháp đã được đưa và trộn với 50 mL 20-(4-Methylumbelliferyl) - α - D-N-axetyl neuraminic axit natri muốihydrat dung dịch (5 mM) và 550 mL natriaxetat đệm (100 mM) với canxi clorua (2 mM). Cáchỗn hợp được ủ tại 37 1 c trong 30 phút. Sau đó, 200 mLGlycine đệm (200 mM, độ pH 10.7) đã được bổ sung và cáchuỳnh quang tín hiệu từ 400 đến 500 nm đã được thu thập bằng cách sử dụngmột Thạc sĩ tử Spectrofluorimeter (Photon công nghệQuốc tế) với một bước sóng thú vị của 365 nm. Cáccường độ bức xạ tại 450 nm đã được sử dụng để so sánh các hoạt độngcủa neuraminidase.3. kết quả và thảo luậnHình 1 cho thấy các mô hình XRD của LaxMnO3 (x¼1, 0,95, vàcách 0.9) mẫu calcined tại 700 1C. Các mô hình nhiễu xạ củaLaxMnO3 được chỉ định để theo một cấu trúc perovskiteôxít giai đoạn với một nhóm space của R3̄c. đó là giá trị nhận thấy rằngkhông có giai đoạn đỉnh cao của Mn3O4 nhiễu xạ xuất hiện trong cácMẫu La0.95MnO3 và La0.9MnO3, mà là trong thỏa thuậnvới các báo cáo khác [55,56].Cấu hình electron của ion Mn4þ trong một lĩnh vực Bát diện(4A2g) cho phép quan sát của họ cộng hưởng thuận từ điện tửSpectra (EPR) ở nhiệt độ phòng [57]. Vì vậy, chúng tôi điều traCác ion Mn4þ tín hiệu của LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫubởi EPR đo lường. Như minh hoạ trong hình 2, một tín hiệu duy nhất với gvaluekhoảng 1,99 được phát hiện cho tất cả các LaxMnO3 (x¼, 0,95, vàcách 0.9) mẫu, mà là tương quan với các ion Mn4þ [58]. Dothực tế là cường độ của các ion Mn4þ tỷ lệ tới đôitích hợp tích EPR phổ [59], chúng tôi so với nồng độCác ion Mn4þ trong số LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9)mẫu. Tích hợp đôi lá (La0.9MnO3 7,88 1011;La0.95MnO3 2,95 1011; LaMnO3 1.14 1011) tăng vớigiảm trong tỷ lệ La/Mn. Do đó, tỷ lệ thấp hơn La/Mnđạt được nồng độ cao của Mn4þ ion trong LaxMnO3(x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu mà tương quan đến cao oxy hóacó khả năng [56,60].Các kết quả của thí nghiệm H2-TPR thực hiện trên cácLaxMnO3 (x = 1, 0,95 và 0,9) mẫu được mô tả trongHình 3. LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu đã được đặc trưng bởi sự hiện diện của ba đỉnh núi giảm H2Dựa trên nhiệt độ, chỉ ra nhiều trang web cho cácgiảm perovskites. Đỉnh đầu tiên nằm ở cácnhiệt độ 250 – 260 1 C được giao nhiệm vụ để loại bỏkhông stoichiometric oxy dư thừa cung cấp chỗ ở trong cáclưới. Các đỉnh núi sau hai tọa lạc tại 330-340 1 C và370-380 1 C đã được quy cho việc giảm Mn4þ đến Mn3þ[60,61]. để tiếp tục điều tra số tiền các ion Mn4þtrong LaxMnO3 (x = 1, 0,95 và 0,9) mẫu, chúng tôi tích hợpkhu vực đỉnh và tóm tắt trong bảng 1. Nó đã được ghi nhận rằng cáctích hợp đỉnh khu vực được chỉ định để giảm Mn4þ đếnMn3þin LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫunhận được lớn hơn trong khi tỷ lệ của La/Mn đã giảm, màchỉ ra số lượng nhiều hơn các ion Mn4þ tại x¼0.9 vàtrao đổi thư từ tốt để kết quả EPR

Kết quả (Việt) 2:

Trong hemagglutinin khảo nghiệm, rửa sạch gà gộp máu đỏ
tế bào (10% trong dung dịch Alsever của, phòng thí nghiệm sinh học Lampire)
được pha loãng đến 1% sử dụng dung dịch đệm PBS ngay
trước khi thí nghiệm. Sau khi điều trị bằng phiếu như bọc cho 2 h
(20 mg mm2 của La0.9MnO3), giải pháp PR8 (100 mL ở
3.57? 105 TCID50 ML1
) đã được bổ sung vào cột đầu tiên
của một Corning V-dưới tấm 96-tốt, mà sau đó đã được 2 gấp
pha loãng trên phiến 96 giếng với PBS. Các thức
50 ml dung dịch từ mỗi giếng ở cột cuối cùng đã được
xử lý. Sau đó 50 mL gà tươi pha loãng máu đỏ
tế bào (1%) đã được thêm vào từng giếng và trộn bằng cách nhẹ nhàng khai thác
các tấm. Các tấm được ủ trong 30 phút ở 4 1C và HA
Unit (HAU) đã được quan sát trực tiếp từ điểm cuối của ngưng kết
các hiện tượng. Các thí nghiệm được thực hiện trong ba lần.
