IntroductionPfu DNA polymerase is a

Introduction
Pfu DNA polymerase is a DNA polymerase II, one of the most commonly used high-fidelity polymerase chain reaction (PCR) enzymes [1–3]. Initially, the Pfu DNA polymerase was directly isolated from Pyrococcus furiosus, but culturing this anaerobic archimycetes made it difficult to obtain large quantity of the enzyme [4]. Subsequently, the Pfu gene was successfully cloned and recombinantly expressed in Escherichia coli [5, 6]. When the Pfu gene was cloned into the pET30-LIC plasmid and expressed in the E. coli BL21(DE3) pLysS cell line, and the recombinant protein had a specific activity of 746 U mL-1 medium after single induction with 1 mM isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside (IPTG) [7]. Using a similar recombinant vector and host cell, the production of Pfu DNA polymerase was 299 U mL-1 medium with the single addition of 0.5 mM IPTG was also achieved [8].
Isopropyl-b-D-thiogalactopyranoside is a synthetic analog of lactose and commonly used for gratuitous inducer which binds and inactivates the lac repressor in intracellular protein expression [9]. The recombinant protein production is influenced significantly by the amount of IPTG required for induction [10–12], as well as by the methods of IPTG addition [13, 14]. Recently, a double limitation strategy (glucose and IPTG) for E. coli fed-batch cultures was used for achieving high cell densities without accumulation of acetic acid, the bioprocess volumetric productivity of targeted b-galactosidase was enhanced and media cost was reduced due to the low level of IPTG used [15]. Therefore, the search for highly efficient IPTG induction strategies for recombinant protein production continues to be of interest.

Kết quả (Việt) 2:

Giới thiệu
PFU DNA polymerase là một DNA polymerase II, một trong những phổ biến nhất là sử dụng độ trung thực cao phản ứng chuỗi polymerase (PCR) enzyme [1-3]. Ban đầu, các polymerase PFU DNA được phân lập trực tiếp từ Pyrococcus furiosus, nhưng nuôi cấy kỵ khí này archimycetes đã làm cho nó khó khăn để có được số lượng lớn các enzyme [4]. Sau đó, các gen PFU đã nhân bản thành công và recombinantly hiện trong Escherichia coli [5, 6]. Khi gen PFU đã được nhân bản vào plasmid pET30-LIC và thể hiện trong E. coli BL21 dòng tế bào (DE3) pLysS, và các protein tái tổ hợp đã có một hoạt động cụ thể của 746 U-1 mL môi trường sau khi cảm ứng duy nhất với 1 mM isopropyl- BD-thiogalactopyranoside (IPTG) [7]. Sử dụng một vector tái tổ hợp và lưu trữ tế bào tương tự, sản xuất PFU DNA polymerase là 299 U mL-1 trung với sự bổ sung duy nhất là 0,5 mM IPTG cũng đã đạt được [8].
Isopropyl-BD-thiogalactopyranoside là một tương tự tổng hợp lactose và thường được sử dụng để cảm ứng cho không ràng buộc và bất hoạt repressor lac trong biểu hiện protein trong tế bào [9]. Việc sản xuất protein tái tổ hợp được ảnh hưởng đáng kể bởi số lượng cần thiết cho cảm ứng IPTG [10-12], cũng như bằng các biện pháp bổ sung IPTG [13, 14]. Gần đây, một chiến lược hạn chế đôi (glucose và IPTG) cho E. coli nền văn hóa ăn-lô đã được sử dụng để đạt được mật độ tế bào cao mà không tích tụ của acid acetic, năng suất Xử Lý Sinh tích của mục tiêu b-galactosidase được nâng cao và chi phí truyền thông đã giảm do mức thấp của IPTG sử dụng [15]. Do đó, việc tìm kiếm các chiến lược IPTG cảm ứng hiệu quả cao để sản xuất protein tái tổ hợp tiếp tục được quan tâm.