The potential of the CRISPR/Cas9 sy

The potential of the CRISPR/Cas9 system to induce off-target editing of the human genome has been a matter of concern [15, 69]. Even though our CRISPR-expressing cells continuously expressed the CRISPR/Cas9 system for several weeks, we did not identify any obvious off-target activity at the top three predicted off-target sites for the nine most potent gRNAs. However, it remains possible that these gRNAs do induce editing at other genomic sites. Clearly, if the CRISPR/Cas9 system would be applied to combat herpesviruses in a clinical setting, the potential off-target activity should be reduced to an absolute minimum. Much progress has been made to limit CRISPR/Cas9 off-target activity. For example, Ran et al. describe the use of paired gRNAs in combination with a Cas9 mutant that can only induce nicking in the dsDNA. NHEJ will only occur when two successful gRNA-directed cuts occur in close proximity [70]. Another study describes the use of tru-gRNAs, where shortened gRNAs retain their potent on-target activity, but show much reduced off-target editing [71]. A combination of these two approaches may further reduce the (already limited) off-target activity of the CRISPR/Cas9 system. Another strategy is to engineer Cas9 derivatives by mutagenesis that have reduced off-targeting potential, yet retain their on-targeting activity [72–74]. Alternatively, as many Cas9 endonuclease variants exist in nature, it is likely that new variants will be identified that hold potent on-target, yet low off-target activity. A combination of these approaches will further reduce the (already limited) off-target activity of the CRISPR/Cas9 system.

Kết quả (Việt) 1:

Tiềm năng của hệ thống CRISPR/Cas9 gây ra mục tiêu chỉnh sửa của bộ gen của con người đã là một vấn đề quan tâm [15, 69]. Mặc dù chúng tôi bày tỏ CRISPR tế bào liên tục thể hiện hệ thống CRISPR/Cas9 cho một vài tuần, chúng tôi đã không xác định bất kỳ hoạt động ngoài khơi mục tiêu rõ ràng lúc đầu ba dự đoán ra mục tiêu trang web cho gRNAs mạnh nhất chín. Tuy nhiên, nó vẫn có thể có những gRNAs gây ra biên tập tại các trang web khác của gen. Rõ ràng, nếu hệ thống CRISPR/Cas9 sẽ được áp dụng để chiến đấu herpesviruses trong một thiết lập lâm sàng, các hoạt động ngoài khơi mục tiêu tiềm năng nên được giảm đến một tối thiểu tuyệt đối. Nhiều tiến bộ đã được thực hiện để giới hạn CRISPR/Cas9 chệch mục tiêu hoạt động. Ví dụ, Ran et al. Mô tả việc sử dụng kết hợp gRNAs kết hợp với một người đột biến Cas9 chỉ có thể gây ra nicking trong dsDNA. NHEJ sẽ chỉ xảy ra khi hai thành công gRNA đạo diễn cắt giảm xảy ra gần [70]. Một nghiên cứu mô tả việc sử dụng các tru-gRNAs, nơi giữ lại ngắn hơn gRNAs của họ hoạt động mạnh trên mục tiêu, nhưng Hiển thị giảm nhiều chệch mục tiêu chỉnh sửa [71]. Sự kết hợp của hai cách tiếp cận này có thể tiếp tục giảm các hoạt động ngoài khơi mục tiêu (đã giới hạn) của hệ thống CRISPR/Cas9. Một chiến lược là kỹ sư dẫn xuất Cas9 bởi mutagenesis mà đã giảm giảm mục tiêu tiềm năng, nhưng vẫn giữ lại hoạt động trên nhắm mục tiêu của họ [72-74]. Ngoài ra, như các biến thể endonuclease Cas9 nhiều tồn tại trong tự nhiên, nó cũng có khả năng rằng phiên bản mới sẽ được xác định giữ mạnh về mục tiêu, nhưng ít ra mục tiêu hoạt động. Sự kết hợp của các phương pháp tiếp cận sẽ tiếp tục giảm các hoạt động ngoài khơi mục tiêu (đã giới hạn) của hệ thống CRISPR/Cas9.

Kết quả (Việt) 2:

Tiềm năng của hệ thống CRISPR / Cas9 để kích thích off-mục tiêu sửa đổi của bộ gen người đã là một vấn đề quan tâm [15, 69]. Mặc dù tế bào CRISPR diễn đạt của chúng tôi liên tục bày tỏ CRISPR hệ thống / Cas9 trong vài tuần, chúng tôi đã không xác định bất kỳ rõ ràng hoạt động off-mục tiêu ở phía trên ba dự đoán các trang ngoài mục tiêu cho chín gRNAs mạnh nhất. Tuy nhiên, nó vẫn có thể những gRNAs làm gây ra chỉnh sửa tại các địa điểm di truyền khác. Rõ ràng, nếu CRISPR / hệ thống Cas9 sẽ được áp dụng để chống herpesviruses trong một thử nghiệm lâm sàng, các hoạt động tiềm năng off-mục tiêu nên được giảm đến mức tối thiểu. nhiều tiến bộ đã được thực hiện để hạn chế CRISPR / Cas9 off-mục tiêu hoạt động. Ví dụ, Ran et al. mô tả việc sử dụng gRNAs cặp kết hợp với một đột biến Cas9 mà chỉ có thể gây nicking trong dsDNA. NHEJ sẽ chỉ xảy ra khi hai vết cắt gRNA đạo diễn thành công xảy ra gần [70]. Một nghiên cứu khác mô tả việc sử dụng các tru-gRNAs, nơi gRNAs rút ngắn giữ lại hoạt động trên mục tiêu tiềm năng của họ, nhưng cho thấy giảm nhiều off-mục tiêu chỉnh sửa [71]. Một sự kết hợp của hai phương pháp này có thể tiếp tục giảm (đã được giới hạn) off-mục tiêu hoạt động của hệ thống CRISPR / Cas9. Một chiến lược khác là để thiết kế các dẫn xuất Cas9 bởi đột biến đã giảm đi mục tiêu tiềm năng, nhưng giữ lại của họ vào mục tiêu hoạt động [72-74]. Ngoài ra, như nhiều biến thể endonuclease Cas9 tồn tại trong tự nhiên, có khả năng là biến thể mới sẽ được xác định mà giữ mạnh vào mục tiêu, nhưng lại chứa ít hoạt động off-mục tiêu. Một sự kết hợp của các phương pháp này sẽ tiếp tục giảm (đã được giới hạn) off-mục tiêu hoạt động của hệ thống CRISPR / Cas9.