Plant extraction Preparation The dr

Plant extraction Preparation
The dried and powdered plant samples of Phyllanthus amarus Schum. & Thonn (in vivo) and callus (in vitro) (each 50g) were extracted successively with ethanol, methanol and Petroleum ether (each 400ml.) for 25-26 hrs.,using a Soxhlet apparatus. Then collected solutions were filtered through Whatman No-1 filer paper. The extracts were evaporated to dryness under reduced pressure at 90°C by Rotary vacuum evaporator to obtain the respective extracts and stored in a freeze condition at −18°C until used for further analysis.
Phenolic Estimation
To estimate the total phenolic content of plant extracts the protocol of Bray[19] was followed, wherein the standard curve of different concentrations of Catechol was prepared.
500mg of test sample was taken and ground in 10- times volume of 80% ethanol. The homogenate Centrifuged at 10,000 rpm for 20 min., supernatant was saved. Re- extracted the residue with 50- times the volume of 80% ethanol, centrifuged and supernatant was pooled. The supernatant was then evaporated to dryness. After that the residue was dissolved in a known volume of distilled water (5 ml). Pipetted out aliquots (0.2ml) into the test tubes. Made up the volume in each tube to 3ml with water. 0.5 ml of Folin- Ciocalteu reagent was added. After 3 min, 2 ml of 20% Na2CO3 solution was also added to each tube. The tube was placed in boiling water for exactly one minute, cooled and measured the absorbance at 650nm against a reagent blank. A standard curve was prepared using different concentration of Catechol.
Antioxidant activity (DPPH free radical scavenging activity) of Different extracts
The model of scavenging the stable DPPH radical is a widely used method to evaluate the free radical scavenging ability of various samples[20]. DPPH is a stable nitrogen centered free radical, the color of which changes from violet to yellow upon reduction either by the process of hydrogen- or electron-donation[21]. Specific compounds or extracts are allowed to react with the stable radical, DPPH•, in methanol solution. In the presence of hydrogen donors, DPPH• is reduced and a stable free radical is formed from the scavenger. The reaction of DPPH• is monitored by the decrease of the absorbance of its radical at 517 nm, but upon reduction by an antioxidant, the absorption disappears[22].
DPPH• + antioxidant ® DPPH-H + antioxidant•
Purple color Yellow color
The antioxidant activity of the plant extracts and the standard was assessed on the basis of the radical scavenging effect of the stable 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)-free radical activity by modified method[23].The diluted working solutions of the test extracts were prepared in methanol. Ascorbic acid was used as standard in 1-1000 μg/ml solution and the same concentrations were prepared of the test solutions. 0.002% of DPPH was prepared in methanol and 1 ml of this solution was mixed with 1 ml of sample solution and standard solution separately. Experiment was done in triplicate. These solution mixtures were kept in dark for 30 minutes and optical density was measured at 517 nm using Cecil-Elect Spectrophotometer. Lower the absorbance of the reaction mixture indicates higher free radical scavenging activity. Methanol (1 ml) with DPPH solution (0.002%, 1 ml) was used as blank. The optical density was recorded and the inhibitory effect of DPPH was calculated according to the following formula[24].
Inhibition (%) = [(Absorbance control –Absorbance sample)/ Absorbance control] × 100
IC50 represents the level where 50% of the radicals were scavenged by test samples.
RESULT AND DISCUSSIONS
Callus induction
MS medium supplemented with different concentrations of auxins like 2, 4- D, NAA, IAA, IBA was used for callus induction. The internodal explants showed maximum callus formation on 2, 4- D at 0.6mg/l (Table 1, Fig. 1,2). This gave rise to Green nodulated, fast growing compact callus. Callus obtained from 2, 4- D (0.6mg/l) was further evaluated for its antioxidant activity. Similarly, only auxin 2, 4-D was also used for the induction of normal callus in Rauvofia serpentina Benth. ex Kurz as reported by Pant and Joshi[25]. Whereas, in contrast to this, Philomania [26], reported that, for callus induction the combination of two auxins (2,4-D and Kn) was used in plant Sapindus mukorossi Gaertn.
