7.1.2. Dilution methodsIn the dilut

7.1.2. Dilution methods
In the dilution methods, test compounds are mixed with a suitable medium that has previously been inoculated with the test organism. It can be carried out in liquid as well as in solid media and growth of the micro-organism can be measured in a number of ways. In the agar-dilution method, the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) is defined as the lowest concentration able to inhibit any visible microbial growth. In liquidor broth-dilution methods, turbidity and redox-indicators are most frequently used. Turbidity can be estimated visually or obtained more accurately by measuring the optical density at 405 nm. However, test samples that are not fully soluble may interfere with turbidity readings, emphasizing the need for a negative control or sterility control, i.e. extract dissolved in blank medium without micro-organisms. The liquid-dilution method also allows determination whether a compound or extract has a cidal or static action at a particular concentration. The minimal bactericidal or fungicidal concentration (MBC or MFC) is determined by plating-out samples of completely inhibited dilution cultures and assessing growth (static) or no-growth (cidal) after incubation. At present, the redox indicators MTT and resazurin are frequently used to quantify bacterial (Eloff, 1998; Gabrielsonet al., 2002) and fungal growth (Jahn et al., 1995; Pelloux-Prayer et al., 1998). Resazurin has the advantage not to precipitate upon reduction, allowing direct reading. Easy and reproducible measurements can be obtained with a microplate-reader, but visual reading may also be used in cases where spectrophotometry is not available. Another assay exploits the principle that only living cells convert fluorescein-diacetate to fluorescein, producing a yellowish-green fluorescescence under UV light (Chand et al., 1994). However, it requires a more significant investment in equipment and validation is not easy:
Sabouraud liquid medium can quench up to 95% of fluorescence, and sodium phosphate buffers hydrolyse fluorescein-diacetate. fluorescent constituents present in crude plant extracts may also interfere (Clarke et al., 2001). In general, dilution methods are appropriate for assaying polar and non-polar extracts or compounds for determination of MIC and MBC/MFC-values. Using redox indicators or turbidimetric endpoints, dose–response effects allow calculation of IC50- and IC90-values, which are the concentrations required to produce 50 and 90% growth inhibition.
7.1.3. Bio-autographic methods Bio-autography localizes antimicrobial activity on a chromatogram using three approaches: (a) direct bio-autography,where the micro-organism grows directly on the thin-layerchromatographic (TLC) plate, (b) contact bio-autography, where the antimicrobial compounds are transferred from the TLC plate to an inoculated agar plate through direct contact and (c) agaroverlay bio-autography, where a seeded agar medium is applied directly onto the TLC plate (Hamburger and Cordell, 1987;
Rahalison et al., 1991). Despite high sensitivity, its applicability is limited to micro-organisms that easily grow on TLC plates. Other problems are the need for complete removal of residual low volatile solvents, such asn-BuOH, trifluoroacetic acid and ammonia and the transfer of the active compounds from the stationary phase into the agar layer by diffusion. Because bio-autography allows localizing antimicrobial activities of an extract on the chromatogram, it supports a quick search for new antimicrobial agents through bioassay-guided isolation. However, this technique is not directly applicable in current high capacity screening designs.
7.2. Specific recommendations on antibacterial andantifungal screening

Kết quả (Việt) 2:

