Sequencing of Amplified DNA Fragmen

Sequencing of Amplified DNA Fragments. The designed primers were used to amplify and sequence DNA fragments from pooled porcine genomic DNA. The two DNA pools consisted of either 20 Ehuralien or 20 Landrace samples. For each mix the DNA was prepared from blood samples. Once DNA fragments had been cleanly amplified, the fragments were sequenced using an ABI 377 automated sequencer located at the Guelph Molecular Supercentre, University of Guelph. The sequences obtained from the Ehuralien and Landrace pooled DNA samples were compared for any polymorphisms and intron/exon borders were determined.
Genotyping of Animals. Within exon 11 a single nucleotide polymorphism (a T/C substitution) was identified. The PCR-RFLP technique was determined to be the most effective method of genotyping animals for the polymorphism. The restriction enzyme Rsa1 was identified to be able to cleave the DNA if a cytosine base is present in place of thymine, as shown in Figure 1. Restriction digestions were carried out at 37 oC for 3 hours.

Kết quả (Việt) 1:

Xác định trình tự DNA khuếch đại mảnh. Chất nền, mồi được thiết kế được sử dụng để khuyếch đại và trình tự DNA mảnh vỡ từ những DNA porcine gen. Hai hồ bơi DNA bao gồm 20 Ehuralien hoặc 20 Landrace mẫu. Cho mỗi kết hợp DNA đã được chuẩn bị từ mẫu máu. Khi DNA mảnh vỡ đã được khuếch đại sạch, các mảnh vỡ được trình tự bằng cách sử dụng một sequencer ABI 377 tự động nằm ở Guelph phân tử Supercentre, đại học Guelph. Trình tự thu được từ Ehuralien và Landrace những mẫu DNA đã được so sánh cho bất kỳ polymorphisms và intron/exon biên giới được xác định.Gen của động vật. Trong exon 11 một đa hình nucleotide duy nhất (một thay thế T/C) đã được xác định. Kỹ thuật RFLP Đảng Cộng sản Romania đã được xác định là phương pháp hiệu quả nhất của gen động vật cho đa hình. Enzyme giới hạn Rsa1 đã được xác định để có thể tách các DNA nếu một cơ sở cytosine có mặt tại chỗ của thymine, như minh hoạ trong hình 1. Hạn chế digestions đã được thực hiện tại 37 oC cho 3 giờ.

Kết quả (Việt) 2:

Giải mã bộ gen DNA Amplified Fragments. Các mồi thiết kế đã được sử dụng để khuếch đại và các mảnh vỡ DNA chuỗi từ gộp DNA của bộ gen lợn. Hai hồ DNA gồm cả 20 Ehuralien hoặc 20 mẫu Landrace. Đối với mỗi trộn DNA đã được chuẩn bị từ các mẫu máu. Một khi các mảnh DNA đã được khuếch đại sạch sẽ, các mảnh vỡ đã được lập trình tự sử dụng một ABI 377 sequencer tự động đặt tại Guelph Molecular Supercentre, Đại học Guelph. Các trình tự thu được từ các Ehuralien và Landrace gộp các mẫu DNA được so sánh với bất kỳ đa hình và biên giới intron / exon được xác định.
định kiểu gen của động vật. Trong vòng 11 exon một đa hình đơn nucleotide (thay thế một T / C) đã được xác định. Kỹ thuật PCR-RFLP đã được xác định là phương pháp hiệu quả nhất của kiểu gen động vật cho đa hình. Các enzyme hạn chế Rsa1 đã được xác định để có thể tách những DNA nếu một cơ sở cytosine có mặt ở vị trí của thymine, như thể hiện trong hình 1. Hạn chế phá mẫu được thực hiện ở 37 oC trong 3 giờ.