Crude extraction content
The significant variation in the yields of Phyllanthus amarus Schum. and Thonn. extracts was shown using various fraction of solvents. The yield of extracts of plant using methanol, ethanol, and petroleum ether for in vivo samples was 6.96, 5.35, 4.63 respectively. Whereas, for in vitro samples it was 6.42, 5.13, 4.25 respectively (Table 2). The variation in yield may be due to the polarity of the solvents used in the extraction process.
Phenol Content
The beneficial effects derived from phenolic compounds have been attributed to their antioxidant activity[27,28]. They exhibited antioxidant activity by inactivating lipid free radicals or preventing decomposition of hydroperoxides into free radicals[29,30]. The total phenol content in the tissues varied from 195-215 (mg/100gm) respectively. The screening of all plant samples revealed that the amount of phenols was higher in the methanol sample as compared to all other plant extraction samples (Table2). The maximum amount of phenols was observed in in vitro samples while; the lower amount was observed in in vivo samples.
DPPH Assay
DPPH radical is commonly used as a Substrate to evaluate antioxidant activity; it is a stable free radicals that could accept an electron or hydrogen radical to become a stable molecule[31]. The reduction of DPPH radical was determined by the decrease in its absorbance induced by antioxidant at 517nm. Concentration of sample at which the inhibition percentage reaches 50% is its IC50 value. IC50 value is negatively related to the antioxidant activity, as it expresses the amount of antioxidant needed to decrease its radical concentration by 50%. The lower the IC 50 value, the higher is the antioxidant activity of the tested sample. In the present study, different extracts of Phyllanthus amarus Schum.and Thonn showed potential free-radical scavenging activity. The antioxidant activities of the individual compound, present in the extracts may depend on structural factors, such as the number of phenolic, hydroxyl or methoxyl groups, flavone hydroxyl, keto groups, free carboxylic groups and other structural features[32,33]. It has been shown that the scavenging effect on the DPPH radical increases sharply with the increasing concentration of the sample and standard to a certain extent[34].and hence are strongly dependent on the extract concentration[35]. During the present study, result showed that methanolic extract of in vitro grown P.amarus sample exhibited significant activity with lowest concentration in IC50 (Fig. 3- 8). The IC50 value ranged from 55-200 (µg/mg).Ascorbic acid was used as standard with IC50 value of 57 µg/mg.
Similarly, the use of ascorbic acid as a standard to determine the IC50 value of the extract was found to be use in many plant species like Psilanthus travancorensis (Wt. & Arn.) Leroy [36], Ocimum canum, Ocimum adscendens, Thymus vulgaris and Leucas linifolia [37] respectively.
There is a wide degree of variation between different phenolic compounds in their effectiveness as antioxidants. The different antioxidant activities of phenolic extracts rich in phenolic compounds can be attributed to different extracting solvent as the antioxidant activity depends on the type and polarity of the extracting solvent, the isolation procedures, the purity of active compounds, as well as the test system[38,39]. In the present experiment, the order of total phenol content was recorded in the order of In vitro methanol> in vivo methanol> In vitro ethanol > in vivo ethanol> In vitro Petroleum ether >in vivo Petroleum ether and for the significant antioxidant activity, the same order was observed followed i.e., In vitro methanol> in vivo methanol> In vitro ethanol > in vivo ethanol> In vitro Petroleum ether >in vivo Petroleum ether (Fig. 9).