Xét nghiệm Neuraminidase được thực hiện trong một tấm 48-tốt.
Như bọc phiếu (với 20 mg mm2 của La0.9MnO3) đã được
đắm mình trong 30 uL của giải pháp neuraminidase (1UN ML1
,
loại V, từ Clostridium perfringens) trên băng trong 1 giờ. Sau đó
6 ml dung dịch đã được lấy ra và trộn với 50 ml dung dịch 20
- (4-
methylumbelliferyl) -α-DN-acetyl natri axit muối neuraminic
hydrate dung dịch nước (5 mM) và 550 ml dung dịch natri
đệm acetate (100 mM) với clorua canxi (2 mM). Các
hỗn hợp đã được ủ ở 37 1C 30 phút. Sau đó, 200 ml của
bộ đệm glycine (200 mM, pH 10.7) đã được bổ sung và các
tín hiệu huỳnh quang 400-500 nm được thu thập bằng
một Quanta Thạc sĩ Spectrofluorimeter (Photon Công nghệ
Quốc tế) với một bước sóng thú vị của 365 nm. Các
cường độ phát xạ tại bước sóng 450 nm được sử dụng để so sánh hoạt động
của neuraminidase.
3. Kết quả và thảo luận
hình. 1 cho thấy các mô hình nhiễu xạ tia X của LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và
0,9) mẫu nung ở 700 1C. Các mô hình nhiễu xạ của
LaxMnO3 được gán cho một perovskite cấu trúc rhombohedral
giai đoạn oxit với một nhóm không gian của R3
c. Điều đáng chú ý là
không có nhiễu xạ đỉnh cao của Mn3O4 giai đoạn xuất hiện trong các
mẫu La0.95MnO3 và La0.9MnO3, mà là trong thỏa thuận
với các báo cáo khác [55,56].
Cấu hình electron của ion Mn4þ trong một trường bát diện
(
4
A2g) cho phép quan sát điện tử của họ cộng hưởng thuận từ
(EPR) phổ ở nhiệt độ phòng [57]. Do đó, chúng tôi điều tra
Mn4þ ion tín hiệu của LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu
bằng cách đo EPR. Như thể hiện trong hình. 2, một tín hiệu độc đáo với gvalue
khoảng 1.99 đã được phát hiện cho tất cả LaxMnO3 (x¼, 0,95 và
0,9) mẫu, trong đó có tương quan với các ion Mn4þ [58]. Do
thực tế rằng, cường độ của các ion Mn4þ là tỷ lệ thuận với đôi
diện tích của EPR phổ [59], chúng tôi so sánh nồng độ
của các ion Mn4þ trong LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9)
mẫu. Các đôi diện tích hợp (? La0.9MnO3 7.88 1011;
La0.95MnO3 2.95 1011;??? LaMnO3 1,14 năm 1011) tăng lên với
giảm tỷ lệ La / Mn. Do đó, việc hạ thấp tỷ lệ La / Mn
đạt được nồng độ cao của các ion Mn4þ trong LaxMnO3
(x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu, mà tương quan với oxy hóa cao hơn
khả năng [56,60].
Kết quả của thí nghiệm H2-TPR thực hiện trên
LaxMnO3 (x = 1, 0.95, và 0.9) mẫu được mô tả trong
hình. 3. LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu được đặc trưng bởi sự hiện diện của ba đỉnh giảm H2
dựa vào nhiệt độ, trong đó chỉ ra các nhiều trang web cho các
giảm perovskites. Đỉnh đầu tiên nằm ở
nhiệt độ 250-260 1C đã được giao cho việc loại bỏ
oxy dư thừa không cân bằng hóa học cung cấp chỗ ở trong
mạng tinh thể. Hai đỉnh núi sau nằm tại 330-340 1C và
370-380 1C là do việc giảm Mn4þ để Mn3þ
[60,61]. Để điều tra thêm các Mn4þ ion lượng
trong LaxMnO3 (x = 1, 0.95, và 0.9) mẫu, chúng tôi tích hợp
các khu vực cao điểm và tóm tắt trong Bảng 1. Cần lưu ý rằng các
khu vực đỉnh cao tích hợp giao cho giảm Mn4þ để
Mn3þin các LaxMnO3 (x¼1, 0,95 và 0,9) mẫu đã
nhận được lớn hơn trong khi tỷ lệ của La / Mn được giảm, trong đó
chỉ ra số lượng nhiều hơn của các ion Mn4þ tại x¼0.9 và
tương ứng cũng cho kết quả EPR