7.1.2. Phương pháp pha loãng
Trong phương pháp pha loãng, các hợp chất thử nghiệm được trộn với một môi trường thích hợp mà trước đó đã được tiêm vi khuẩn thử nghiệm. Nó có thể được thực hiện trong chất lỏng cũng như trong môi trường rắn và tăng trưởng của các vi sinh vật có thể được đo bằng một số cách. Trong phương pháp agar-tố pha loãng, nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) được định nghĩa là nồng độ thấp nhất có thể ngăn cản sự phát triển của vi sinh vật có thể nhìn thấy. Trong các phương pháp canh pha loãng liquidor, độ đục và oxi hóa khử chỉ số được sử dụng nhiều nhất. Độ đục có thể được ước tính một cách trực quan hoặc thu được chính xác hơn bằng cách đo mật độ quang ở 405 nm. Tuy nhiên, các mẫu thử nghiệm mà không phải là hoàn toàn hòa tan có thể can thiệp với các bài đọc đục, nhấn mạnh sự cần thiết cho một điều khiển âm hoặc kiểm soát vô sinh, tức là chiết xuất hòa tan trong môi trường trống mà không có vi sinh vật. Phương pháp lỏng pha loãng cũng cho phép xác định liệu một hợp chất chiết xuất hoặc có một hành động cidal hoặc tĩnh ở nồng độ cụ thể. Các khuẩn hoặc diệt nấm nồng độ tối thiểu (MBC hoặc MFC) được xác định bằng cách mạ-ra mẫu của các nền văn hóa pha loãng hoàn toàn bị ức chế và đánh giá sinh trưởng (tĩnh) hoặc không có tăng trưởng (cidal) sau khi ủ. Hiện nay, các chỉ số oxi hóa khử MTT và resazurin thường được sử dụng để xác định số lượng vi khuẩn (Eloff, 1998;., 2002 Gabrielsonet al) phát triển của nấm và (. Jahn et al, 1995;. Pelloux-Prayer et al, 1998). Resazurin có lợi thế không kết tủa sau khi giảm, cho phép đọc trực tiếp. Đo lường dễ dàng và tái sản xuất có thể đạt được với một microplate-reader, nhưng đọc trực quan cũng có thể được sử dụng trong trường hợp pháp quang phổ là không có sẵn. Khảo nghiệm khác khai thác nguyên tắc rằng các tế bào chỉ sống chuyển đổi fluorescein-diacetate để fluorescein, sản xuất một fluorescescence vàng-xanh dưới ánh sáng tia cực tím (Chand et al., 1994). Tuy nhiên, nó đòi hỏi một sự đầu tư đáng kể trong thiết bị và xác nhận là không dễ dàng:
Sabouraud môi trường lỏng có thể làm dịu cơn lên đến 95% của huỳnh quang, và bộ đệm sodium phosphate thủy phân fluorescein-diacetate. thành phần huỳnh quang hiện diện trong nhà máy chiết xuất dầu thô cũng có thể can thiệp (Clarke et al., 2001). Nói chung, phương pháp pha loãng thích hợp trong việc phân tích chiết xuất hoặc hợp chất phân cực và không phân cực để xác định MIC và MBC / MFC-giá trị. Sử dụng chỉ số oxi hóa khử hoặc thiết bị đầu cuối turbidimetric, hiệu ứng đáp ứng liều cho phép tính toán của IC50- và IC90-giá trị, mà là nồng độ cần thiết để tạo sự ức chế sự tăng trưởng 50 và 90%.
7.1.3. Phương pháp sinh học tự tay mình viết Bio-autography localizes hoạt tính kháng khuẩn trên một sắc bằng cách sử dụng ba phương pháp: (a) trực tiếp sinh học autography, nơi mà các vi khuẩn phát triển trực tiếp trên mỏng layerchromatographic (TLC) tấm, (b) liên hệ sinh học autography, nơi mà các hợp chất kháng sinh được chuyển từ tấm TLC để một tấm thạch cấy thông qua tiếp xúc trực tiếp và (c) agaroverlay bio-autography, nơi một môi trường thạch hạt giống được áp dụng trực tiếp lên tấm TLC (Hamburger và Cordell, 1987;
Rahalison et al. , 1991). Mặc dù có độ nhạy cao, ứng dụng của nó được giới hạn để vi sinh vật dễ dàng phát triển trên tấm TLC. Vấn đề khác là sự cần thiết phải loại bỏ hoàn toàn các dung môi dễ bay hơi còn thấp, chẳng hạn ASN-BuOH, axit trifluoroacetic và ammonia và việc chuyển giao các hợp chất hoạt từ các pha tĩnh vào lớp thạch bằng cách khuếch tán. Bởi vì sinh autography cho phép khoanh vùng hoạt động kháng khuẩn của một trích trên sắc ký đồ, nó hỗ trợ tìm kiếm nhanh cho các kháng sinh mới thông qua xét nghiệm sinh học-hướng dẫn cách ly. Tuy nhiên, kỹ thuật này là không trực tiếp được áp dụng trong các thiết kế chiếu công suất cao hiện nay.
7.2. Khuyến nghị cụ thể về chiếu andantifungal kháng khuẩn