In the present study it is observed that the in vitro plant extracts exhibit the higher amount of phenol content in comparison to their respective in vivo extracts. The total phenol content in the in vitro methanol extract showed highest amount of phenol content i.e. 212.67 mg/100gm followed by in vivo sample of the same extract i.e. 210.45 mg/100gm. Much higher antioxidant activity of the alcoholic preparation have given evident assumption, is more useful than the aqueous one in medical approach[40]. High percent of yield and high value of phenol content in methanolic extracts show that phenolic constituents must be responsible for such properties[41]. The finding is inagreement with the data of[42,43]. A positive correlation between total phenolic content and antioxidant activity may be present in experiment. The correlation between total phenolic content and antioxidant capacity in the plant samples is possible owing to the presence of following factors, that is may be due to the presence of phenolic compounds or polyphenols or flavonoids or tannins

Kết quả (Việt) 1:

Thực vật chiết xuất chuẩn bị Các mẫu thực vật khô và bột của Phyllanthus amarus Schum. & Thonn (tại vivo) và callus (trong ống nghiệm) (mỗi 50g) được chiết xuất đã liên tục với ethanol, methanol, ether dầu khí (mỗi 400 ml.) cho 25-26 giờ., bằng cách sử dụng một bộ máy Soxhlet. Sau đó giải pháp thu thập được lọc qua giấy tráng nhựa Whatman No-1 filer. Các chất chiết xuất đã bốc hơi khô dưới áp lực giảm ở 90° C bởi máy chưng cho khô chân không để có được các chất chiết xuất tương ứng và lưu trữ trong một tình trạng đóng băng ở −18 ° C cho đến khi được sử dụng để phân tích thêm. Dự toán phenolic Để ước tính tất cả nội dung phenolic của chất chiết xuất từ thực vật giao thức của Bray [19] sau đó, trong đó các đường cong tiêu chuẩn của các nồng độ khác nhau của Catechol đã được chuẩn bị. 500mg của mẫu thử nghiệm đã được đưa và mặt đất trong 10 - lần khối lượng 80% ethanol. Homogenate Centrifuged lúc 10.000 vòng/phút cho 20 phút, supernatant đã được cứu sống. Re - chiết xuất các dư lượng với 50 - lần khối lượng 80% ethanol, ly và supernatant được gộp lại. Supernatant sau đó bốc hơi để khô. Sau đó dư được hòa tan trong một khối lượng nổi tiếng của nước cất (5 ml). Pipetted trong aliquots (0.2 ml) vào ống nghiệm. Tạo thành phần trong mỗi ống để 3ml nước. cách 0.5 ml tinh khiết Folin - Ciocalteu đã được bổ sung. Sau 3 phút, 2 ml 20% Na2CO3 giải pháp đã cũng được thêm vào mỗi ống. Các ống được đặt trong nước sôi cho chính xác một phút, làm mát bằng nước và đo hấp thu tại 650nm với một tinh khiết trống. Một đường cong tiêu chuẩn đã được chuẩn bị bằng cách sử dụng các nồng độ khác nhau của Catechol. Chất chống oxy hóa hoạt động (DPPH gốc tự do scavenging hoạt động) của chất chiết xuất từ khác nhau Các mô hình của nhặt rác DPPH ổn định cực đoan là một phương pháp được sử dụng rộng rãi để đánh giá khả năng scavenging gốc tự do của các mẫu [20]. DPPH là một nitơ ổn định Trung tâm gốc tự do màu sắc của những thay đổi từ màu tím để vàng khi giảm hoặc bằng trình của hydro - hoặc điện tử-tài trợ [21]. Hợp chất cụ thể hoặc chiết xuất được phép để phản ứng với căn ổn định, DPPH•, trong dung dịch methanol. Sự hiện diện của các nhà tài trợ hydro, DPPH• là giảm và một gốc tự do ổn định được tạo thành từ scavenger. Phản ứng của DPPH• được theo dõi bởi giảm hấp thu gốc tại 517 nm, nhưng khi giảm bởi một chất chống oxy hoá, sự hấp thu biến mất [22]. DPPH• + chất chống oxy hoá ® DPPH-H + antioxidant• Màu tím màu sắc màu vàng Các hoạt động chống oxi hóa của các chất chiết xuất từ thực vật và các tiêu chuẩn được đánh giá trên cơ sở có hiệu lực scavenging gốc tự do của ổn định 1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)-gốc tự do hoạt động bằng cách sửa đổi phương pháp [23].Các giải pháp làm việc pha loãng của các chất chiết xuất từ thử nghiệm đã được chuẩn bị trong methanol. Ascorbic acid được sử dụng như là tiêu chuẩn trong 1-1000 μg/ml dung dịch và nồng độ tương tự đã được chuẩn bị trong các giải pháp kiểm tra. 0,002% của DPPH đã được chuẩn bị trong methanol và 1 ml của giải pháp này được trộn với 1 ml mẫu giải pháp và tiêu chuẩn giải pháp một cách riêng biệt. Thử nghiệm đã được thực hiện trong triplicate. Các hỗn hợp giải pháp được giữ trong bóng tối trong 30 phút và quang học mật độ được đo tại 517 nm sử dụng Cecil-Ky thuật phối. Thấp hơn hấp thu của hỗn hợp phản ứng cho biết hoạt động scavenging gốc tự do cao hơn. Methanol (1 ml) với DPPH giải pháp (0,002%, 1 ml) được sử dụng làm trống. Mật độ quang học được thu âm và ức chế tác dụng của DPPH được tính theo công thức sau đây [24]. Ức chế (%) = [(hấp thu kiểm soát-hấp thu mẫu) / hấp thu kiểm soát] × 100 IC50 đại diện cho mức độ nơi 50% của các gốc đã được scavenged bởi các mẫu thử nghiệm. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Callus cảm ứng MS phương tiện bổ sung với các nồng độ khác nhau của auxins thích 2, 4-D, NAA, IAA, IBA được sử dụng cho callus cảm ứng. Internodal explants cho thấy hình thành tối đa callus ngày 2 tháng 4-D tại 0.6 mg/l (bảng 1, hình 1,2). Điều này đã tăng lên đến nodulated màu xanh lá cây, nhanh chóng phát triển nhỏ gọn callus. Callus thu được từ 2, 4-D (0,6 mg/l) được tiếp tục đánh giá cho hoạt động chống oxi hóa của nó. Tương tự như vậy, chỉ auxin 2, 4-D cũng được sử dụng cho cảm ứng của callus bình thường trong Rauvofia chất Benth. Ví dụ Kurz theo báo cáo của quần và Joshi [25]. Trong khi đó, trái ngược với điều này, Philomania [26], báo cáo rằng, đối với callus cảm ứng sự kết hợp của hai auxins (2,4-D và Kn) được sử dụng trong nhà máy Sapindus mukorossi Gaertn. Dầu thô khai thác nội dung Các biến thể đáng kể trong sản lượng của Phyllanthus amarus Schum. và Thonn. chất chiết xuất từ được hiển thị bằng cách sử dụng các phần của dung môi. Sản lượng của chất chiết xuất từ thực vật bằng cách sử dụng methanol, ethanol, và dầu khí ête cho mẫu tại vivo là 6,96 5,35, 4,63 tương ứng. Trong khi đó, đối với mẫu trong ống nghiệm đó là 6,42, 5.13, 4,25 tương ứng (bảng 2). Các biến thể trong sản lượng có thể là do cực của các dung môi được sử dụng trong quá trình khai thác. Phenol nội dung Các hiệu ứng có lợi có nguồn gốc từ các hợp chất phenolic đã được quy cho hoạt động chống oxi hóa của họ [27,28]. Họ trưng bày chất chống oxy hóa hoạt động bởi inactivating gốc chất béo tự do hoặc ngăn chặn phân hủy của hydroperoxides vào gốc tự do [29,30]. Phenol tất cả nội dung trong các mô khác nhau từ 195-215 (mg / 100gm) tương ứng. Kiểm tra tất cả thực vật mẫu tiết lộ số lượng phenol là cao hơn trong mẫu methanol so với tất cả thực vật chiết xuất các mẫu khác (Table2). Số tiền tối đa của phenol được quan sát thấy trong các mẫu trong ống nghiệm trong khi; thấp hơn số tiền được quan sát thấy trong các mẫu tại vivo. Khảo nghiệm DPPH DPPH cực đoan thường được sử dụng như một chất nền để đánh giá chất chống oxy hóa hoạt động; nó là một ổn định gốc tự do mà có thể chấp nhận một điện tử hoặc hydro triệt để trở thành một phân tử ổn định [31]. Giảm DPPH gốc tự do đã được xác định bởi việc giảm hấp thu của nó gây ra bởi chất chống oxy hoá tại 517nm. Nồng độ của mẫu mà tại đó tỷ lệ phần trăm sự ức chế đạt 50% là giá trị IC50 của nó. IC50 giá trị tiêu cực liên quan đến các hoạt động chống oxi hóa, như nó thể hiện số lượng chất chống oxy hoá cần thiết để giảm nồng độ cực đoan của nó bằng 50%. Thấp hơn IC 50 có giá trị, càng cao là chất chống oxy hóa hoạt động của mẫu thử nghiệm. Trong nghiên cứu hiện nay, chất chiết xuất từ khác nhau của Phyllanthus amarus Schum.and Thonn cho thấy tiềm năng miễn phí cấp tiến scavenging hoạt động. Các hoạt động chống oxi hóa của các hợp chất cá nhân, có trong các chất chiết xuất có thể phụ thuộc vào các yếu tố cấu trúc, chẳng hạn như số lượng nhựa phenol, hydroxyl hoặc methoxyl nhóm, flavone hiđrôxyl, keto nhóm, nhóm cacboxylic miễn phí và các tính năng cấu trúc khác [32,33]. Nó đã được chỉ ra rằng hiệu ứng scavenging trên DPPH triệt để tăng mạnh với nồng độ ngày càng tăng của mẫu và các tiêu chuẩn để một số và một số mức độ [34] vì thế mạnh mẽ phụ thuộc vào nồng độ trích xuất [35]. Trong nghiên cứu hiện nay, kết quả cho thấy rằng các chiết xuất methanolic trong ống nghiệm trồng P.amarus mẫu trưng bày các hoạt động đáng kể với nồng độ thấp nhất trong IC50 (hình 3 - 8). IC50 giá trị trải dài từ 55-200 (μg/mg).Ascorbic acid được sử dụng như là tiêu chuẩn với giá trị IC50 57 μg/mg. Tương tự như vậy, việc sử dụng của axít ascorbic như một tiêu chuẩn để xác định giá trị IC50 chiết xuất hiện sử dụng trong nhiều loài thực vật như Psilanthus travancorensis (wt & Arn.) Leroy [36], chi húng quế canum, chi húng quế adscendens, tuyến ức vulgaris và Leucas linifolia [37] tương ứng. Đó là một mức độ rộng của các biến thể giữa các hợp chất phenolic khác nhau trong hiệu quả của họ như là chất chống oxy hóa. Các hoạt động chống oxi hóa khác nhau của chất chiết xuất từ phenolic giàu phenolic hợp chất có thể được quy cho dung môi giải nén khác nhau như các hoạt động chống oxi hóa phụ thuộc vào loại và cực của dung môi giải nén, các thủ tục sự cô lập, độ tinh khiết của hợp chất hoạt động, cũng như hệ thống thử nghiệm [38,39]. Trong thử nghiệm hiện tại, Huân chương phenol tất cả nội dung được thu âm theo thứ tự trong ống nghiệm methanol > tại vivo methanol > trong ống nghiệm ethanol > tại vivo ethanol > dầu khí trong ống nghiệm ête > trong vivo ether dầu khí và các hoạt động chống oxi hóa đáng kể, theo thứ tự được quan sát thấy sau đó, tức là, trong ống nghiệm methanol > tại vivo methanol > trong ống nghiệm ethanol > tại vivo ethanol > dầu khí trong ống nghiệm ête > tại vivo dầu khí ête (hình. 9). Trong nghiên cứu hiện nay nó được quan sát thấy rằng các cây trồng trong ống nghiệm chất chiết xuất từ triển lãm chất chiết xuất từ số tiền cao hơn phenol nội dung so với tương ứng của họ tại vivo. Phenol tất cả nội dung trong các chiết xuất trong ống nghiệm methanol cho thấy số tiền cao nhất của nội dung phenol tức là 212.67 mg / 100gm tiếp theo tại vivo mẫu của cùng một giải nén tức là 210.45 mg / 100gm. Cao chất chống oxy hóa hoạt động của việc chuẩn bị cồn đã đưa ra giả định rõ ràng, là hữu dụng hơn so với dung dịch nước trong cách tiếp cận y tế [40]. Phần trăm cao của năng suất và các giá trị cao phenol nội dung trong methanolic chiết xuất Hiển thị phenolic thành phần phải chịu trách nhiệm về tài sản đó [41]. Việc tìm kiếm là inagreement với các dữ liệu của [42,43]. Một sự tương quan tích cực giữa tất cả các nội dung phenolic và chất chống oxy hóa hoạt động có thể có mặt trong thử nghiệm. Sự tương quan giữa tất cả các nội dung phenolic và chất chống oxy hoá năng lực trong các mẫu thực vật có thể do sự hiện diện của yếu tố sau đây, có nghĩa là có thể là do sự hiện diện của các hợp chất phenolic hoặc polyphenol hoặc flavonoid hoặc tanin

Kết quả (Việt) 2:

Khai thác nhà máy Chuẩn bị
Các mẫu nhà máy bột của Phyllanthus amarus Schum khô và. & Thonn (in vivo) và mô sẹo (in vitro) (mỗi 50g) được trích xuất liên tục với ethanol, methanol và ether dầu khí (mỗi 400ml.) Cho 25 - . 26 giờ bằng cách sử dụng một bộ máy Soxhlet. Sau đó, các giải pháp thu thập được lọc qua Whatman Không - 1 giấy filer. Các chất chiết xuất đã bốc hơi đến khô dưới áp suất thấp ở 90 ° C bằng thiết bị bay hơi chân không Rotary để có được các chất chiết xuất tương ứng và được lưu trữ trong tình trạng đóng băng ở - 18 ° C cho đến khi sử dụng để phân tích thêm.
Phenolic Estimation
Để ước tính tổng hàm lượng phenolic của chất chiết xuất từ thực vật các giao thức của Bray [19] đã được theo sau, trong đó đường cong chuẩn của nồng độ khác nhau của catechol đã được chuẩn bị.
500mg của mẫu thử nghiệm đã được thực hiện và mặt đất trong 10 lần khối lượng của 80% ethanol. Các đồng chất ly tâm ở 10.000 rpm trong 20 phút., Nổi đã được cứu. Tái chiết xuất các chất cặn với 50 lần khối lượng của 80% ethanol, ly tâm và gạn được gộp. Nổi trên mặt sau đó được bốc hơi đến khô. Sau đó phần dư được hòa tan trong một lượng tiếng của nước cất (5 ml). Pipetted ra dung dòch (0.2ml) vào ống nghiệm. Tạo thành các khối lượng trong mỗi ống 3ml đến với nước. 0,5 ml Folin- Ciocalteu thuốc thử đã được bổ sung. Sau 3 phút, 2 ml dung dịch Na2CO3 20% cũng đã được thêm vào mỗi ống. Ống này được đặt trong nước sôi cho đúng một phút, để nguội và đo độ hấp thụ ở 650nm với mẫu trắng tinh khiết. Một đường cong chuẩn đã được chuẩn bị bằng cách sử dụng nồng độ khác nhau của catechol.
hoạt động chống oxy hóa (DPPH hoạt động nhặt rác gốc tự do) của chất chiết xuất khác nhau
Mô hình nhặt rác ổn định DPPH triệt để là một phương pháp được sử dụng rộng rãi để đánh giá khả năng nhặt rác gốc tự do của các mẫu khác nhau [20]. DPPH là một nitơ ổn định trung gốc tự do, màu sắc trong đó thay đổi từ màu tím sang màu vàng khi giảm hoặc bằng quá trình hydrogen- hoặc electron-hiến [21]. Các hợp chất hoặc các chất chiết xuất cụ thể được phép phản ứng với các gốc tự do ổn định, DPPH • , trong dung dịch methanol. Trong sự hiện diện của các nhà tài trợ hydro, DPPH • giảm và ổn định các gốc tự do được hình thành từ xác thối. Phản ứng của DPPH • được giám sát bởi việc giảm độ hấp thụ triệt để tại 517 nm của nó, nhưng khi giảm bởi một chất chống oxy hóa, hấp thu biến mất [22].
DPPH • + chất chống oxy hóa ® DPPH - H + chất chống oxy hóa •
Vàng màu màu tím
Các hoạt động chống oxy hóa của các chất chiết xuất từ thực vật và các tiêu chuẩn được đánh giá trên cơ sở hiệu quả nhặt rác triệt để ổn định 1, 1 - diphenyl - 2 - picrylhydrazyl (DPPH) - Hoạt động của gốc tự do bằng phương pháp biến đổi [23] .Các pha loãng giải pháp làm việc các chất chiết xuất thử nghiệm đã được chuẩn bị trong methanol. Axit ascorbic đã được sử dụng như là tiêu chuẩn trong 1 - 1000 μ g / ml dung dịch và nồng độ tương tự đã được chuẩn bị sẵn sàng của các giải pháp kiểm tra. 0,002% của DPPH đã được chuẩn bị trong methanol và 1 ml dung dịch này được trộn với 1 ml dung dịch mẫu và giải pháp tiêu chuẩn riêng. Thí nghiệm được thực hiện trong ba lần. Những hỗn hợp dung dịch được giữ trong bóng tối trong vòng 30 phút và mật độ quang được đo ở 517 nm sử dụng Cecil - Bầu quang phổ. Thấp hơn độ hấp thụ của hỗn hợp phản ứng chỉ hoạt động nhặt rác gốc tự do cao hơn. Methanol (1 ml) với giải pháp DPPH (0,002%, 1 ml) đã được sử dụng như trống. Mật độ quang học đã được ghi nhận và tác dụng ức chế của DPPH đã được tính toán theo công thức sau [24].
Sự ức chế (%) = [(kiểm soát hấp thụ - mẫu hấp thụ) / kiểm soát hấp thụ] × 100
IC50 là mức mà 50% của gốc đã vơ vét của mẫu thử nghiệm.
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Callus cảm ứng
môi trường MS có bổ sung với nồng độ khác nhau của auxin như 2, 4 D, NAA, IAA, IBA đã được sử dụng cho các mô sẹo cảm ứng. Việc cấy internodal cho thấy hình mô sẹo tối đa trên 2, 4 D ở 0.6mg / l (Bảng 1, Hình. 1,2). Điều này đã dẫn đến xanh nodulated, phát triển nhanh mô sẹo nhỏ gọn. Callus thu được từ 2, 4 D (0.6mg / l) được đánh giá hơn nữa cho hoạt động chống oxy hóa của nó. Tương tự như vậy, chỉ có auxin 2, 4-D cũng được sử dụng cho các cảm ứng của mô sẹo bình thường trong Rauvofia serpentina Benth. ex Kurz theo báo cáo của Pant và Joshi [25]. Trong khi đó, trái ngược với điều này, Philomania [26], đã báo cáo rằng, đối với mô sẹo cảm ứng kết hợp của hai auxin (2,4-D và Kn) đã được sử dụng trong nhà máy Sapindus mukorossi Gaertn.
nội dung khai thác thô
Sự biến động đáng kể trong sản lượng Phyllanthus amarus Schum. và Thonn. chiết xuất được thể hiện bằng cách sử dụng phần khác nhau của dung môi. Năng suất của chất chiết xuất của nhà máy sử dụng methanol, ethanol, ether dầu khí cho in vivo mẫu là 6,96, 5,35, 4,63 tương ứng. Trong khi đó, đối với các mẫu in vitro nó là 6,42, 5,13, ​​4,25 tương ứng (Bảng 2). Sự biến động về năng suất có thể là do sự phân cực của dung môi được sử dụng trong quá trình khai thác.
Phenol Content
Các tác dụng có lợi có nguồn gốc từ các hợp chất phenolic đã được quy cho hoạt động chống oxy hóa của họ [27,28]. Họ trưng bày hoạt động chống oxy hóa của các gốc tự do lipid bất hoạt hoặc ngăn ngừa sự phân hủy của hydroperoxides thành các gốc tự do [29,30]. Hàm lượng phenol trong các mô khác nhau 195-215 (mg / 100gm) tương ứng. Sàng lọc tất cả những mẫu thực vật tiết lộ rằng số lượng phenol cao hơn ở các mẫu methanol so với tất cả các mẫu chiết xuất thực vật khác (Table2). Số tiền tối đa của phenol đã được quan sát ở trong ống nghiệm mẫu trong khi; mức thấp hơn được quan sát thấy ở trong các mẫu vivo.
DPPH Assay
DPPH triệt thường được sử dụng như một chất nền để đánh giá hoạt động chống oxy hóa; nó là một gốc tự do ổn định mà có thể chấp nhận một điện tử hoặc hydrogen triệt để trở thành một phân tử ổn định [31]. Việc giảm DPPH triệt được xác định bằng việc giảm hấp thu của nó gây ra bởi chất chống oxy hóa ở 517nm. Nồng độ của mẫu ở đó tỷ lệ ức chế đạt 50% là giá trị IC50 của nó. IC50 giá trị tiêu cực liên quan đến các hoạt động chống oxy hóa, vì nó thể hiện số lượng chất chống oxy hóa cần thiết để làm giảm nồng độ cực đoan của nó bằng 50%. Việc hạ thấp giá trị IC 50, cao hơn là các hoạt động chống oxy hóa của các mẫu thử nghiệm. Trong nghiên cứu, chiết xuất khác nhau của Phyllanthus amarus Schum.and Thonn cho thấy tiềm năng miễn phí - hoạt động nhặt rác triệt để. Các hoạt động chống oxy hóa của các hợp chất cá nhân, hiện tại trong các chất chiết xuất có thể phụ thuộc vào các yếu tố cấu trúc, chẳng hạn như số lượng phenolic, hydroxyl hoặc nhóm methoxyl, flavone hydroxyl, nhóm keto, nhóm carboxylic miễn phí và đặc điểm cấu trúc khác [32,33]. Nó đã được chứng minh rằng tác động nhặt rác trên DPPH tăng cấp tiến mạnh với nồng độ ngày càng tăng của các mẫu và tiêu chuẩn đến một mức độ nhất định [34] .và do đó phụ thuộc rất nhiều vào nồng độ chiết xuất [35]. Trong nghiên cứu này, kết quả cho thấy cao methanol trong ống nghiệm trồng P.amarus mẫu trưng bày hoạt động có ý nghĩa với nồng độ thấp nhất trong IC50 (Hình 3. - 8). Giá trị IC50 dao động từ 55 - 200 ( μ g / mg) .Ascorbic axit được sử dụng như là tiêu chuẩn với giá trị IC50 của 57 μ . g / mg
Tương tự như vậy, việc sử dụng axit ascorbic là một tiêu chuẩn để xác định các giá trị IC50 của các chiết xuất được tìm thấy được sử dụng trong nhiều loài thực vật như Psilanthus travancorensis (Wt. & Arn.) Leroy [36], Ocimum canum, Ocimum adscendens, tuyến ức vulgaris và leucas linifolia [37] tương ứng.
Có một mức độ rộng của biến đổi giữa các hợp chất phenolic khác nhau về hiệu quả của họ như là chất chống oxy hóa. Các hoạt động chống oxy hóa khác nhau của chất chiết xuất phenolic giàu các hợp chất phenolic có thể là do sự khác biệt về giải nén dung môi như các hoạt động chống oxy hóa phụ thuộc vào loại và phân cực của dung môi, các thủ tục ly giải nén, độ tinh khiết của các hợp chất hoạt động, cũng như các hệ thống thử nghiệm [ 38,39]. Trong thí nghiệm này, thứ tự của tổng hàm lượng phenol được ghi theo thứ tự của In vitro methanol> in vivo methanol> In vitro ethanol> in vivo ethanol> In vitro ether dầu khí> in vivo ether dầu khí và cho các hoạt động chống oxy hóa quan trọng, cùng một trật tự đã được quan sát theo sau tức, In vitro methanol> in vivo methanol> In vitro ethanol> in vivo ethanol> In vitro ether dầu khí> in vivo ether dầu khí (Hình 9).. Trong nghiên cứu này nó được quan sát thấy rằng các nhà máy in vitro chiết xuất hiện các số tiền cao hơn nội dung phenol so với chiết xuất của mình trong cơ thể. Hàm lượng phenol trong in vitro cho thấy chiết xuất methanol số tiền cao nhất của nội dung phenol tức là 212,67 mg / 100gm tiếp theo trong cơ thể mẫu của cùng một chiết xuất tức là 210,45 mg / 100gm. Hoạt động chống oxy hóa cao hơn rất nhiều trong việc chuẩn bị cồn đã được giả định rõ ràng, là có ích hơn là một dung dịch nước trong cách tiếp cận y tế [40]. Phần trăm cao năng suất và giá trị cao về nội dung phenol trong dịch chiết methanol cho thấy thành phần phenolic phải chịu trách nhiệm đối với tài sản đó [41]. Phát hiện này được inagreement với các dữ liệu của [42,43]. Một mối tương quan tích cực giữa tổng hàm phenolic và các hoạt động chống oxy hóa có thể có mặt trong thí nghiệm. Mối tương quan giữa tổng hàm phenolic và khả năng chống oxy hóa trong các mẫu thực vật có thể nhờ sự hiện diện của các yếu tố sau đây, đó là có thể là do sự hiện diện của các hợp chất phenolic hoặc polyphenol hay flavonoids hoặc tannin